內含肽融合標簽介導的人乙醛脫氫酶2基因原核表達

劉向宇，尹杰超，李景鵬（東北農業大學生命科學學院，哈爾濱　150030）

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內含肽融合標簽介導的人乙醛脫氫酶2基因原核表達

劉向宇，尹杰超，李景鵬*
（東北農業大學生命科學學院，哈爾濱150030）

摘要：為獲得高活性重組人乙醛脫氫酶2（ALDH2）重組蛋白，研究通過PCR獲得ALDH2基因，先后構建克隆和表達載體pGEM-ALDH2和pTYB11-ALDH2。轉化的陽性重組菌經IPTG誘導，SDS-PAGE顯示融合蛋白獲得大量表達。通過正交試驗對表達條件優化設計，結果表明，誘導OD值0.3，30℃，IPTG濃度1.0 mmol·L-1，誘導表達4 h為最優表達條件。由于融合蛋白以包涵體形式存在，經變性、復性，使用IMPACTTM-CN蛋白純化系統，經內含肽標簽蛋白自裂解洗脫、純化，獲得僅含有幾個載體氨基酸的ALDH2蛋白，蛋白濃度為0.045 mg·mL-1。純化的ALDH2蛋白比活力為462 U·mg-1。

關鍵詞：人乙醛脫氫酶2；內含肽；重組表達；包涵體；IMPACTTM-CN蛋白純化系統

劉向宇,尹杰超,李景鵬.內含肽融合標簽介導的人乙醛脫氫酶2基因原核表達[J].東北農業大學學報, 2016, 47(1): 38-44.

Liu Xiangyu, Yin Jiechao, Li Jingpeng. Expression of recombinant human aldehyde dehydrogenase 2 by using intein induced expression system[J]. Journal of Northeast Agricultural University, 2016, 47(1): 38-44. (in Chinese with English abstract)

乙醛脫氫酶（Aldehyde dehydrogenase, ALDH）是人體內乙醇脫氫酶系重要組成部分，和乙醇脫氫酶（Alcohol dehydrogenase，ADH）一起，共同催化乙醇在人體內分解代謝[1]。乙醛脫氫酶2（AL?DH2）將乙醛轉化為乙酸，最終分解為二氧化碳和水，是目前已知的代謝乙醛催化效率最高的限速酶[2]。ALDH2基因具有高度遺傳多態性，中國和其他亞洲國家中，35%~40%個體缺乏ALDH2，更易發生酒精中毒[3]。高活性外源乙醛脫氫酶的補充可彌補內源性乙醛脫氫酶不足，商品化ALDH2主要從動物肝臟和胰腺中分離、提取，價格較高，難以大規模生產[4]。獲得高活力的ALDH2成為研究熱點。通過將ALDH2基因融合到pET32a中，黃娟等在大腸桿菌中表達重組ALDH2蛋白，呈包涵體形式表達[5]；……