光學顯微鏡下非糜爛性反流病食管遠端上皮細胞間隙的變化

陳文科+鄒兵+鄭愛萍+郭海

【摘要】 目的 通過光學顯微鏡（簡稱光鏡）對非糜爛性反流病（NERD）患者食管鱗狀上皮細胞間隙增寬（DIS）進行研究， 探討食管鱗狀上皮細胞間隙的變化情況及意義。方法 NERD患者（25例， NERD組）和正常對照者（20 例， 正常對照組）作為研究對象行胃鏡檢查， 并在食管遠端齒狀線上方2 cm處取一塊黏膜組織， 常規HE染色， 在光鏡下觀察上皮細胞間隙情況并采集圖像進行測量。結果 NERD組食管鱗狀上皮細胞的平均細胞間隙、最小細胞間隙、最大細胞間隙均大于正常對照組， 差異有統計學意義（P<0.01）。結論 光鏡測量可作為研究NERD食管鱗狀上皮細胞間隙增寬的一種簡單、實用方法， 對探討細胞間隙增寬在NERD發病機制和臨床診斷中的意義具有重要作用。

【關鍵詞】 非糜爛性反流病；細胞間隙；光學顯微鏡

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.07.010

胃食管反流病（gastroesopheal reflux disease， GERD）是消化科門診最常見的疾病之一， 根據胃鏡下表現分為反流性食管炎、非糜爛性反流病（non-erosive reflux disease， NERD）及Barrett食管。NERD是GERD的主要類型， 約占GERD的70%。NERD由于內鏡下食管黏膜無破損表現， 臨床診斷相對困難。有研究表明， NERD患者雖然在內鏡下無黏膜破損等異常病變， 但顯微鏡下可觀察到細胞間隙增寬（dilated intercellular space， DIS） 等微小病變[1]。作者前期采用透視電鏡對NERD患者遠端食管上皮細胞間隙的變化進行了研究， 證實NERD患者食管鱗狀上皮細胞間隙較正常對照者明顯增寬[2]。本實驗通過光鏡對NERD患者食管遠端鱗狀上皮細胞間隙進行了研究， 從不同角度了解DIS的變化情況及意義， 現報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2013年6月～2014年6月到本院消化內科就診并診斷為NERD的患者25例（NERD組）， 年齡20～70歲。NERD診斷標準：具有3個月以上反酸、燒心等反流癥狀， 胃鏡檢查食管黏膜無破損， 食管24 h pH值監測陽性和（或）質子泵抑制劑（PPI）試驗陽性。正常對照組為無反流癥狀、胃鏡檢查食管未見異常病變的健康體檢者20例。排除標準：上消化道手術史、消化性潰瘍、糖尿病、硬皮病、惡性腫瘤、妊娠及哺乳期婦女， 嚴重心、肺、肝、腎功能障礙者， 入選前2周內服用過抑酸藥物者。正常對照組男8例， 女12例， 平均年齡（30.2±10.1）歲；NERD組男12例， 女13例， 平均年齡（35.0±14.0）歲。兩組性別、年齡比較差異無統計學意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 研究方法 食管遠端鱗狀上皮細胞間隙測量：研究對象胃鏡檢查時在食管遠端齒狀線上方2 cm處活檢一塊黏膜組織， 黏膜組織取出后迅速置于10% 福爾馬林溶液固定， 然后經脫水、透明、浸蠟、包埋制成蠟塊， 切片后行HE染色。在光鏡下（×1000）觀察食管上皮細胞間隙情況并采集圖像， 應用圖像分析系統對基底上層細胞間隙進行測量。每例樣本測量10個細胞， 每個細胞連續測量10個細胞間隙， 計算每例樣本的細胞間隙均值。

1. 3 統計學方法 采用SPSS19.0統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數資料采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

NERD組食管鱗狀上皮細胞的平均細胞間隙、最小細胞間隙、最大細胞間隙均大于正常對照組， 差異具有統計學意義（P<0.01）。附圖1， 圖2。見表1。

3 討論

GERD是指胃內容物反流引起的不適癥狀和（或）并發癥的一種疾病， 臨床上主要表現為反流、燒心等癥狀。在歐美的發病率達到10%～20%[3， 4]。我國1996年上海和北京的GERD患病率調查結果為5.77%[5]， 廣東社區人群調查每周有燒心癥狀的患病率為6.2%[6]。NERD是GERD的主要類型， 由于內鏡下食管黏膜無破損表現， 臨床診斷相對困難。研究表明， NERD患者雖然在胃鏡下無明顯異常表現， 但顯微鏡下觀察存在食管黏膜上皮細胞間隙的增寬， 但多為定性和半定量研究。近年來， 有學者對食管鱗狀上皮細胞間隙的超微結構在透射電鏡下進行了定量研究， 發現GERD患者細胞間隙較對照者明顯增寬， 經PPI治療后細胞間隙隨著反流癥狀的改善亦減小或恢復正常， 因此提出DIS可作為NERD診斷的客觀結構指標[1， 7-9]。作者既往用透射電鏡也發現NERD患者食管下段細胞間隙較正常對照者明顯增寬。針對臨床上廣泛應用的光鏡能否對細胞間隙進行定量檢測， 國內學者崔榮麗等[10]將HE染色切片在光鏡下放大1000倍進行觀察， 發現光鏡下測量細胞間隙是可行的， 測量結果與電鏡測量數據比較具有較好的一致性。本研究結果顯示， NERD患者光鏡下食管鱗狀上皮細胞平均細胞間隙、最小細胞間隙、最大細胞間隙均較正常對照組明顯增寬， 與既往電鏡研究結果一致。細胞間隙增寬后通透性增加， 胃酸、胃蛋白酶、膽汁等損害因子進入上皮細胞并對其造成進一步損傷， 同時刺激神經末梢， 產生燒心等反流癥狀。電鏡檢測細胞間隙精確， 但設備昂貴， 操作復雜， 費用較高， 普通醫療機構不易開展， 難以在廣大醫療單位普及。光鏡在臨床上廣為應用， 通過光鏡對細胞間隙進行定量測量可在大多數醫療機構開展， 可作為研究NERD患者食管鱗狀上皮細胞間隙增寬的一種簡單、實用方法， 對探討細胞間隙增寬在NERD發病機制和臨床診斷中的意義具有重要作用。

參考文獻

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[收稿日期：2015-11-12]