Yes相關蛋白在婦科惡性腫瘤中的研究進展

周青峰，羅慧，朱雪瓊

（溫州醫科大學附屬第二醫院　婦產科，浙江　溫州　325027）

?

?綜 述?

Yes相關蛋白在婦科惡性腫瘤中的研究進展

周青峰，羅慧，朱雪瓊

（溫州醫科大學附屬第二醫院婦產科，浙江溫州325027）

Yes相關蛋白（YAP）是轉錄活化劑，可調節細胞增殖、誘導細胞分化、促進器官發育等。近年來研究表明，YAP在多種惡性腫瘤中特異性表達并參與調節癌細胞的多種生物學活性。本文就YAP在婦科惡性腫瘤進展中的表達，早期診斷、治療和預后評價中的作用進行綜述。

Yes相關蛋白；宮頸腫瘤；卵巢腫瘤；子宮內膜腫瘤；綜述文獻

Yes相關蛋白（Yes-associated protein，YAP）定位于染色體11q22，由氨基酸序列組成，該序列包含有TEA域轉錄因子（TEA domain transcription factors，TEAD），即WW域和C-末端反式激活域［1］。YAP是一種轉錄活化劑，為Hippo信號通路的主要組成部分，NDR激酶家族Lats1/2作為YAP的上游因子，可通過HXRXXS序列，包括YAP的絲氨酸127（Ser127）促使YAP發生磷酸化作用，從而抑制YAP的轉錄激活功能。上游因子的失活可使YAP在細胞核累積，促使其結合到TEAD，從而調節目標基因的表達［2］。YAP在調節細胞增殖、存活和分化，器官的發育、再生和干細胞生物學功能等方面起了關鍵性的作用。

研究表明，YAP在多種惡性腫瘤中表達異常，如結腸癌、肝癌、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、口腔鱗癌、成神經管細胞瘤、食管鱗癌等［3-5］，它的表達水平與腫瘤的發生、發展、轉移、侵襲及臨床預后有著密切的聯系。但關于YAP在婦科腫瘤中的研究并不多。本文對YAP在婦科惡性腫瘤中的研究進展進行綜述。

1　YAP在宮頸癌中的表達

1.1YAP在宮頸癌癌變中的表達變化 Liu等［6］采用免疫組織化學法檢測22例正常宮頸組織和120例宮頸鱗癌組織中YAP的表達，結果顯示YAP在正常宮頸上皮細胞不表達，在宮頸鱗癌組織中有30.8%的陽性表達，主要表達在細胞質。Xiao等［7］對宮頸上皮內瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）及宮頸癌組織進行回顧性研究，經免疫組織化學法檢測，發現YAP在慢性宮頸炎、CIN I、CIN I I、CIN I和宮頸鱗癌組織中的陽性表達率分別為10.0%（1/10）、22.4%（11/49）、83.6%（46/55）、85.3%（29/34）和93.8%（30/32），隨著CIN的進展，YAP表達逐漸增強。在慢性宮頸炎中YAP呈微弱表達，在CIN I級組織中呈強表達，主要集中在細胞質，但在宮頸鱗癌組織中表達最強，主要集中在細胞核。

采用聚合酶鏈反應檢測70例（包括10例慢性宮頸炎、13例CIN I、19例CIN I I、14例CIN I和14例宮頸鱗癌）組織中人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染情況，結果顯示57例組織HPV表達陽性，YAP在HPV陽性表達組織的陽性表達率為54.4%，明顯高于HPV陰性組織的表達率（為23.1%），相關分析提示YAP陽性表達與HPV感染有關，兩者結合可用來鑒別宮頸良性病變和癌前病變［7］。

1.2YAP與宮頸癌臨床病理系數的相關性 YAP在宮頸鱗癌細胞質中表達陽性率為30.8%，其在宮頸腺癌細胞質和細胞核均存在陽性表達，陽性率分別為45.2%和26.2%［6］。Xiao等［7］發現YAP在宮頸鱗癌不同分化的組織（4例宮頸角化型、21例大細胞非角化型和7例小細胞非角化型）中的陽性表達率分別為100.0%、95.2%和85.7%，但差異無統計學意義，表明YAP在宮頸鱗癌的表達與組織分化無關。Liu等［6］發現YAP在宮頸鱗癌細胞質的表達雖然與患者年齡、FIGO分期、腫瘤組織大小、基質浸潤深度、淋巴血管間隙浸潤和癌旁浸潤無關，但與組織學分級、淋巴結轉移和復發呈高度正相關。YAP在宮頸腺癌細胞質的高表達與組織學分級呈高度正相關，其在細胞核的表達與FIGO分期和淋巴血管間隙浸潤有關。1.3 YAP與宮頸癌預后的相關性 Liu等［6］發現在120例宮頸鱗癌中，患者5年總生存率和無病生存率分別為79.2%和79.1%，經Kaplan-Meier方法和秩和檢驗，發現細胞質中YAP高表達的患者總生存率和無病生存率分別為73.0%和68.5%，明顯低于YAP低表達的總生存率（為84.3%）和無病生存率（為83.7%），而單變量分析結果提示患者總生存率和無病生存率與YAP在細胞質中表達無關，提示YAP在宮頸鱗癌細胞質中表達高低與患者預后無關。在42例宮頸腺癌中，患者5年總生存率和無病生存率分別為65.4%和65.0%，單變量分析結果提示宮頸腺癌患者5年總生存率和無病生存率與細胞質中YAP的表達無關，而與其在細胞核中的表達相關。細胞核中YAP高表達的患者5年總生存率和無病生存率均為36.4%，低于YAP低表達的總生存率（為77.9%）和無病生存率（為77.5%），認為YAP在宮頸腺癌細胞核中高表達提示了患者的不良預后。

2　YAP在卵巢癌中的表達

2.1YAP在卵巢癌中的表達變化 Steinhardt等［8］采用免疫組織化學法檢測，發現YAP在正常卵巢上皮細胞表面的細胞質和基質細胞呈微量表達，在卵巢癌細胞質和細胞核呈強陽性表達。在正常卵巢組織中，YAP在細胞核表達占25.0%（3/12），在細胞質表達的占50.0%（6/12），但在卵巢漿液性囊腺癌組織中，YAP在細胞核的表達占98.0%（41/42），在細胞質的表達所占比例與其在細胞核的表達相同，提示YAP的表達可能與卵巢漿液性囊腺癌的發生存在相關性。He等［9］通過檢測42例正常卵巢組織和342例卵巢癌組織，發現YAP在正常卵巢組織幾乎無表達或呈低表達，但在卵巢癌組織的表達顯著提高，且主要表達在細胞核。Zhang等［10］同樣采用免疫組織化學法檢測YAP在284例卵巢癌組織的表達，結果顯示YAP在卵巢癌細胞核中高表達，占14.0%。金志紅等［11］也發現YAP表達于細胞核和細胞質。YAP在卵巢癌組織陽性表達率為61.8%（42/68），明顯高于良性卵巢腫瘤組織（10.5%，4/38）。王君等［12］的研究結果顯示，YAP在20例正常卵巢組織、20例良性上皮卵巢腫瘤和53例惡性上皮性卵巢腫瘤的陽性表達率分別為50.0%、65.0%、90.6%，隨著惡性程度增加，表達也增加。Fu等［5］發現在卵巢顆粒細胞癌組織中YAP信號強度及其陽性表達率均顯著高于正常卵巢組織，且主要表達在細胞核，提示YAP可能與卵巢顆粒細胞癌的發生發展也相關。

Cai等［13］采用免疫組織化學法檢測，發現YAP在正常卵巢組織和卵巢癌組織均存在陽性表達，且不同組織表達水平有差異；磷酸化YAP雖然在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織和卵巢癌組織均存在表達，但在卵巢癌組織的表達最低。Hall等［14］發現YAP和磷酸化YAP在7例正常卵巢上皮細胞中有5例低表達，YAP表達主要位于細胞核，而磷酸化YAP主要位于細胞質。Xia等［15］研究10例正常卵巢組織和106例卵巢癌組織中YAP和磷酸化YAP的表達，發現YAP主要在卵巢癌細胞核中高表達，占22.64%（24/ 106），但在正常卵巢組織中不表達，磷酸化YAP在卵巢癌組織陽性表達率為11.88%，其中YAP和磷酸化YAP同時在13例卵巢癌組織強表達，提示YAP與卵巢癌的發生發展相關。

2.2YAP與卵巢癌臨床病理系數的相關性 王君等［12］發現YAP在上皮性卵巢癌陽性表達與患者年齡、臨床分期及淋巴轉移無關，其在組織學分級G3中的陽性表達率（為97.1%）明顯高于G1-G2級（為77.8%），提示YAP在上皮性卵巢癌陽性表達與組織學分級相關。金志紅等［11］的研究結果顯示YAP在高分期和低分化的卵巢癌組織中的陽性表達率更高，而與其他病理參數無關，提示YAP的高表達與卵巢腫瘤的惡性程度正相關。He等［9］發現YAP的表達與腫瘤分級和病理類型（卵巢漿液性癌、黏液性癌、透明細胞癌和子宮內膜樣癌）無關，與Zhang等［10］研究結果一致，但與區域淋巴結轉移和遠處轉移高度相關［9］。但是Xia等［15］卻發現在卵巢癌4種主要病理類型中，YAP主要在卵巢漿液性囊腺癌和子宮內膜樣癌中呈強陽性表達。

2.3YAP對卵巢癌細胞生物學行為的影響

2.3.1YAP對卵巢癌細胞增殖的影響：將慢病毒介導的YAP shRNA下調卵巢癌EFO-21細胞中YAP的表達后，有學者［11］發現細胞增殖水平為55.83±3.56，明顯低于對照組的121.00±3.19，表明YAP表達降低后會導致卵巢癌細胞增殖的顯著減少，提示卵巢癌細胞中YAP通過促進腫瘤細胞增殖來發揮促癌基因功能。Zhang等［10］檢測YAP在8種漿液性上皮性卵巢癌細胞系的活性，篩選得到了低活性的OVCA432、OVCAR5和SKOV3細胞和高活性的OVCAR8細胞，接著將空載體、帶有野生型YAP、WW域突變的YAP和活化的YAP（YAP-S127A）載體分別轉染到3種低活性細胞中，結果顯示轉染空載體的OVCA432細胞生長較差，野生型YAP僅少量促進細胞在瓊脂上的生長，WW域突變的YAP對細胞無作用，而YAP-S127A增加了3種細胞克隆形成能力，分別為OVCA432細胞35倍、OVCAR5細胞2.4倍和SKOV3細胞1.6倍，接著將攜帶YAP-shRNA-2和YAP-shRNA-3的載體分別轉染OVCAR8細胞，發現YAP水平分別減少了35.0%和62.0%，轉染YAP-shRNA-2后細胞克隆數與對照組無顯著區別，而轉染YAP-shRNA-3后細胞克隆數與對照組相比減少了18.0%，提示YAP與上皮性卵巢癌細胞錨定非依賴方式生長是相關的。Xia等［15］研究卵巢癌不同細胞系中YAP表達及其作用，發現YAP在OVCAR8細胞高表達，在A2780細胞低表達。構建高表達有活性YAP 的A2780細胞后，發現細胞增殖活性增高，克隆形成數增多。但構建表達無活性YAP的OVCAR8細胞后，發現細胞活性降低，克隆形成數減少。進一步進行體內試驗，將構建好的A2780細胞皮下注射到4周大小的裸鼠，3個星期后觀察到腫瘤明顯增大，提示YAP可促進卵巢癌細胞增殖。同時發現，YAP可使卵巢癌細胞克服接觸抑制而表現出增殖優勢。Fu等［5］敲除YAP后，發現不僅抑制了卵巢顆粒細胞中癌細胞的增殖，還可以通過調節細胞的肌動蛋白使細胞形狀變為錘形。

2.3.2YAP對卵巢癌細胞凋亡的影響：金志紅等［11］將慢病毒介導的YAP shRNA下調卵巢癌EFO-21細胞中YAP的表達，采用流式細胞術檢測，發現感染YAP shRNA后細胞凋亡率為（32.75±4.76）%，高于對照組的（8.75±0.15）%，表明敲除YAP的表達導致卵巢癌細胞凋亡比率顯著增加，提示卵巢癌中YAP可抑制腫瘤細胞凋亡。Wang等［16］將帶有YAP2的質粒轉染到卵巢癌A2780細胞，經流式細胞儀檢測，發現細胞經順鉑作用24 h后，細胞死亡率降低，提示YAP2可促進卵巢癌細胞的存活。同時發現，脫磷酸YAP可提高其促細胞生存能力。將腺病毒攜帶的YAP2 shRNA轉染到A2780細胞，結果顯示YAP2表達下降后，DNA損傷誘導的細胞死亡增加。

2.3.3YAP對卵巢癌細胞侵襲和轉移的影響：Fu等［5］分別構建了卵巢顆粒細胞癌KGN-YAP細胞和KGN-YAPS127A細胞，經Transwell小室檢測，結果顯示KGN-YAP組細胞的遷移率明顯高于對照組，但低于KGN-YAPS127A組，提示YAP可促進卵巢顆粒細胞癌細胞的遷移。Xia等［15］研究發現YAP在卵巢癌OVCAR8細胞高表達，在A2780細胞低表達，使A2780細胞高表達有活性的YAP后，經劃痕試驗和Transwell試驗，發現細胞遷移速度變快。而OVCAR8細胞表達無活性YAP后，細胞遷移速度變慢，表明YAP可促進卵巢癌細胞遷移。在體內試驗中，構建穩定表達無活性YAP和熒光素酶的卵巢癌高轉移細胞系HO8910-PM細胞后，通過尾靜脈注射裸鼠，2周后在動物成像系統中發現肺轉移，移植瘤大小小于注入HO8910細胞的對照組，經免疫組織化學法檢測到移植瘤中存在CA125和YAP的表達。接種后期，發現實驗組2只裸鼠肝臟出現轉移，而對照組10只裸鼠肝臟全部出現轉移，且實驗組裸鼠轉移結節遠少于對照組，提示抑制YAP的活性后可以延緩卵巢癌細胞的轉移。Zhang等［10］采用Transwell小室檢測，發現卵巢癌OVCA432細胞轉染YAP-S127A后，遷移力是對照組的4.3倍，侵襲力為對照組的2倍。但卵巢癌OVCAR8細胞轉染YAP-shRNA后，細胞遷移力和侵襲力均明顯下降，該作用與YAP調節上皮黏附蛋白的表達相關。

2.4YAP與卵巢癌化療的相關性 Xia等［15］研究YAP表達與卵巢癌細胞順鉑和紫杉醇敏感性的相關性，采用四甲基偶氮唑鹽（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法檢測，結果發現高表達YAP的細胞對順鉑和紫杉醇均表現為藥物抵抗作用，相反的，表達無活性YAP的細胞則對藥物敏感性增加。同時在體內試驗中，在裸鼠皮下注射穩定表達無活性YAP的A2780CP細胞1周后，將順鉑注入裸鼠尾部靜脈，每隔3 d注射1次，在第5周觀察到裸鼠身上移植瘤的大小明顯小于對照組，且細胞增殖因子Ki67的表達也低于對照組，結果表明YAP的活性與化療藥物耐藥相關。Zhang等［10］同樣采用MTT法檢測，發現6.6 μmol/L、13.2 μmol/L順鉑和5.0 nmol/L紫杉醇分別作用轉染了YAP-S127A的OVCA432細胞48 h后，3組細胞存活率均升高，經Western blot法檢測，結果顯示凋亡相關因子聚腺苷二磷酸核糖聚合酶表達減少。此外，將攜帶有YAP-shRNA-2和YAP-shRNA-3的質粒分別轉染到OVCAR8細胞，經MTT法檢測，順鉑（6.6、13.2 μmol/L）和紫杉醇（2.5、5.0 nmol/L）分別作用細胞48 h后，細胞生存力均下降，提示YAP使卵巢癌OVCA432和OVCAR8細胞對順鉑和紫杉醇產生化療抵抗，通過減少YAP的表達可增加卵巢癌細胞對化療藥物的敏感性。

2.5YAP與卵巢癌預后的相關性 有學者［9］運用Kaplan-Meier法評估，發現YAP的高表達與卵巢癌患者不良預后有關。Zhang等［10］則根據免疫組織化學染色結果將YAP在卵巢癌細胞核的表達分為高表達組和低表達組，結果發現YAP細胞核高表達組卵巢癌患者無進展生存率下降。Xia等［15］的研究結果也發現，卵巢癌患者不良預后與YAP的高表達有關，但與YAP在細胞的定位無關，高表達YAP的卵巢癌患者存活率遠遠下降。Hall等［14］通過Kaplan-Meier法來研究YAP的表達與卵巢癌患者預后的關系，結果發現雖然細胞質表達的YAP與細胞核表達的磷酸化YAP與患者不良預后無關，但是細胞核YAP高表達以及細胞質磷酸化YAP的低表達均與患者的不良預后有關，同時結合二者的表達后發現其與患者的不良預后高度相關。

3　YAP在子宮內膜癌中的表達

3.1YAP在不同類型子宮內膜癌中的表達 Tsujiura等［17］采用免疫組織化學法檢測YAP在子宮內膜癌的表達，結果發現YAP在細胞核和細胞質中均呈陽性表達，在1型子宮內膜癌中，細胞核YAP高表達占55.0%（66/120），細胞質YAP高表達的占68.3% （82/120）；在2型子宮內膜癌中，細胞核YAP高表達的占90.0%（27/30），細胞質YAP高表達的占63.3% （19/30），提示YAP在子宮內膜癌中高表達。

3.2YAP與子宮內膜癌臨床病理系數的相關性Tsujiura等［17］研究發現細胞質YAP的表達與1型和2型子宮內膜癌臨床病理系數均不相關。而細胞核YAP的表達雖然與2型子宮內膜癌臨床病理系數無關，但是細胞核YAP的高表達與1型子宮內膜癌低分化、高病理分期、淋巴血管間隙浸潤、患者術后復發和轉移高度相關。

3.3YAP對子宮內膜癌細胞生物學行為的影響Tsujiura等［17］將YAP特定的siRNA（siYAP）轉染子宮內膜癌細胞，發現細胞增殖明顯下降，同時發現，細胞在G0/G1相大量積聚，在S相和G2/M相大量減少，細胞克隆形成數明顯降低，而且細胞的侵襲和遷移顯著下降，隨后發現，YAP質粒轉染細胞可促進子宮內膜癌細胞的增殖。

3.4YAP與子宮內膜癌放療的相關性 Tsujiura等［17］采用克隆生存試驗檢測，發現轉染敲除了YAP的子宮內膜癌HEC-1-B細胞，其克隆存活明顯降低，但對放療的敏感性增加。同樣殺死90.0%的細胞，siYAP轉染細胞組需要3.48 Gy，空白載體對照組需要4.72 Gy，因此siYAP轉染細胞的放療敏感性增加了1.36倍，提示敲除YAP的表達可提高子宮內膜癌HEC-1-B細胞的放療敏感性。

3.5YAP與子宮內膜癌預后的相關性 Tsujiura等［17］經Kaplan-Meier曲線發現，YAP在細胞核或者細胞質的表達與2型子宮內膜癌患者總存活率不相關，細胞質YAP的表達與1型子宮內膜癌患者的總存活率也無關，但隨著YAP在子宮內膜癌細胞核免疫活性的增加，患者的總存活率明顯下降，提示細胞核YAP的表達與1型子宮內膜癌患者的不良預后明顯相關。

隨著國內外學者對YAP在婦科惡性腫瘤的深入研究及其作用機制的闡明，不僅對腫瘤的發生發展有了更深層次的了解，同時也在婦科惡性腫瘤的早期診斷、鑒別診斷、治療療效及預后評價等方面提供一定的幫助。

［1］MOROISHI T， PARK H W， QIN B， et al. A YAP/TAZ-induced feedback mechanism regulates Hippo pathway homeostasis［J］. Genes Dev， 2015， 29（12）： 1271-1284.

［2］MILLER E， YANG J， DERAN M， et al. Identification of serum-derived sphingosine-1-phosphate as a small molecule regulator of YAP［J］. Chem Biol， 2012， 19（8）： 955-962.

［3］KONSAVAGE W M Jr， KYLER S L， RENNOLL S A， et al. Wnt/β-catenin signaling regulates Yes-associated protein （YAP） gene expression in colorectal carcinoma cells［J］. J Biol Chem， 2012， 287（15）： 11730-11739.

［4］WANG J， MA L， WENG W， et al. Mutual interaction between YAP and CREB promotes tumorigenesis in liver cancer［J］. Hepatology， 2013， 58（3）： 1011-1120.

［5］FU D， LYU X， HUA G， et al. YAP regulates cell proliferation， migration， and steroidogenesis in adult granulosa cell tumors［J］. Endocr Relat Cancer， 2014， 21（2）： 297-310.

［6］LIU T， LIU Y， GAO H， et al. Clinical signifi cance of Yes-associated protein overexpression in cervical carcinoma［J］. Int J Gynecol Cancer， 2013， 23（4）： 735-742.

［7］XIAO H， WU L， ZHENG H， et al. Expression of Yes-associated protein in cervical squamous epithelium lesions［J］. Int J Gynecol Cancer， 2014， 24（9）： 1575-1582.

［8］STEINHARDT A A， GAYYED M F， KLEIN A P， et al. Expression of Yes-associated protein in common solid tumors ［J］. Hum Pathol， 2008， 39（11）： 1582-1589.

［9］HE C， LYU X， HUA G， et al. YAP forms autocrine loops with the ERBB pathway to regulate ovarian cancer initiationand progression［J］. Oncogene， 2015， 34（50）： 6040-6054.

［10］ZHANG X， GEORGE J， DEB S， et al. The Hippo pathway transcriptional co-activator， YAP， is an ovarian cancer oncogene［J］. Oncogene， 2011， 30（25）： 2810-2822.

［11］金志紅, 任彩萍, 史彩霞, 等. 卵巢癌組織Hippo-Yes相關蛋白表達與臨床病理參數及增殖凋亡相關性研究[J]. 中華腫瘤防治雜志, 2015, 22(2): 125-128.

［12］王君, 曲群. YAP和CREB蛋白在上皮性卵巢癌中的表達及臨床意義[J]. 中外醫療, 2014, 35: 33-37.

［13］CAI H， XU Y. The role of LPA and YAP signaling in longterm migration of human ovarian cancer cells［J］. Cell Commun Siqnal， 2013， 11（1）： 31.

［14］HALL C A， WANG R， MIAO J， et al. Hippo Pathway effector yap is an ovarian cancer oncogene［J］. Cancer Res， 2010， 70（21）： 8517-8525.

［15］XIA Y， CHANG T， WANG Y， et al. YAP promotes ovarian cancer cell tumorigenesis and is indicative of a poor prognosis for ovarian cancer patients［J］. PLoS One， 2014， 9（3）：e91770.

［16］WANG P， BAI Y， SONG B， et al. PP1A-mediated dephosphorylation positively regulates YAP2 activity［J］. PLoS One， 2011， 6（9）： e24288.

［17］TSUJIURA M， MAZACK V， SUDOL M， et al. Yes-associated protein （YAP） modulates oncogenic features and radiation sensitivity in endometrial cancer［J］. PLoS One， 2014，9（6）： e100974.

（本文編輯：吳昔昔）

R737.3

C DOI: 10.3969/j.issn.2095-9400.2016.07.016

2015-09-24

浙江省衛生高層次創新人才資助項目（201021）。

周青峰（1990-），女，浙江溫州人，碩士生。

朱雪瓊，教授，主任醫師，Email：zjwzzxq@163. com。