高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法測定中藥鉤藤中鉤藤堿的含量

麥海燕 曲彩紅 江先合

高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法測定中藥鉤藤中鉤藤堿的含量

麥海燕 曲彩紅 江先合

目的 探究利用高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法測定中藥鉤藤中鉤藤堿的含量的效果。方法 選擇15 g鉤藤藥粉, 將其分為兩份, 對照組進(jìn)行高效液相色譜-紫外檢測器檢測, 實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器檢測, 觀察兩組方法檢測的準(zhǔn)確率和所需時(shí)間。結(jié)果 以精密鉤藤堿樣品的含量為“金標(biāo)準(zhǔn)”, 發(fā)現(xiàn)高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器檢測可以更加準(zhǔn)確地判定中藥鉤藤中鉤藤堿的含量情況(P＜0.05)。同時(shí)實(shí)驗(yàn)組檢測的天數(shù)少于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器檢測的方法更有利于對中藥鉤藤中鉤藤堿的測定, 值得臨床進(jìn)一步研究。

高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法；鉤藤；鉤藤堿；含量

鉤藤屬于藤本植物, 又名大鉤丁。莖枝呈圓柱形或類方形, 有細(xì)縱紋。節(jié)上有向下彎曲的單鉤和雙鉤, 鉤下有托葉痕。而鉤藤堿則是從鉤藤的帶鉤枝條中取出的一種生物堿。鉤藤堿具有降低血管阻力、抑制外周血擴(kuò)散的作用, 在治療高血壓等疾病方面有顯著效果。鉤藤堿對人類帶來了極大的好處, 因此, 作者通過對比高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器檢測和高效液相色譜-紫外檢測器檢測法來為進(jìn)一步精確測定中藥鉤藤中鉤藤堿的含量提供合理的依據(jù)［1］。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 此次試驗(yàn)所需要的儀器有：高效液相色譜系統(tǒng)、配蒸發(fā)散射和紫外兩種檢測器。選用4.6 mm×200.0 mm, 5 μm的Dikma DiamonsilC18的色譜柱。精確度為0.01的電子天平、離心機(jī)、多用途漩渦混合器和超純水系統(tǒng)。對照品：鉤藤堿對照品。由南昌貝塔生物科技有限公司提供, 產(chǎn)品批號為10172-080117,乙腈、甲醇均為色譜純；醋酸銨由天津市化工研究所提供。鉤藤干藥材統(tǒng)一產(chǎn)自湖南。

1.2 方法 首先制備對照溶液。精密稱取5.0 g鉤藤堿對照品, 置于10 ml容量瓶中, 用無水甲醇定容濃度為0.5 mg/ml,作為對照液, 經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾。取續(xù)濾液為儲備液。然后處理鉤藤藥材, 將鉤藤藥材進(jìn)行粉碎, 準(zhǔn)確量取15 g粉末, 將其分為兩份。分別加入50 ml甲醇混勻, 置于4℃冰箱中冷浸12 h,然后分別超聲30 min, 均定容于100 ml容量瓶內(nèi)。最后分別經(jīng)過0.22 μm微孔過濾膜過濾［2］。然后對兩組藥品進(jìn)行含量檢測。

實(shí)驗(yàn)組樣品采用高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法測定。流動相：乙腈聯(lián)合0.01 mol/L的醋酸銨；采用梯度法洗脫, 乙腈在20 min內(nèi)比例由20:80遞增至40:60；流速為1.0 ml/min；柱溫為30℃；進(jìn)樣量為20 μl。蒸發(fā)散射檢測器參數(shù)：飄逸管溫度為105℃。載氣流速3.0 ml/min, 放大倍數(shù)為2；分流器關(guān)閉。對照組采用高效液相色譜-紫外檢測器法測定。流動相：甲醇聯(lián)合0.01 mol/L的磷酸二氫鉀溶液；采用梯度法洗脫, 乙腈在40 min內(nèi)比例由30:70遞增至40:60, 41 min乙腈比例恢復(fù)30:70；流速為1.0 ml/min；柱溫為30℃；進(jìn)樣量為20μl。對比兩組藥品檢測所需的時(shí)間。同時(shí)與對照樣品進(jìn)行比較, 觀察兩組樣品測得含量的準(zhǔn)確率。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理, 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn), 計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn),以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

所有樣品在形態(tài)、大小等方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。以鉤藤堿對照品作為“金標(biāo)準(zhǔn)”, 實(shí)驗(yàn)組即采用高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法測定的樣品含量準(zhǔn)確率為97.4%。對照組即采用高效液相色譜-紫外檢測器檢測定的樣品含量準(zhǔn)確率為66.7%, 兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。詳見表1。并且兩組患者檢驗(yàn)花費(fèi)的時(shí)間差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。詳見表2。

表1 兩種方法準(zhǔn)確率、靈敏度、特異性的比較(n, %)

表2 兩種方法所需要的時(shí)間比較( x-±s)

3 討論

鉤藤分布于我國陜西、湖南等地。《本草圖經(jīng)》中寫道：鉤藤, 《神農(nóng)本草經(jīng)》不載所出州土。蘇恭云出梁州, 今興元府亦有之。葉細(xì)莖長, 節(jié)間有刺若釣鉤。三月采。葛洪治小兒方多用之。又《廣濟(jì)》及《崔氏方》療小兒驚癎諸湯欽,皆用吊藤皮。

中藥鉤藤中的鉤藤堿對降血壓有較好的作用。此生物堿無論對麻醉動物或不麻醉動物, 正常動物或高血壓動物, 也不論靜脈滴注或灌胃給藥均有降壓作用［3］, 且無快速耐受現(xiàn)象。鉤藤堿能抑制雙側(cè)頸總動脈所致的加壓反射, 對乙酰膽堿的降壓作用不明顯, 但能顯著抑制甚至阻斷電刺激迷走神經(jīng)高中端所致的血壓下降, 不能對抗腎上腺素、去甲腎上腺素的苯丙胺的升壓作用, 卻能明顯增強(qiáng)腎上腺素和去甲腎上腺素的升壓作用。并能使離體兔耳血管擴(kuò)張, 似有對外周血管的直接作用。認(rèn)為鉤藤堿產(chǎn)生降壓作用的原理主要是直接和反射性地抑制了血管運(yùn)動中樞以及阻滯交感神經(jīng)和神經(jīng)節(jié), 使外周血管擴(kuò)張, 阻力降低所致。其直接擴(kuò)張血管的作用比較強(qiáng)。同時(shí)鉤藤堿對平滑肌還有一定的影響, 可以抑制腸帶的收縮。因此, 鉤藤堿是一種對治療高血壓等疾病很有用的藥物成分。

高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法是一種新型的測定中藥鉤藤中鉤藤堿的方法, 隨著技術(shù)的精益求精和完善, 越來越廣泛的應(yīng)用于醫(yī)藥、化工、食品等領(lǐng)域。此方法通過先進(jìn)的自動分析儀器, 通過響應(yīng)因子只與物性有關(guān)及與梯度洗脫相容等特點(diǎn), 能夠使鉤藤堿與藥材中其他成分分離較好, 達(dá)到準(zhǔn)確的測量。此方法符合速度快、成本低的優(yōu)點(diǎn)。由于此方法運(yùn)用先進(jìn)的儀器設(shè)備, 還沒有廣泛應(yīng)用, 因此需要大量的人員對先進(jìn)設(shè)備進(jìn)行學(xué)習(xí)培訓(xùn)。同時(shí), 由于是機(jī)器檢測,準(zhǔn)確性也會更加精確。

本次研究中以鉤藤堿對照品作為“金標(biāo)準(zhǔn)”, 實(shí)驗(yàn)組即采用高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法測定的樣品含量準(zhǔn)確率為97.4%。對照組即采用高效液相色譜-紫外檢測器檢測定的樣品含量準(zhǔn)確率為66.7%, 兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。并且兩組患者檢驗(yàn)花費(fèi)的時(shí)間也具有明顯差異。通過對中藥鉤藤中鉤藤堿的含量測定, 使醫(yī)護(hù)人員對藥材的情況得到更加深入的了解, 同時(shí)方便對此種生物堿的利用［4］。因此可以看出, 高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法更有利于測定中藥鉤藤中鉤藤堿的含量。

在目前來說, 高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法和高效液相色譜-紫外檢測器發(fā)兩種方法均是測定鉤藤堿含量的有效手段, 但是高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測法操作方便、測得的結(jié)果更加精確精確, 所得結(jié)果是一項(xiàng)很有意義的指標(biāo),有很大的參考價(jià)值［5］。因此廣泛推廣高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器方法測定中藥鉤藤中鉤藤堿將是下一步研究的重點(diǎn)。

［1］ 胡嵐嵐, 湯建林, 徐穎, 等.HPLC_ELSD法測定中藥鉤藤中鉤藤堿的含量.重慶醫(yī)學(xué), 2013, 42(10):1089-1091.

［2］ 吳衛(wèi), 周娜, 劉梅.HPLC法測定鉤藤提取物中鉤藤堿的含量.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2012, 40(11): 6442-6443.

［3］ 周吉銀, 周世文, 湯建林.含鉤藤中藥復(fù)方制劑中鉤藤堿含量測定方法研究進(jìn)展.西北藥學(xué)雜志, 2013, 28(4):434-435.

［4］ 劉清華, 葛爾寧.RP_HPLC法測定鉤藤煎劑中鉤藤堿含量及變化.浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2010, 34(2): 270-271.

［5］ 王曉穎, 劉永靜, 陳丹, 等.HPLC法測定不同產(chǎn)地鉤藤中鉤藤堿的含量分析.中國中醫(yī)藥科技, 2011, 18(3):215-217.

2014-04-17］

510630 中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院藥學(xué)部