感染性腹瀉大便中無活性大腸埃希菌的檢測結果分析

李代昆，李　莉，蔡　偉，余雪梅，封　雪，薛建江△，張德純

(1.重慶醫科大學附屬大學城醫院檢驗科，重慶 401331；2.重慶醫科大學分子醫學與

腫瘤研究中心病原生物學教研室，重慶 400016)

?

·論著·

感染性腹瀉大便中無活性大腸埃希菌的檢測結果分析

李代昆1，李莉1，蔡偉1，余雪梅1，封雪1，薛建江1△，張德純2

(1.重慶醫科大學附屬大學城醫院檢驗科，重慶 401331；2.重慶醫科大學分子醫學與

腫瘤研究中心病原生物學教研室，重慶 400016)

摘要:目的分析糞便標本分離的無活性大腸埃希菌的鑒定及耐藥性。方法對該院2013年1月至2015年6月臨床送檢的糞便標本進行細菌培養、鑒定和藥敏試驗。結果共檢出61株無活性大腸埃希菌，18株能與志賀菌診斷血清發生凝集反應。阿莫西林和替卡西林耐藥率為100%，哌拉西林、頭孢噻吩和復方磺胺甲噁唑耐藥率為78%，頭孢西丁和阿米卡星耐藥率為33%，哌拉西林/他唑巴坦、亞胺培南和美羅培南耐藥率為0%。結論無活性大腸埃希菌能引起腹瀉，容易被誤診為志賀菌；耐藥性與普通大腸埃希菌無顯著不同。

關鍵詞:感染性腹瀉；無活性大腸埃希菌；鑒定；耐藥特性

無活性大腸埃希菌的生物學特性與志賀菌極為相似，而且部分菌株能與志賀菌診斷血清發生凝集反應。在臨床病原菌診斷時，能與志賀菌診斷血清發生凝集反應的菌株很容易被誤判為志賀菌，而不與志賀菌診斷血清發生交叉凝集反應的菌株則被漏判為腸道正常菌群。因此，無活性大腸埃希菌在我國的細菌感染性腹瀉病中起著重要作用，應該得到臨床的足夠重視。

1資料與方法

1.1一般資料選取2013年1月至2015年6月本院未使用抗菌藥物腹瀉患者的稀便、水樣便、黏膿便或膿血便等276份標本作為研究對象，檢測出無活性大腸埃希菌61株，其中有18株能與志賀菌診斷血清發生凝集反應。

1.2儀器與試劑法國生物梅里埃公司ATB Express微生物鑒定和藥敏試驗系統。培養基包括血瓊脂平板、抗菌藥物巧克力瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、沙門-志賀菌瓊脂平板、沙保瓊脂平板，購于鄭州安圖生物有限公司。微生物鑒定和藥敏試驗板條包括革蘭陰性菌鑒定板條和腸桿菌科細菌藥敏試驗板條，購于法國生物梅里埃公司。志賀菌診斷血清購于寧波天潤生物藥業有限公司。

1.3抗菌藥物種類阿莫西林(AMO)，阿莫西林/克拉維酸(AMC)，替卡西林(TIC)，替卡西林/克拉維酸(TCC)，哌拉西林(PIP)，哌拉西林/他唑巴坦(TZP)，頭孢噻吩(CEP)，頭孢呋辛(CXM)，頭孢西丁(FOX)，頭孢噻肟(CTX)，頭孢他啶(CAZ)，頭孢吡肟(FEP)，亞胺培南(IPM)，美羅培南(MEM)，慶大霉素(GEN)，妥布霉素(TOB)，阿米卡星(AMK)，奈替米星(NET)，環丙沙星(CIP)，復方磺胺甲噁唑(SXT)。

1.4方法將臨床送檢的糞便標本按《全國臨床檢驗操作規程》(第3版)的要求，腹瀉患者的糞便采用相應培養基進行分離培養；挑取SS平板上無色、半透明、圓形、凸起、濕潤、光滑、直徑1～2 mm的可疑菌落，用志賀菌診斷血清作凝集試驗。使用法國生物梅里埃公司ATB微生物鑒定和藥敏試驗系統進行細菌鑒定和藥物敏感試驗，操作及結果判斷嚴格按照臨床和實驗室標準協會(CLSI)公布的標準進行。每月使用標準菌株大腸埃希菌(ATCC25922)進行一次質量控制。

2結果

2.1培養特性沙門-志賀菌瓊脂平板上無色、半透明、圓形、凸起、濕潤、光滑、直徑1～2 mm。

2.2血清學試驗用志賀菌診斷血清作凝集試驗，有18株能與志賀菌屬診斷血清凝集，其余43株為陰性。

2.3細菌鑒定法國生物梅里埃公司ATB Express微生物鑒定系統的鑒定結果為大腸埃希菌，補充動力-吲哚-脲酶試驗，動力為陰性，綜合判斷為無活性大腸埃希菌。

2.4藥敏試驗阿莫西林和替卡西林耐藥率為100%，哌拉西林、頭孢噻吩和復方磺胺甲噁唑耐藥率為78%，頭孢西丁和阿米卡星耐藥率為33%，哌拉西林/他唑巴坦、亞胺培南和美羅培南耐藥率為0%，其他抗菌藥物的耐藥率為44%～55%。

3討論

引起腹瀉的志賀菌(我國主要為福氏志賀菌)和致瀉大腸埃希菌的研究頗為廣泛和深入，從微生物學實驗診斷技術、感染性腹瀉發病機制、耐藥菌譜及其耐藥機制、新型治療方法及預防策略等方面進行了研究[1-7]。在臨床實踐中，由于患者病情錯綜復雜以及藥物使用千差萬別，細菌感染性腹瀉的主要病原菌并非霍亂弧菌、志賀菌和沙門菌等經典腸道病原菌，而是因腸道菌群失調使得某些條件致病菌大量繁殖，引發腹瀉。

研究者采用自動細菌鑒定系統對能與福氏志賀菌診斷血清發生凝集反應的菌株進行鑒定，結果發現，能與福氏志賀菌診斷血清發生凝集反應的病原菌不是福氏志賀菌，而是大腸埃希菌。將該細菌接種于克氏雙糖斜面瓊脂試管和動力-吲哚-脲酶半固體瓊脂試管，結果表現為發酵葡萄糖不產氣、不發酵乳糖、無動力、吲哚陽性、脲酶陰性，這就是無活性大腸埃希菌。無活性大腸埃希菌與福氏志賀菌的生物學特性很相似，部分能與福氏志賀菌診斷血清發生凝集反應。

在腹瀉患者糞便中檢測到無活性大腸埃希菌的文獻報道很少[8-12]，很可能是大家仍在遵循傳統的大便細菌學檢驗，只關注志賀菌、沙門菌，而忽略菌群失調后條件致病菌的檢驗。因此，需要高度重視容易被遺漏的無活性大腸埃希菌的檢測，才能為臨床治療提供更多微生物學支持。

本次檢測結果顯示，無活性大腸埃希菌的耐藥性較高，與相關文獻報道一致[13-14]，認為致瀉大腸埃希菌對臨床常用抗菌藥物的耐藥性不斷增加。在臨床用藥要結合藥敏試驗結果，選用敏感的抗菌藥物，合理進行治療。

無活性大腸埃希菌能引起腹瀉，除易感人群的易感因素外，與該菌本身的致病因素有關。參考相關文獻資料[15]，可以直接檢測大腸埃希菌的毒力基因，為臨床提供更準確的診斷依據。該菌能引起腹瀉，作為大腸埃希菌的一個類型(無活性型)，是否與致瀉大腸埃希菌存在相同或相似的致病基因和耐藥基因，生物學特性與志賀菌極為相似的無活性大腸埃希菌，它們在基因水平是否也很相近呢？尤其應關注無活性大腸埃希菌是否含有志賀菌的致病基因和耐藥基因。進一步研究無活性大腸埃希菌引起腹瀉的致病機制、流行病學調查、動物模型構建、耐藥機制，從而為腸道感染防治提供理論依據。

參考文獻

[1]聶青和.感染性腹瀉研究最新進展[J]．傳染病信息，2011，24(2)：75-78．

[2]Chisti MJ，Faruque AS，Khan WA，et al.Characteristics of children with Shigella encephalopathy:experience from a large urban diarrhea treatment center in Bangladesh[J].Pediatr Infect Dis J，2010，29(5):444-447.

[3]Crepin VF，Girard F，Schüller S，et al.Dissecting the role of the Tir:Nck and Tir:IRTKS/IRSp53 signalling pathways in vivo[J].Mol Microbiol，2010，75(2):308-323.

[4]Oelschlaeger TA.Mechanisms of probiotic actions-A review[J].Int J Med Microbiol，2010，300(1):57-62.

[5]Tiihonen K，Ouwehand AC，Rautonen N.Human intestinal microbiota and healthy ageing[J].Ageing Res Rev，2010，9(2):107-116.

[6]Centers for Disease Control and Prevention(CDC).National，state,and local area vaccination coverage among children aged 19-35 months-United States，2009[J].MMWR Morb Mortal Wkly Rep,2010，59(36):1171-1177.

[7]Kim SJ，Han YW，Rahman MM，et al.Live attenuated Salmonellaenterica serovar Typhimurium expressing swine interferon-alphahas antiviral activity and alleviates clinical signs induced by infectionwith transmissible gastroenteritis virus in piglets[J].Vaccine，2010，28(31):5031-5037.

[8]高亞色．檢出一株雙糖鐵反應似志賀菌屬血清學交叉的產毒性大腸埃希菌[J]．海峽預防醫學雜志，2005，8(5)：57-58．

[9]高雯潔，張建平，沈志英，等．一株與福氏志賀菌1a交叉凝集的低活性大腸埃希菌[J]．中國衛生檢驗雜志，2007，17(11)：2115-2116．

[10]郭丹桂．一株具有福氏6型志賀菌相同抗原的大腸埃希菌[J]．職業與健康，2008，24(14)：1394-1395．

[11]何劍鋒，葉金奶．與福氏志賀氏菌有共同抗原的兩株腸桿菌科細菌[J]．中國衛生檢驗雜志，2009，19(5)：1168．

[12]嚴卓琳．一株三糖鐵反應似志賀菌屬血清學交叉的產毒型大腸埃希菌[J]．中國醫藥指南，2012，10(14)：131-132．

[13]周敬綱，賈艷麗，楊靜．腹瀉綜合征致瀉性大腸埃希菌血清型分布及耐藥性的研究[J]．中國當代醫藥，2014，217(33)：144-146．

[14]常海嶺，李月芳，曾玫，等．兒童致瀉性大腸埃希菌腹瀉臨床與病原分布特點[J]．中華傳染病雜志，2015，33(3)：137-141．

[15]潘偉光，李一凡，鄧啟文，等．致嬰幼兒腹瀉的腸致病性大腸埃希菌血清分型和毒力基因檢測[J]．國際檢驗醫學雜志，2013，34(13)：1691-1692．

Analysis of detection results of non active Escherichia coli in stool of infectious diarrhea

LiDaikun1，LiLi1，CaiWei1，YuXuemei1，FengXue1，XueJianjiang1△，ZhangDechun2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory，University-TownHospitalofChongqingMedicalUniversity，Chongqing401331,China;2.DepartmentofPathogenicBiology,MolecularofMedicineandTumorResearchCenter，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016,China)

Abstract:ObjectiveTo analyze the identification and antibiotic resistance of non active Escherichia coli isolated from feces.MethodsClinical fecal specimens were collected from January 2013 to June 2015 for bacterial culture，identification and antimicrobial susceptibility testing．ResultsSixty-one strains of E.coli,inactive were detected，18 strains of which could be agglutinated with diagnostic serum of Shigella.Three stains could produce extented spectrum β-lactamases(ESBLs);The rate of antibiotic resistance of amoxicillin and ticarcillin was 100%，The rate of piperacillin，cephalothin and sulfamethoxazole was 78%，the rate of cefoxitin and amikacin was 33%，the rate of piperacillin/tazobactam，imipenem and meropenem was 0%.ConclusionNon active Escherichia coli can induce diarrhea，which is easily misdiagnosed as Shigella,the antimicrobial resistance between Escherichia coli and non active Escherichia coli is not significant difference.

Key words:infectious diarrhea；non active Escherichia coli；identification；antibiotic resistance

(收稿日期：2015-09-28)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.020

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)04-0480-02

作者簡介：李代昆，男，主管技師，主要從事臨床微生物學研究。△通訊作者，E-mail：1208456960@qq.com。