兩種反轉錄熒光定量聚合酶鏈反應檢測HCV RNA的對比分析

唐章平

(四川省德陽市羅江縣人民醫院檢驗科　618500)

·經驗交流·

兩種反轉錄熒光定量聚合酶鏈反應檢測HCV RNA的對比分析

唐章平

(四川省德陽市羅江縣人民醫院檢驗科618500)

目的探討常規反轉錄熒光定量聚合酶鏈反應(RT-qPCR)與高精度RT-qPCR檢測丙型肝炎病毒(HCV)RNA的差異，為醫院開展院內感染監控提供參考。方法對2014年1月至2015年12月的459例住院受血者，采用兩種RT-qPCR檢測HCV RNA，比較兩種檢測方法RNA陽性率的表達差異。結果高精度RT-qPCR和常規RT-qPCR檢測HCV RNA的陽性率分別為3.70%(17例)、1.74%(8例)，高精度RT-qPCR檢測HCV RNA陽性表達明顯高于常規RT-qPCR檢測，差異有統計學意義(χ2=11.326，P<0.05)。結論合理應用高精度RT-qPCR對輸血前患者進行HCV RNA檢測，可以提高對HCV RNA的檢出率，減少了醫源性感染，提高了對受血患者健康狀況的判斷能力。

丙型肝炎病毒；高精度實時熒光定量聚合酶鏈法；醫源性感染

丙型肝炎病毒(HCV)是單股正鏈RNA病毒，近年來，我國丙型肝炎患者逐漸增多，一般人群HCV陽性率為3.2%，可引起急性肝炎，或發展成慢性肝炎，嚴重者可發展成肝硬化，甚至肝癌[1]。實驗室檢查主要包括免疫學及分子生物學檢測，反轉錄熒光定量聚合酶鏈反應(RT-qPCR)是目前采用較多的檢測HCV RNA方法，是表示傳染性及復制病毒最可靠的指標，也是顯示HCV感染狀態及治療效果的重要指標[2-3]。本研究采用兩種RT-qPCR檢測HCV RNA，比較兩種檢測方法RNA陽性率的表達差異。

1資料與方法

1.1一般資料本院2014年1月至2015年12月的459例住院受血者，其中男203例，女256例，年齡5～87歲，平均(33.6±15.1)歲。

1.2儀器與試劑熒光定量PCR法均采用羅氏LightCycler*480Ⅱ實時熒光定量PCR儀，常規RT-qPCR采用上海科華生物工程股份有限公司生產的HCV核酸定量試劑盒(PCR-熒光探針法)，檢測的線性范圍：103～107IU/mL，高精度RT-qPCR采用羅氏診斷產品(上海)有限公司生產的丙型肝炎病毒核酸定量試劑盒(PCR-熒光探針法)，檢測的線性范圍：1～15×108IU/mL，均嚴格按照說明書進行操作。每份陽性標本均重復檢測2次。

1.3檢測方法均在輸血前抽取受血著靜脈血，同時進行高精度RT-qPCR檢測及常規RT-qPCR檢測。

1.4統計學處理采用SPSS15.0軟件進行數據處理及統計學分析，組間比較采用方差分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

高精度RT-qPCR和常規RT-qPCR檢測HCV RNA的陽性率分別為3.70%(17例)、1.74%(8例)，高精度RT-qPCR檢測HCV RNA陽性表達明顯高于常規RT-qPCR檢測，差異有統計學意義(χ2=11.326，P<0.05)。

3討論

丙型肝炎是由HCV感染引起的一種主要經血液傳播的傳染性疾病，呈世界流行趨勢，其感染途徑可能有輸血感染、密切接觸、不良性行為和吸毒等。隨著《輸血法》的完善，供血中心已嚴格監測血制品傳染性指標，保障受血者的用血安全是各個血站的一項重要工作[4]。但是，近年來人們發現經血液傳播的HCV傳染病越來越多見于非輸血人群，醫務人員對患者進行各項診治工作時必須提高警惕，加強自身安全防護措施，而提高檢測技術對HCV監測的靈敏度和特異度是最行之有效的解決醫院交叉感染和避免醫患矛盾的途徑之一。

自1989年科學家發現HCV以來，已建立了針對HCV抗體、HCV RNA和HCV抗原的各種檢測方法，可定性和定量檢測HCV RNA，常見的方法有RT-PCR定性法、bDNA檢測技術、RT-qPCR定量法等，其中RT-qPCR的基本原理是通過引物擴增并檢測特異性mRNA 來證實HCV的存在，具有高效率、高靈敏度、高特異度的優點，且操作簡便，是檢測HCV RNA 比較有效的方法，也是預測和觀察抗病毒效果的重要指標[5]。常規RT-qPCR檢測HCV RNA的線性范圍為103～107IU/mL，而高精度RT-qPCR是(1～15)×108IU/mL[6]，后者靈敏度明顯高于前者，這是因為高精度RT-qPCR是采用COBAS HCV RNA二代定量試劑，增加了針對HCV基因型4 的探針和引物，即用靶基因特異的裂解雙重標記寡核苷酸檢測探針檢測HCV RNA，提高了檢測靈敏度[7]。高精度RT-qPCR還采用一已知數量的HCV定量標準(QS)RNA分子，是一種非傳染性體外轉錄RNA(aRNA)，組成并含有與HCV靶RNA完全相同引物結合位點的HCV序列片段，是一種獨特的探針結合區，使HCV QS擴增子與HCV靶擴增子區分開，還有彌補抑制作用并控制制備和擴增過程，使每個標本中HCV RNA的定量更加準確[8]。

本研究采用兩種RT-qPCR檢測HCV RNA，比較了高精度RT-qPCR與常規RT-qPCR檢測本院459例住院受血者HCV RNA陽性率的表達差異，結果發現，高精度RT-qPCR與常規RT-qPCR檢測HCV抗體的陽性例數分別為17例(3.70%)、8例(1.74%)。高精度RT-qPCR對HCV抗體RNA陽性表達率明顯高于常規RT-qPCR，其檢測精度高，差異有統計學意義(P<0.05)。因此，采用高精度RT-qPCR對輸血前患者進行HCV RNA檢測，可以提高對HCV RNA的檢測率，但是，高精度RT-qPCR的試劑盒價格昂貴，導致檢測費用大大高于常規RT-qPCR，因此，筆者認為在臨床應用中，監測HCV RNA定量時，可以先用常規RT-qPCR定量試劑檢測，當 HCV RNA濃度下降到103以下時，再用高精度RT-qPCR定量檢測，是比較合理適用的檢測流程。

本研究資料表明，為了預防輸血引起的醫療糾紛，明確輸血事故的責任，杜絕和減少醫療機構的損失，首先應嚴格控制血液制品的質量，同時認真檢測患者輸血前血液傳染性指標。合理應用常規和高精度RT-qPCR，可明顯提高對HCV RNA的檢出率，有助于為醫療糾紛提高可靠舉證和防止院內感染。

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2016-01-10修回日期：2016-03-15)

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.12.064

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1673-4130(2016)12-1737-02