垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因和堿性成纖維細胞生長因子的表達及其與膽管癌臨床病理特征的關系

王華杰，蘇醒，孫樂瑾

(1.海南省人民醫(yī)院重癥醫(yī)學科，海南海口570311；2.海口市人民醫(yī)院重癥醫(yī)學科，海南海口570208)

垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因和堿性成纖維細胞生長因子的表達及其與膽管癌臨床病理特征的關系

王華杰1，蘇醒1，孫樂瑾2

(1.海南省人民醫(yī)院重癥醫(yī)學科，海南海口570311；2.海口市人民醫(yī)院重癥醫(yī)學科，海南海口570208)

目的分析垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因(PTTG)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的表達及其與膽管癌臨床病理特征的關系，探討其臨床適用性。方法選取2010年3月至2015年6月于我院就診的46例膽管癌患者的病理標本作為試驗組，另選擇同時期的40例正常肝外膽管組織作為對照組。應用免疫組織化學法，觀察PTTG和bFGF在兩種組織中的表達差異，同時分析PTTG和bFGF表達與膽管癌臨床病理指標的相關性，運用Spearman等級相關分析PTTG和bFGF表達的相關性。結(jié)果試驗組中PTTG基因蛋白表達陽性38例，陽性表達率為82.61%，對照組中PTTG基因蛋白表達陽性19例，陽性表達率為47.50%，兩組陽性率比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；試驗組中bFGF表達陽性34例，陽性表達率為73.91%，對照組中bFGF表達陽性10例，陽性表達率為25.00%，兩組陽性率比較，差異也有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；試驗組組織中PTTG和bFGF表達陽性率與腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤浸潤深度有關(P＜0.05)，而與性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤位置均無關(P＞0.05)；Spearman等級相關分析結(jié)果顯示膽管癌表達水平中PTTG與bFGF表達情況呈等級正相關(r=0.29，P＜0.05)。結(jié)論垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因和堿性成纖維細胞生長因子在膽管癌中的表達顯著，與腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤浸潤深度有關，兩種指標聯(lián)合監(jiān)測臨床價值較高。

垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因；堿性成纖維細胞生長因子；膽管癌；臨床病理特征

膽管癌是一種發(fā)生于膽管的惡性腫瘤，也是消化系統(tǒng)比較常見的惡性腫瘤之一[1]。膽管癌患者通常起病隱匿，病情發(fā)展迅速，對周圍組織侵襲性也比較強，普通的手術治療難以起效，臨床預后較差。目前臨床上發(fā)現(xiàn)多數(shù)膽管癌患者除出現(xiàn)臨床癥狀外，還合并一些生物因子的變化，這對疾病的早期診斷非常重要[2]。因此，有早期癥狀的患者聯(lián)合監(jiān)測相關生物學指標有助于疾病的早期診斷。堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)是目前膽管癌研究較多的相關因子，參與血管新生的調(diào)控[3]。目前臨床上發(fā)現(xiàn)垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因(PTTG)也是一種相關因子，其對腫瘤的發(fā)生發(fā)展也有非常重要的作用[4]。故此，我院結(jié)合自身病例分析了PTTG和bFGF這兩種指標的表達及其與膽管癌臨床病理特征的關系，現(xiàn)將結(jié)果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2010年3月至2015年6月于我院就診的46例膽管癌患者的病理標本作為試驗組，另選擇同時期的40例正常肝外膽管組織(其他良性疾病行膽管切除患者)作為對照組。試驗組患者男性27例，女性19例，年齡55～75歲，平均(69.9±6.1)歲，對照組患者男性26例，女性14例，年齡55～75歲，平均(70.0±6.0)歲。兩組患者的性別、年齡等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法應用免疫組織化學法，實驗材料采用博士德公司生產(chǎn)的特異性抗兔抗人PTTG多克隆抗體，福州邁新生物技術公司生產(chǎn)的鼠抗人bFGF單克隆抗體、SP試劑盒、DAB顯色系統(tǒng)。其中PTTG多抗及bFGF單抗的工作濃度均為1:100。操作步驟嚴格按照說明書進行：常規(guī)切片脫蠟和水化后，用高溫高壓檸檬酸緩沖液修復抗原，用過氧化氫溶液反應10 min，消除內(nèi)源性過氧化物酶，后通過稀釋的羊血清封閉10 min，加入一抗在濕盒中4℃放置24 h，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌后加二抗，后用第二代辣根酶標記鏈酶菌素工作液各孵育10 min，再沖洗3次，最后在DAB中顯色5 min，用自來水沖洗，蘇木素復染，乙醇梯度脫水，封片觀察。觀察PTTG和bFGF在兩種組織中的表達差異。

1.3 統(tǒng)計學方法應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，等級資料比較采用兩樣本比較的Wilcoxon法，臨床病例指標資料檢驗比較采用χ2檢驗，運用Spearman等級相關分析PTTG和bFGF表達的相關關系，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 PTTG和bFGF在兩種組織中的表達差異比較免疫組化結(jié)果顯示，PTTG基因蛋白表達產(chǎn)物主要分布于細胞漿，細胞核無染色，其中陽性染色為均勻一致的棕褐色細顆粒；而bFGF同樣遍布于細胞漿，可見部分胞核和血管內(nèi)皮細胞著色，見圖1、圖2。試驗組中PTTG基因蛋白陽性表達率為82.61%(38/46)，對照組中PTTG基因蛋白陽性表達率為47.50%(19/40)，兩組陽性率比較，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=5.21，P=0.00)，試驗組中bFGF陽性表達率為73.91%(34/46)，對照組中bFGF表達陽性表達率為25.00%(10/40)，兩組陽性率比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.51，P=0.00)，見表1。

表1 PTTG和bFGF在兩種組織中的表達差異(例)

圖1 PTTG基因蛋白表達免疫組化圖

圖2 bFGF表達免疫組化圖

2.2 PTTG和bFGF表達與膽管癌臨床病理指標的關系試驗組組織中PTTG和bFGF表達陽性率與腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤浸潤深度有關(P＜0.05)，而與性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤位置均無關(P＞0.05)，見表2。

表2 PTTG和bFGF表達與膽管癌臨床病理指標的關系[例(%)]

2.3 PTTG和bFGF在膽管癌中表達的等級相關關系Spearman等級相關分析結(jié)果顯示，膽管癌表達水平中PTTG與bFGF表達情況呈等級正相關(r= 0.29，P＜0.05)，見表3。

表3 PTTG和bFGF在膽管癌中表達的等級相關性[例（%）]

3 討論

膽管癌的具體發(fā)病機制不明，早期確診病例可以通過手術切除治療，同時輔以術后放療及化療來鞏固和提高手術治療效果。但是現(xiàn)在臨床上面臨的通常是錯過最佳手術時間[5]。主要原因是由于膽管癌的起病不典型，臨床癥狀無特異性，加之患者耐受，一般在就診時多已處于中晚期[6]。且膽管癌的病情進展通常比較快，也較易發(fā)生浸潤轉(zhuǎn)移，給臨床治療帶來挑戰(zhàn)[7]。而對于膽管癌的早期診斷仍然是一項研究重點。患者出現(xiàn)臨床癥狀后，再結(jié)合較為特異性的檢查對于疾病的早期診斷有幫助。

bFGF是堿性成纖維細胞生長因子，多數(shù)臨床研究發(fā)現(xiàn)它是一個傳遞發(fā)育信號，能刺激細胞增殖、遷移，具有強烈的血管生成作用，是促進血管新生的一個重要參與因子[8]。而血管新生則是腫瘤轉(zhuǎn)移和生長必不可少的步驟[9]。因此對于bFGF的早期監(jiān)測是對于膽管癌的早期診斷的一項重要指標。而現(xiàn)在進一步的研究發(fā)現(xiàn)一種新的轉(zhuǎn)化基因，即PTTG，為垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因，能對bFGF mRNA及其的蛋白質(zhì)進行調(diào)控，使其表達水平顯著上升，進一步又刺激bFGF蛋白分泌、合成，因此是bFGF的上一級調(diào)控[10-11]。而PTTG在膽管癌中的診斷價值的報道尚比較少，缺乏可靠依據(jù)。故此我院分析了PTTG和bFGF這兩種指標在膽管癌的表達情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：①免疫組化結(jié)果顯示，PTTG基因蛋白表達產(chǎn)物主要分布于細胞漿，細胞核無染色，其中陽性染色為均勻一致的棕褐色細顆粒。而bFGF同樣遍布于細胞漿，可見部分胞核和血管內(nèi)皮細胞著色，提示臨床實驗研究主要在細胞漿內(nèi)觀察兩種蛋白因子。試驗組中PTTG基因蛋白陽性表達率為82.61%，而選擇的對照組中PTTG基因蛋白陽性表達率為47.50%，試驗組中bFGF陽性表達率為73.91%，對照組中bFGF陽性表達率為25.00%，差異均有統(tǒng)計學意義。說明PTTG和bFGF在膽管癌中也均有特異性的表達情況，且監(jiān)測的陽性率均比較高。這項研究結(jié)果于醫(yī)師的研究結(jié)果類似[12]；②膽管癌患者病理組織中PTTG和bFGF表達陽性率與腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤浸潤深度有關，而與性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤位置無關，提示PTTG和bFGF對膽管癌的發(fā)病，病情進展有診斷意義。在病情的不同時期，表達有差異，且從數(shù)據(jù)中可看出，腫瘤分化程度越低、TNM分期級別越高、合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及周圍組織腫瘤浸潤的病理組織中PTTG和bFGF均強表達，說明膽管癌的發(fā)生發(fā)展與PTTG和bFGF的特異性表達有關；③Spearman等級相關分析結(jié)果顯示膽管癌表達水平中PTTG與bFGF表達情況呈等級正相關，不難解釋，PTTG是對bFGF的上一級調(diào)控，直接影響bFGF的表達情況。

綜上所述，垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因和堿性成纖維細胞生長因子在膽管癌中的表達顯著，與腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤浸潤深度有關，兩種指標聯(lián)合監(jiān)測臨床價值較高。

[1]劉長征,劉衛(wèi),李靜靜,等.肝內(nèi)及肝外膽管癌組織表達上調(diào)microRNAs表達譜的鑒定[J].中華肝膽外科雜志,2012,18(6): 466-469.

[2]劉子沛,鄭燕華,白潔,等.多種腫瘤標志物檢測在膽管癌診斷中的臨床意義[J].中華肝膽外科雜志,2013,19(9):657-660.

[3]Wang ZS,Wu GF,Bai SZ,et al.MAPs/bFGF-PLGA microsphere composite-coated titanium surfaces promote increased adhesion and proliferation of fibroblasts[J].Biomedical Materials,2014,9(3): 350061-350072.

[4]胡荍,朱潤慶,李丹,等.垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因Pttg和堿性成纖維細胞生長因子Bfgf在膽管癌中的表達及相互關系[J].醫(yī)藥前沿,2012, 2(9):152-153.

[5]張文杰,王雪峰,顧鈞,等.膽管活檢組織K-ras基因突變與膽管癌的相關性[J].中華肝膽外科雜志,2014,20(2):97-100.

[6]黃朝君,黃強,劉臣海,等.膽管癌組織中信號轉(zhuǎn)導及轉(zhuǎn)錄激活因子3信號通路相關基因的表達與意義[J].中華消化外科雜志,2014, 13(12):971-976.

[7]王斐,楊寧,張海斌,等.MTSS1在膽管癌組織中的表達及其與預后關系[J].中華消化外科雜志,2013,12(5):383-387.

[8]劉偉良,褚言琛,劉偉莉,等.串珠素對成纖維細胞增殖的影響及其與堿性成纖維細胞生長因子的關系[J].中華實驗外科雜志,2013, 30(4):804-807.

[9]閆長青,趙玉沛,劉三光,等.堿性成纖維細胞生長因子小干擾RNA對胰腺癌細胞血管內(nèi)皮細胞生長因子表達的調(diào)節(jié)作用[J].中華實驗外科雜志,2012,29(11):2219-2221.

[10]Lewy GD,Ryan GA,Read ML,et al.Regulation of pituitary tumor transforming gene(PTTG)expression and phosphorylation in thyroid cells[J].Endocrinology,2013,154(11):4408-4422.

[11]Zhang J,Yang Y,Chen L,et al.Overexpression of pituitary tumor transforming gene(PTTG)is associated with tumor progression and poor prognosis in patients with esophageal squamous cell carcinoma [J].Acta Histochemica:Zeitschrift fur Histologische Topochemie, 2014,116(3):435-439.

[12]陳恩碧,張耀明,陳博藝,等.PTTG和bFGF在膽管癌中表達及意義[J].醫(yī)學信息(中旬刊),2011,24(8):3622-3623.

Expression of pituitary tumor transforming gene and basic fibroblast growth factor and its relationship withclinicopathological features of cholangiocarcinoma.

WANG Hua-jie1,SU Xing1,SUN Le-jin2.1.Department of Critical Care Medicine,People's Hospital of Hainan Province,Haikou 570311,Hainan,CHINA;2.Department of Critical Care Medicine,Haikou People's Hospital,Haikou 570208,Hainan,CHINA

ObjectiveTo analyze the expression of pituitary tumor transforming gene(PTTG)and basic fibroblast growth factor(bFGF)and its relationship with clinicopathological features of cholangiocarcinoma.MethodsThe pathological specimens of 46 patients with cholangiocarcinoma were selected from March 2010 to June 2015 in our hospital as the test group,and 40 specimens of normal extrahepatic bile duct tissue were selected at the same period as the control group.Immunohistochemical method was used to observe the expression of PTTG and bFGF in the two groups. The correlation between PTTG and bFGF expression and clinicopathological features of cholangiocarcinoma were analyzed.ResultsPTTG gene was positively expressed in 38 patients(with the positive expression rate of 82.61%)in the test group and in 19 patients(47.50%)in the control group,showing statistically significant difference in positive expression rate between the two groups(P＜0.05).bFGF was positively expressed in 34 patients(with the positive expression rate of 73.91%)in the test group and in 10 patients(25.00%)in the control group,with statistically significant difference in positive expression rate between the two groups(P＜0.05).In the test group,the positive expression rates of PTTG and bFGF were correlated with tumor differentiation degree,TNM stage,lymph node metastasis and tumor depth of invasion (P＜0.05),but not with gender,age,tumor size,tumor location(P＞0.05).Spearman rank correlation analysis showed that expression of PTTG and bFGF in cholangiocarcinoma were positively correlated(r=0.29,P＜0.05).ConclusionPituitary tumor transforming gene and basic fibroblast growth factor are significantly expressed in cholangiocarcinoma, which are related to tumor differentiation,TNM stage,lymph node metastasis and depth of invasion.Monitoring of the two indexes has high clinical value.

Pituitary tumor transforming gene(PTTG);Basic fibroblast growth factor(bFGF);Cholangiocarcinoma;Clinicopathological features

R735.8

A

1003—6350（2016）02—0189—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.02.006

2015-09-02)

海南省自然科學基金(編號：814321)

王華杰。E-mail：wanghuajie1981@sina.com