梅毒血清固定患者細(xì)胞免疫功能及DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶表達(dá)水平分析

袁軍 楊祖慶 田麗閃 羅珍胄

梅毒血清固定患者細(xì)胞免疫功能及DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶表達(dá)水平分析

袁軍 楊祖慶 田麗閃 羅珍胄

目的檢測(cè)梅毒血清固定患者細(xì)胞免疫功能, 分析其外周血單個(gè)核細(xì)胞中的DNA甲基化和DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)水平。方法67例梅毒患者, 其中一期梅毒26例(一期梅毒組), 二期梅毒22例(二期梅毒組), 梅毒血清固定19例(梅毒血清固定組), 選取同期健康人25例作為對(duì)照組。比較各組Th1/Th2細(xì)胞因子、DNA甲基化及DNMT表達(dá)水平。結(jié)果四組干擾素-γ(TFN-γ) 、白細(xì)胞介素-2(IL-2)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)及白細(xì)胞介素-10(IL-10)水平比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (F=7.435、8.577、5.688、5.578、7.658, P＜0.05)。四組DNA甲基化及DNMT表達(dá)水平比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (F=16.456、9.467, P＜0.05)。結(jié)論Th1 /Th2 細(xì)胞免疫平衡失調(diào)在梅毒血清固定患者中發(fā)揮了重要的作用, 其機(jī)制可能與DNA甲基化具有密切關(guān)系。

梅毒血清固定；Th1/Th2；DNA甲基化

梅毒是一種由蒼白螺旋體感染所導(dǎo)致的, 可以侵犯全身多個(gè)系統(tǒng)、器官的慢性性傳播疾病, 流行病學(xué)研究顯示, 近年來(lái), 我國(guó)梅毒的發(fā)病率正呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì), 嚴(yán)重影響了人類(lèi)健康。一般認(rèn)為梅毒患者在通過(guò)多個(gè)療程的正規(guī)驅(qū)梅治療后, 由于藥物和機(jī)體之間的相互作用, 可能會(huì)使患者外周血在2年內(nèi)基本陰轉(zhuǎn), 而部分梅毒患者即使進(jìn)行了多個(gè)療程正規(guī)驅(qū)梅治療, 但梅毒快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)(RPR)仍然持續(xù)陽(yáng)性, 很長(zhǎng)時(shí)間不能轉(zhuǎn)陰, 形成血清固定［1］。有研究表明,血清固定的原因與T細(xì)胞亞群分化失調(diào)導(dǎo)致的細(xì)胞免疫功能異常密切相關(guān), 而T細(xì)胞亞群在分化過(guò)程中, 有多種細(xì)胞因子伴有DNMT位點(diǎn)的變化及基因表達(dá)水平的變化［2］。因此,本研究對(duì)梅毒血清固定患者細(xì)胞免疫功能進(jìn)行了檢測(cè), 并對(duì)DNMT表達(dá)水平進(jìn)行探究, 具體結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年4月～2016年4月本院梅毒患者67例, 其中一期梅毒26例(一期梅毒組), 男15例, 女11例, 年齡27～57歲, 平均年齡(42.14±8.37)歲；二期梅毒22例(二期梅毒組), 男13例, 女9例, 年齡27～56歲, 平均年齡(43.31±9.62)歲；梅毒血清固定19例(梅毒血清固定組),男11例, 女8例, 年齡27～58歲, 平均年齡(43.17±8.81)歲；選取同期本院體檢健康人25例作為對(duì)照組, 男13例, 女12例, 年齡22～59歲, 平均年齡(42.91±7.62)歲。四組年齡、性別等一般資料比較, 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 研究方法

1.2.1 細(xì)胞因子檢測(cè) 所有研究對(duì)象均在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血5 ml, 離心處理后采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定TFN-γ 、 IL-2、 TNF-α、 IL-4及 IL-10水平。

1.2.2 DNA甲基化以及DNMT表達(dá)水平 抽取靜脈血20 ml,進(jìn)行單個(gè)細(xì)胞分離處理, 提取RNA和DNA, 甲基化定量試劑盒檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中基因組DNA甲基化水平, 利用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法測(cè)定DNMT表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t檢驗(yàn),多組間比較采用方差分析；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Th1/Th2細(xì)胞因子比較 四組TFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-4及IL-10水平比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。在Th1因子中, TFN-γ、IL-2及TNF-α在對(duì)照組中最高, 在梅毒血清固定組中最低；在Th2因子中, IL-4及IL-10在對(duì)照組中最低, 在梅毒血清固定組中最高。見(jiàn)表1。

2.2 DNA甲基化及DNMT表達(dá)水平比較 四組DNA甲基化及DNMT表達(dá)水平比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。對(duì)照組DNA甲基化及DNMT表達(dá)水平最高, 梅毒血清固定組最低。見(jiàn)表2。

表1 四組Th1/Th2細(xì)胞因子比較(±s)

表1 四組Th1/Th2細(xì)胞因子比較(±s)

注：四組比較, P＜0.05

組別 例數(shù) Th1因子 Th2因子TFN-γ(pg/ml) IL-2(ng/L) TNF-α(pg/ml) IL-4(ng/L) IL-10(pg/ml)一期梅毒組 26 3.56±0.34 482.12±32.27 4.09±1.21 309.24±41.31 14.66±1.33二期梅毒組 22 3.01±0.19 452.12±29.29 3.67±0.88 334.12±42.98 15.82±1.09梅毒血清固定組 19 2.12±0.27 308.14±18.23 2.27±0.76 427.17±36.26 16.25±1.21對(duì)照組 25 4.33±0.26 514.22±34.87 5.67±1.17 265.45±18.93 9.54±0.34 F 7.435 8.577 5.688 5.578 7.658 P 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

表2 四組DNA甲基化及DNMT表達(dá)水平比較(±s)

表2 四組DNA甲基化及DNMT表達(dá)水平比較(±s)

注：四組比較, P＜0.05

組別 例數(shù) DNA甲基化(%) DNMT水平一期梅毒組 26 21.2±5.12 12.78±2.25二期梅毒組 22 14.31±3.34 9.89±1.61梅毒血清固定組 19 8.22±1.84 8.23±1.66對(duì)照組 25 27.55±3.62 15.76±2.17 F 16.456 9.467 P 0.000 0.000

3 討論

大量的研究已經(jīng)證實(shí), 人體在抵抗梅毒治病以及保護(hù)機(jī)體免遭梅毒感染過(guò)程中, 細(xì)胞免疫在機(jī)體免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用, 并被認(rèn)為是是清除體梅毒的主要方式［3］。目前, 臨床中驅(qū)梅治療的效果在很大程度上是與T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子有關(guān)系。胸腺內(nèi)分化成熟的 T 細(xì)胞, 根據(jù)體內(nèi)細(xì)胞表面抗原 CD 分子表達(dá)的不同分為 CD4+和 CD8+T 細(xì)胞,根據(jù)以往的研究, 梅毒固定患者外周血中CD4 +/ CD8 +的失衡導(dǎo)致免疫應(yīng)答, Th細(xì)胞分化在梅毒清除過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用［4］。

本研究的結(jié)果發(fā)現(xiàn), TFN-γ、IL-2、TNF-α在對(duì)照組中最高, 在梅毒血清固定組中最低, TFN-γ、IL-2、TNF-α是由Th1 細(xì)胞分泌, 并在機(jī)體中發(fā)揮各自的作用, Th1細(xì)胞因子的降低表明體內(nèi)中的NK細(xì)胞、 中性粒細(xì)胞的吞噬殺傷能力低下, 不能有效清除梅毒螺旋體；IL-4及IL-10因子對(duì)照組中最低, 在梅毒血清固定組中最高, IL-4及IL-10因子是由Th2分泌的, 其可以在介導(dǎo)體液免疫反應(yīng), 又可以在一定程度上抑制Th1的增殖, Th2因子的升高可以從側(cè)面反映病情的加重。大量研究發(fā)現(xiàn), 梅毒患者早期的免疫應(yīng)答主要以Th1細(xì)胞因子為主, 但隨著病程加重, Th2 型免疫應(yīng)答會(huì)被逐漸的激活, 進(jìn)一步抑制 Th1 型免疫反應(yīng)。當(dāng)Th1 /Th2平衡向 Th2 型轉(zhuǎn)向時(shí), 表明機(jī)體細(xì)胞免疫防御能力降低, 轉(zhuǎn)陰能力變?nèi)酰?］。梅毒血清固定的細(xì)胞免疫功能異常可能與DNA低甲基化具有密切的關(guān)系。

綜上所述, Th1 /Th2 細(xì)胞免疫平衡失調(diào)在梅毒血清固定患者中發(fā)揮了重要的作用, 其機(jī)制可能與DNA甲基化具有密切關(guān)系。

［1］包圖雅, 于娜沙, 曾抗, 等.梅毒血清固定患者細(xì)胞免疫功能研究.實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué), 2006, 13(2):254-255.

［2］謝海莉, 趙進(jìn), 李偉, 等.梅毒血清固定患者細(xì)胞免疫功能檢測(cè)分析.中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志, 2013, 27(1):49-51.

［3］關(guān)楊, 楊帆, 莫衍石, 等.54例梅毒血清固定患者臨床分析及細(xì)胞免疫功能檢測(cè).中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué), 2013, 13(10):1266-1268.

［4］何大保, 袁軍, 李真, 等.梅毒患者外周血T淋巴細(xì)胞表觀遺傳學(xué)DNA甲基化及組蛋白修飾的研究.海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2012, 18(11):1533-1536.

［5］任悅, 付蓉, 王化泉, 等.免疫相關(guān)性血細(xì)胞減少癥患者外周血CD4+T細(xì)胞DNA甲基化異常的分析.中華醫(yī)學(xué)雜志, 2014, 94(28):2165-2168.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.15.009

2016-05-18］

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