牛結核病的診斷方法

隗金玲

(黑龍江省賓縣畜牧獸醫局，黑龍江 哈爾濱 150400)

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牛結核病的診斷方法

隗金玲

(黑龍江省賓縣畜牧獸醫局，黑龍江 哈爾濱 150400)

牛結核的診斷有臨床診斷、血清學診斷、細菌學診斷和變態反應診斷等方法，其中最有實際意義的是變態反應診斷。至于臨床和細菌學診斷只對少數有明顯癥狀的牛才有一定的診斷價值，血清學方法目前對結核病的診斷意義不大，很少應用。本文對幾種常用的診斷方法進行簡要介紹，以供參考。

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1　臨床診斷

結核病畜多數不呈現明顯癥狀，對于這種隱性的結核病是不易診斷的，在結核病的防治中占有特別重要的位置，所以必須仔細地進行流行病學調查和臨床觀察。體表淋巴結劇烈腫大時，則可能為全身性結核；乳房淋巴結腫大或乳房后兩個乳腺區發生境界不明的無痛無熱的硬結，表面凹凸不平或乳頭萎縮，可能感染乳房結核；胸部叩診呈現實音或半實音，并有雜音、摩擦音，以及直腸檢查發現體壁腹膜有密發的珍珠樣結節時，可能是感染漿膜結核；陰道流出混濁的黏液，其中混有白色或黃色浮游物甚至血絲，常配不孕，發情不正常，流產以及輸卵管變硬時，可能是感染生殖器官的結核；如果發生消化障礙，習慣性腹痛，慢性腹瀉與便秘交替或糞便稀薄，混有黏液、膿汁或血汁，以及直腸檢查觸知腸系膜淋巴結腫大時，可能是感染腸結核。

2　細菌學診斷

對確定開放性結核病特別重要。對可疑為開放性肺結核進行細菌學診斷時，可用棉拭子采取氣管黏液或用病牛噴出的干痰塊涂片作抗酸性染色進行細菌檢查，必要時制成乳劑進行動物接種試驗。病畜常吞咽從肺內咳出的痰汁，細菌即可經過胃腸隨著糞便而排出體外。因此通過糞便也可以檢出開放性結核病畜。① 硫酸法：在痰液內加2倍量的6%的硫酸溶液后遠心沉淀20min，用3%的苛性鈉溶液1～2滴將沉淀物中和。②安替佛尼法：病料內加2倍量的安替佛尼液，放置溫箱1～2h后遠心沉淀，用3%醋酸溶液中和沉淀物或用蒸餾水洗滌幾次即可，處理后的痰液可作動物接種。

對開放性腸結核的細菌學診斷，一般可用烏蘭浩特法。取被檢動物的糞便30g加入安替佛尼液15mL和蒸餾水55mL，經2～3h后遠心沉淀30min，傾去上層液體，于沉淀物中加10mL點眼反應的判定標準。

陽性反應：有2個大米粒大或2×10mm以上的呈黃白色的膿性分泌物自眼角流出，或散布在眼的周圍，或積聚在結膜囊及眼角內；或上述反應較輕，但有明顯的結膜充血、水腫、流淚并有全身反應者，判定為陽性反應。

疑似反應：有2個大米粒大或2×10mm以上的灰白色、半透明的粘液性分泌物積聚在結膜囊內或眼角處，并無明顯的眼瞼水腫及其他全身癥狀者，判定為疑似反應。

陰性反應：無任何反應或僅有結膜輕微充血、流出透明漿液性分泌物者，判定為陰性反應。

對用老結核菌素皮內注射與點眼2種方法結合進行檢疫的牛只在2種方法中的任何一種呈陽性反應者，即判定為結核菌素陽性反應牛。2種方法中任何一種方法為疑似反應者，判定為疑似反應。對疑似反應的牛，也應該單獨隔離飼養，在30～45天后再作一次皮內注射和點眼試驗，如果連續2次均為疑似反應時，判為陽性。

3　靜脈內注射結核菌素反應

靜脈注射結核菌素除在一般牛群檢疫外也可在曾經感染結核病的牛群中進行，會引起發熱性全身反應，反應發生和經過比較迅速。當發生陽性反應時，體溫從3～4h后開始上升，于第六小時增高1.5～3.0℃達到最高度，至第十二小時又降至常溫，陽性反應伴有劇烈的機體反應和顯著的灶性反應，本法特別適用于迅速找出患進行性結核病牛。

提純結核菌素(PPD)的制造方法：將經過選擇的牛型結核菌標準強毒株的菌膜，接種于普通培養基表面上(pH值為7.2)，培養2.0～2.5個月，待所有的培養物全部發育良好時，以高壓蒸氣消毒3h后濾過。濾液用三氯醋酸沉淀，將沉淀的蛋白用氫氧化鈉溶解，再用pH值為7.2磷酸緩沖液稀釋到原體積的4%。濾液用微量凱氏定氮法測定其每毫升的蛋白量，最后稀釋為每毫升含1mg結核蛋白(50000IU)，此濾液即是提純結核菌素(PPD)。再經過無菌試驗、安全試驗、效力試驗：①用致敏豚鼠測定國際單位(每毫升含2mg結核蛋白，10萬IU)。②用結核牛進行效力試驗；用健康牛做特異性試驗，合格后分裝即成。

提純結核菌素(PPD)皮內試驗，目前多數國家用頸部皮內注射方法(犢牛亦可注射肩胛部)，每毫升含50000個IU的提純結核菌素原液0.1mL用注射用水或滅菌蒸餾水稀釋的每毫升含25000個IU的提純結核菌素0.2mL注射于牛頸側中部的皮內。注射前用卡尺測量術部中央皮厚度，作好記錄。注射后72h觀察反應，觀察時，以卡尺測量術部皮皺厚度(皮差)及術部腫脹面積的大小，并應仔細觀察局部有無熱、痛、腫脹等炎性反應，作好詳細記錄。

提純結核菌素皮內反應判定標準：① 陽性反應：皮差超過4mm或以上或皮差不到4mm，但局部呈彌漫性水腫者為陽性反應。②疑似反應：皮差在2.1～3.9mm，炎性水腫不明顯者，為疑似反應。③陰性反應：皮差為≤2mm，無炎性水腫者，或僅有堅實冷硬小結、鈕扣狀腫者為陰性反應。

2016-06-15

隗金玲(1976-)，女，高級獸醫師，本科，主要從事畜牧獸醫技術服務與推廣工作。

10.19369/j.cnki.2095-9737.2016.09.113

S858.23

B

2095-9737(2016)09-0124-01