肺癌胸腔積液液基細胞學與沉渣包埋的對比研究

魏麗

【摘要】 目的 探討胸水細胞診斷和離心沉渣病理診斷的差異及免疫組化標記在胸水離心沉渣中應用及意義。方法 122例原發性肺癌的胸腔積液的液基細胞片及其沉渣包埋HE、免疫組化切片， 行HE染色、鏡下觀察， 液基細胞片及沉渣包埋HE切片陽性的病例， 進行包埋沉渣的免疫組化標記檢測。結果 122例原發性肺癌的胸腔積液， 液基細胞學陽性率為44.3%（54/122）；沉渣包埋HE及免疫組化聯合應用證實明確46例發現癌細胞， 明確分型41例為轉移性腺癌， 3例為轉移性小細胞癌， 2例為轉移性鱗癌， 陽性率為37.7%；液基細胞學的陽性病例中， 有10例為增生的間皮細胞， 陰性病例中又有2例明確發現癌細胞。結論 原發性肺癌胸水液基細胞學檢查較沉渣包埋假陰性高， 漏診比率高， 沉渣包埋假陰性率低， 漏診及誤診減少， 并且明確腫瘤類型， 為臨床治療提供確切依據， 尤其是肺癌類型不定， 通過胸水沉渣包埋就能明確腫瘤類型， 避免患者通過穿刺活檢來明確類型而引起的痛苦及并發癥。

【關鍵詞】 原發性肺癌；胸水；胸腔積液；沉渣包埋

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.05.018

胸腔積液是多種肺部疾病的常見并發癥， 也是驗證病因、診斷其良惡性的重要手段。細胞病理學是其重要的診斷方法， 但胸水細胞形態與原發灶不同， 易造成假陰性、假陽性， 而導致延診、誤診、誤治。因此要尋求有效的提高肺癌的診斷陽性率的有效手段， 提高肺癌患者存活率及治愈率。現收集本院2013～2015年肺癌的胸腔積液的液基細胞片及離心沉渣細胞片， 探討胸水細胞診斷和離心沉渣的病理診斷的差異及免疫組化標記在胸水離心沉渣中應用及意義。現報告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 收集鄭州市第三人民醫院病理科2013～2015年共計122例原發性肺癌的胸腔積液的液基細胞片及其沉渣包埋HE、免疫組化切片。

1. 2 方法

1. 2. 1 胸水液基細胞制片 取胸水15 ml于試管， 3000 r/min， 離心5 min， 棄上清液， 取沉渣放于非婦科液基保存液中， 進行液基細胞學的自然沉降制片， 95%乙醇固定， HE染色， 光鏡觀察。

1. 2. 2 沉渣包埋 取胸水100 ml， 再加入0.5 ml冰醋酸， 靜置5 min， 3000 r/min， 離心5 min， 棄上清液， 加入95%的酒精靜置20 min， 棄酒精， 取沉渣用濾紙包裹， 用中性福爾馬林固定， 常規脫水、石蠟包埋、切片， HE染色， 光鏡觀察。

1. 2. 3 免疫組化檢測 石蠟切片厚4～5 μm， 采用SP法操作按試劑盒說明書進行， 每組均設陽性對照片。所選一抗CK7、NapsinA、TTF-1、Syn、CR、WT-1、CD163、P63及P40（試劑及試劑盒均購自福建邁新生物技術開發公司）， 復染、脫水、透明、封片。

1. 2. 4 免疫組織化學結果的判定 TTF-1、P40、WT-1及P63以細胞核著棕黃色為陽性， NapsinA、Syn、CR和CK7以胞質著棕黃色為（+）。

2 結果

2. 1 胸水液基細胞學結果 122例原發性肺癌的胸腔積液， 液基細胞學觀察68例未見癌細胞， 31例發現異型細胞不能排除癌， 23例發現癌細胞， 陽性檢出率為44.3%。細胞形態學轉移性腺癌：瘤細胞單個或成群排列， 成群細胞互相重疊， 呈桑葚狀， 許多細胞胞漿空泡、偶爾為較大的空泡， 核常折疊或呈鋸齒狀 ， 核膜明顯， 染色質呈顆粒狀、常有核仁。分化差的瘤細胞， 異型性更大， 核分裂象增多、排列較松散、較少重疊；轉移性鱗癌細胞：細胞形態大小不一， 形態學特征不典型；轉移性小細胞癌：細胞形態小， 排列密集成團、呈葡萄狀， 胞漿少， 漿內無空泡， 多呈裸核， 核染色粗、未見核仁。

2. 2 沉渣包埋 HE染色 切片中細胞更豐富， 細胞排列在同一平面上， 染色清晰， 排列方式與細胞學相似， 但細胞立體感不如細胞制片。

2. 3 免疫組化結果 沉渣包埋HE及免疫組化聯合應用觀察76例未見癌細胞， 46例見癌細胞， 其中41例為轉移性腺癌， 3例為轉移性小細胞癌， 2例為轉移性鱗癌， 陽性檢出率為37.7%， 其中胸水中轉移性肺腺癌TTF-1、CK7及NapsinA（+）；轉移性鱗狀細胞癌P63及P40（+）；轉移性小細胞癌Syn（+）。與液基細胞學的陽性病例比較， 發現有10例細胞學陽性病例為增生的間皮細胞， 細胞學陰性病例中又有2例明確發現癌細胞。沉渣包埋免疫組化結果與組織病理免疫組化結果一致。

3 討論

肺癌胸腔積液中癌細胞失去了原來組織及器官結構的束縛而自由漂浮、增生繁衍， 失去了原來組織形態， 與原發灶不同， 因此單靠細胞形態來判斷良惡性診斷， 敏感性較低， 尤其早期癌細胞異型性不太明顯的時候， 需要與反應性的間皮細胞鑒別， 單靠細胞學來明確診斷易造成假陰性， 而誤診、延診、誤治， 需免疫組織化學進一步明確診斷。

常規細胞學涂片簡捷方便、快速經濟， 但是涂片厚薄不均、細胞重疊、結構欠清晰， 再加上血性及炎細胞背景， 給診斷帶來干擾， 易造成假陰性。液基細胞學雖較傳統細胞涂片除去了血性背景， 細胞平鋪、薄， 但炎細胞是無法除去的， 陽性檢出率降低。本研究也證實了細胞沉渣包埋所有細胞排列在同一平面， 細胞結構清晰、背景清楚， 再聯合應用免疫組化可明確診斷、明確分型， 陽性檢出率提高， 假陰性比率也降低， 也為鑒別診斷提供了重要依據[1， 2]。尤其是肺癌中以胸水為首發癥狀時， 肺癌類型不明確， 可以通過胸水沉渣包埋及免疫組化明確腫瘤類型， 減少了患者穿刺活檢的痛苦， 并且為患者的后期治療及臨床分期提供了確切的依據。

總之， 胸水的液基細胞學和沉渣包埋的聯合使用將有利于明確診斷， 且明確腫瘤分型， 癌細胞陽性檢出率提高， 假陰性比率也降低， 避免誤診、延診、誤治， 為提高患者治愈率提供了有效的手段， 也為減少患者的痛苦提供了新的診斷手段。

參考文獻

[1] 陳學敬， 周立娟 ， 曲楊， 等.沉渣包埋聯合免疫組化在胸水轉移性肺腺癌與胸膜惡性間皮瘤鑒別診斷中的應用.診斷病理學， 2014， 21（5）：263-266.

[2] Lozano MD， Panizo A， Toledo GR， et al. Immunocytochemistry in the differential diagnosis of serous effusions： a comparative evaluation of eight monoclonal antibodies in Papanicolaou stained smears. Cancer， 2001， 93（1）：68-72.

[收稿日期：2015-09-29]