頂空氣相色譜法測定吲哚酮類衍生物DHGA的溶劑殘留量

胡秋菊 　何杰　楊建云　肖炳坤　黃榮清

[摘 要] 目的：建立頂空氣相色譜法測定吲哚酮類衍生物DHGA中乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷等4種殘留溶劑的分析方法。方法：采用石英毛細(xì)管DB-WAX柱（30m×0.45mm×0.85?m），F(xiàn)ID檢測器；進(jìn)樣口溫度為140℃，檢測器溫度為250℃；程序升溫：初始溫度為35℃，保持10min，然后以10℃·min-1的速率升至200℃，保持7min。以二甲基亞砜（DMSO）為溶劑，載氣為氮?dú)?。結(jié)果：乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷的線性范圍分別為24.96～99.86?g·mL-1（r=0.9995）、15.04～60.15?g·mL-1（r=0.9996）、3.64～14.55?g·mL-1（r=0.9995）、3.05～12.19?g·mL-1（r=0.9996）。乙醇平均回收率為100.7%（RSD=2.78%）、甲醇平均回收率為101.3%（RSD=1.57%）、四氫呋喃平均回收率為99.96%（RSD=1.36%）、二氯甲烷平均回收率為99.05%（RSD=2.09%）。結(jié)論：該方法能夠準(zhǔn)確、快速測定這4種殘留溶劑，適用于DHGA中殘留溶劑測定。

[關(guān)鍵詞] 頂空氣相色譜法；吲哚酮類衍生物；殘留溶劑

中圖分類號： O657 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：2095-5200（2016）01-085-03

目前，腫瘤死亡率居所有疾病第二位，僅次于心腦血管疾病[1]。腫瘤發(fā)生和發(fā)展與細(xì)胞調(diào)控激酶活性異常有著密切關(guān)系，抑制其活性可以起到抗腫瘤效果[2]。DHGA作為吲哚酮類衍生物，可以通過抑制這些激酶表達(dá)，表現(xiàn)出一定抗腫瘤活性[3]。

吲哚酮類衍生物DHGA在合成過程中使用了乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷等有機(jī)溶劑，為保證用藥安全、有效，需進(jìn)行殘留量檢測。

1 儀器與試劑

Aglient（GC-6820）氣相色譜儀，安捷倫Cerity QA-QC色譜工作站（美國Agilent 公司），F(xiàn)ID檢測器；Sartorius（BP211D）電子天平。乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷均為分析純；二甲基亞砜（DMSO）經(jīng)過蒸餾純化制得，DHGA原料藥（批號：20131202、2031203、20131204，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所提供）；氮?dú)?，（純?99.99）。

2 試驗方法與結(jié)果

2.1 溶液配制

對照品儲備液：精密稱取乙醇0.2496g、甲醇0.1504g、二氯甲烷0.0305g、四氫呋喃0.0364g等4種有機(jī)溶劑，于100mL量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，搖勻。

對照品溶液：精密量取對照品儲備液1mL于50mL量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，搖勻。

樣品溶液：精密稱量DHGA3批樣品（批號：20131202、20131203、20131204）各0.1g，于10mL量瓶中，加DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻。

空白溶液：精密移取2mLDMSO于頂空進(jìn)樣瓶中。

2.2 色譜條件

Agilent 6820氣相色譜儀，HP7694頂空進(jìn)樣器，F(xiàn)ID檢測器；色譜柱：石英毛細(xì)管DB-WAX柱（30m×0.45mm×0.85?m）；載氣：氮?dú)猓兌?99.9%），柱流速：3.6mL·min-1；柱溫為程序升溫，初始溫度為35℃，維持10min，然后以10℃﹒min-1速率升至200℃，維持7min；空氣流速：340 mL·min-1，氫氣流速：45mL·min-1，輔助氣流速：20mL·min-1；頂空瓶平衡溫度：90℃，傳送帶溫度：105℃，定量環(huán)溫度：110℃，頂空瓶加熱時間：30min；檢測器溫度：250℃，柱頭壓：5psi，分流比為10：1。在此色譜條件下，這4種殘留溶劑理論塔板數(shù)大于5000，分離度大于1.5。對照品溶液氣相色譜圖及空白DMSO色譜圖分別如圖1及圖2所示。

2.3 精密度

精密移取對照品溶液2mL，置20mL頂空瓶中，平行6次，按“2.2”項下氣相色譜條測定，計算乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷RSD分別為1.55%、1.97%、1.89%、1.67%，RSD均小于2%，說明精密度良好。

2.4 線性關(guān)系

從對照品儲備液中精密量取20?L、32?L、40?L、48?L、60?L、80?L分別置頂空瓶中，加DMSO至2mL，密封，按“2.2”項下氣相色譜條件測定。以被測殘留溶劑濃度x（?g·mL-1）為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，所得線性回歸方程見表1。表明乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷在相應(yīng)線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r>0.999）。

2.5 檢測限與定量限

取乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷適量，以DMSO逐步稀釋，進(jìn)行測定，按基線噪音信號3倍和10倍計算檢測限與定量限。結(jié)果乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷檢測限分別為39.50ng·mL-1、39.58ng·mL-1、44.35ng·mL-1、132.50ng·mL-1，定量限分別為98.75ng·mL-1、138.50ng·mL-1、88.70ng·mL-1、530.00ng·mL-1。

2.6 重復(fù)性

取一批DHGA樣品（批號為20131202），按“2.1”項下方法配制樣品溶液6份，進(jìn)行測定。結(jié)果乙醇、甲醇、四氫呋喃和二氯甲烷均未檢出。

2.7 加樣回收率試驗

取DHGA（批號20131202）樣品約0.1g，精密稱定，置10mL量瓶中（共10份），1份作為空白，另外9份加入一定量對照品儲備液，配成80%（3份）、100%（3份）、120%（3份）對照品溶液。取2mL置頂空瓶中，按“2.2”項下氣相色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果見表2。乙醇、甲醇、四氫呋喃和二氯甲烷平均回收率（n=9）分別為100.7%、101.3%、99.96%、99.05%。

2.8 樣品測定

按“2.2”項下色譜條件，檢測了3批DHGA樣品中有機(jī)溶劑殘留量。結(jié)果表明：3批DHGA樣品中均未檢測出乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷，符合規(guī)定。

3 討論

3.1 溶劑選擇

由于DHGA不溶于水，微溶于N，N-二甲基甲酰胺（DMF），所以不宜選擇常用水以及DMF作為溶劑。溶劑選擇熔點(diǎn)高、溶解性能好，常用DMSO作為溶劑[4]。

3.2 進(jìn)樣方式選擇

溶液直接進(jìn)樣和頂空進(jìn)樣都是常用測定殘留溶劑方法[5-6]，溶液直接進(jìn)樣法，不僅對色譜柱有污染而且樣品基線會漂移，產(chǎn)生鼓包，頂空進(jìn)樣可以避免污染色譜柱，所以最終選擇頂空進(jìn)樣。

3.3 結(jié)語

本試驗所建立方法能夠準(zhǔn)確、靈敏測定DHGA中乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷等有機(jī)溶劑殘留，可以作為DHGA有機(jī)殘留測定方法。

本文對3批DHGA原料藥樣品進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)這3批樣品中均未含有乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷等殘留溶劑，說明在合成過程中能夠很好除去其中殘留溶劑，合成工藝良好。

參 考 文 獻(xiàn)

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