UC-MSC治療兒童造血干細胞移植后GVHD的療效觀察

何 潔，趙 晶，龐榮清，阮光萍，蔡學敏，朱向情，潘興華

UC-MSC治療兒童造血干細胞移植后GVHD的療效觀察

何 潔，趙 晶，龐榮清，阮光萍，蔡學敏，朱向情，潘興華

目的觀察臍帶間充質干細胞（UC-MSC）治療兒童造血干細胞移植后移植物抗宿主病（GVHD）的療效。方法對1例造血干細胞移植后發生GVHD的患兒行UC-MSC治療，共治療7次，每次4×107個細胞（20 ml）。結果患兒在接受UCMSC治療后獲得部分緩解（PR）。 結論 UC-MSC對治療兒童造血干細胞移植后的GVHD具有一定的療效。

臍帶；間充質干細胞；兒童；移植物抗宿主病；療效

隨著移植技術的進步，異基因造血干細胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation，allo-HSCT)目前已成為治療白血病的有效方法，移植后成功率增高，死亡率顯著降低，但是與移植相關的并發癥、尤其是移植物抗宿主病 (graft-versushost disease，GVHD)的發生會嚴重影響患者的生存質量。目前，慢性GVHD（cGVHD）除了應用免疫抑制劑外，仍無有效應對方法[1]。cGVHD的發病機制復雜，幾乎影響到所有組織器官，臨床表現多樣化，其特征類似于自身免疫疾病及其他免疫疾病，如硬皮病、干燥綜合征、免疫性血細胞減少癥等。因此，尋求一種cGVHD的有效治療方法是臨床亟待解決的問題。臍帶間充質干細胞(UC-MSC)免疫原性低，幾乎可以影響免疫系統所有的細胞，具有免疫調節、免疫抑制作用，可有效的治療GVDH[2]。Ringden等[3]報道，骨髓間充質干細胞能有效控制常規免疫抑制療法無效的嚴重急性GVHD。隨后臍帶MSC也用于治療成人GVHD[4]。本研究用臍帶MSC治療1例造血干細胞移植后發生GVHD的患兒，取得了較好的療效，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 病例資料 患兒出生6個月時，因貧血在廣州某大型醫院行地貧基因檢查確診為“β-地中海貧血”，主要給予輸注紅細胞懸液以及不規則去鐵治療。患兒3歲時于2006年9月住我院血液科行臍血干細胞移植治療，細胞植入后，患兒恢復自身造血。3個月后病情反復，治療上主要給予輸注紅細胞懸液、去鐵治療。2012年7月患兒在我院血液科行allo-HSCT，供體為其胞弟。移植后1個月，患兒并發急性肝臟GVHD，給予甲潑尼松龍、環孢素等治療后，膽紅素、轉氨酶明顯下降；同年9月常規胸部CT檢查提示肺部感染，考慮肺部真菌感染，給予伏立康銼抗感染治療。2015年2月患兒常規檢查提示膽紅素、轉氨酶升高，考慮肝臟GVHD反復，給予甲潑尼松龍治療后，轉氨酶、膽紅素等逐漸減量，但是仍然存在皮膚及肝臟慢性GVHD。常規檢查示轉氨酶(ALT)278.4 U/L，總膽紅素(TBIL)117.6 mmol/L，轉肽酶(GGTL)2124 mmol/L，出現頸部、腹部皮膚色素沉積和脫屑。經院內會診，經家屬簽字同意后，決定給予UC-MSC治療，擬定UC-MSC治療方案。

1.2 UC-MSC體外培養擴增 取足月妊娠剖宮產健康胎兒的臍帶，以PBS充分沖洗血塊后，用剪刀分割為直徑約1～2 mm大小的組織塊，移入1.5 ml EP管內，用眼科組織剪剪成糊狀后，轉移至培養瓶，加入含10%FBS的DMEM/F12培養液中，置于含有5%CO2、37℃飽和濕度培養箱中培養，細胞達80%匯合后，以0.2%的胰酶/EDTA消化，并按1∶3的比例傳代。收集第3代細胞，經流式細胞儀檢測細胞表型并確定為UC-MSC。

1.3 UC-MSC移植治療 收集第3代處于對數生長期的細胞，按照1×106個細胞/kg體重劑量，每次治療劑量UC-MSC懸液終體積為20 ml，細胞數量為4×107個。輸注前檢測細胞活性≥85%。采用靜脈輸注方式輸入患兒體內，輸注時間≤20 min，24 h內嚴密觀察患兒生命體征。

患兒家屬簽署知情同意書，并且在征得醫院倫理委員會的批準后，在原有免疫抑制治療的基礎上，實施UC-MSC治療，每次1個治療劑量，每2 w治療1次，行7次治療，治療結束后評價療效。

1.4 療效評價 療效判斷標準：完全緩解(CR)：GVHD癥狀及體征消失；部分緩解(PR)：1個或多個受累器官臨床癥狀及相關指標明顯改善＞50%，并且其他器官癥狀無加重；疾病穩定(SD)：GVHD癥狀及體征無改變；疾病進展(PD)：治療期間GVHD癥狀進行性加重。

2 結果

患兒于2015年2月12日開始接受UC-MSC輸注，治療期間未見明顯不良反應，6月12日常規檢查示 ALT 108 U/L，TBIL 29.5 mmol/L，GGTL＞1653 mmol/L；頸部皮膚色素減退，脫屑停止。治療總評價為PR。

3 討論

間充質干細胞(MSC)是具有自我更新和多向分化潛能，能生成脂肪細胞、成骨細胞、成軟骨細胞、神經細胞和成肌細胞的非造血成體干細胞。研究證實，MSC不僅能通過分泌眾多細胞因子，改善造血微環境，促進移植后造血功能的重建，而且具有低免疫原性和免疫調節的特性，可以避免和減輕宿主免疫應答，誘導特異性免疫耐受的形成[5]。對比其他來源的MSC，臍帶來源的間充質干細胞有增殖能力強、取材不受限制、無倫理問題制約、可以大量擴增等優勢，已經成為MSC治療的最佳選擇。

臨床研究結果顯示，MSC對于造血干細胞移植后重度GVHD具有預防效果[11-12]，但具體作用機制不清楚，一般認為是通過多種途徑發揮免疫調節作用，作用于淋巴細胞，抑制淋巴細胞增殖，調節細胞因子、趨化因子分泌等[6]。但這些免疫調節效應是否適用于cGVHD，是否MSC的治療與細胞劑量有關，是否可能誘發原發病復發或進展等尚不明確。目前對cGVHD仍沒有有效的治療方法，因此，MSC療法成為難治性GVHD可以選擇的有效措施之一。

本例在2012年7月接受allo-HSCT術后至今，一直服用免疫抑制劑，至2015年2月出現肝臟和皮膚cGVHD，按1×106個細胞/kg的劑量，連續7次輸注，結果表明，臨床療效未PR，表明UC-MSC治療有一定療效，與文獻報道相一致[7]。

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[4] 陳廣華，楊婷，田竤，等.臍帶間充質干細胞治療糖皮質激素耐藥的嚴重型急性移植物抗宿主病19例分析[J].中華血液學雜志，2012,33(4):303-306.

[5] Xu J,Wang D,Liu D,et al.Allogeneic mesenchymal stem cell treatment alleviates experimental and clinical sjogren syndrome [J].Blood,2012,120(15):3142-3151.

[6] Ringdén O,Uzunel M,Rasmusson I,et al.Mesenchymal stem cells for treatment of therapy-resistant graft-versus-host disease[J]. Transplantation,2006,81(10):1390-1397.

[7] Ivanova-Todorova E,Bochev I,Dimitrov R,et al.Conditioned medium from adipose tissue-derived mesenchymal stem cells induces CD4+FOXP3+cells and increases IL-10 secretion[J]. J Biomed Biotechnol,2011,2012(10):295167.

R 318.1

A

1004-0188（2016）12-1369-02

10.3969/j.issn.1004-0188.2016.12.005

2016-07-04）

國家科技支撐計劃項目（2014BI01B0）；國家973計劃項目（2012CB5181060）；云南省科技計劃重點項目(2013CA005）

650032昆明,成都軍區昆明總醫院細胞生物治療中心，干細胞與免疫細胞生物醫藥技術國家地方聯合工程實驗室,云南省細胞治療技術轉化醫學重點實驗室，云南省干細胞工程實驗室，昆明市干細胞與再生醫學研究重點實驗室

龐榮清,E-mail:pangrq2000@aliyun.com；潘興華，E-mail:xinghuapan@aliyun.com