昆蟲抗藥性檢測技術

趙麗萍（西藏職業技術學院，西藏　拉薩　850000）

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昆蟲抗藥性檢測技術

趙麗萍
（西藏職業技術學院，西藏拉薩850000）

摘要：隨著各類農藥的不斷使用，昆蟲抗藥性水平越來越高，造成的經濟損失也越來越嚴重。因此，要提前監測出昆蟲的抗藥性，就必須有一套簡便、快捷、準確、合理的檢測方法。本文對常用的生物檢測法、區分劑量法、生化檢測法及神經電生理檢測法進行了闡述，并對這些方法的優缺點進行了分析。

關鍵詞：昆蟲抗藥性；檢測方法；抗性檢測

昆蟲抗藥性是一種普遍的、潛在的、強大的微進化現象，該現象卻在很大程度上受到人類活動的影響，同時人類活動控制著抗藥性的發展速度和嚴重程度。各類昆蟲在殺蟲劑的高選擇壓力下都會產生抗性。據相關報道，自1960年至今，已有超過600種昆蟲對農藥產生抗藥性，且造成的損失越來越嚴重[1]。

昆蟲主要通過改變行為、代謝解毒能力增強、表皮穿透力降低、靶標敏感性降低等方式增強抗藥性。要了解昆蟲抗藥性水平就必須先建立一套簡單、快捷、準確的抗藥性檢測方法，才能準確的掌握昆蟲抗藥性水平，明確昆蟲產生抗性的農藥種類，最終制定出合理的防治方案。目前用到的常規檢測方法有生物檢測法、區分劑量法、生物化學法及神經電生理檢測法。

1生物測定法

生物檢測法又稱抗性倍數法[2]，是通過比較室內種群和田間抗性種群的LD50或劑量-反應曲線（LD - P1ine）的斜率來描述的，該方法是最經典、最基礎的方法，包括浸漬法、點滴法、表面接觸法或藥膜殘留法和飼喂法4種。施德等[3]用浸漬法對浙江地區褐飛虱抗性水平進行了檢測。曹明章等[4]用點滴法測定了2001—2002年浙江等四省水稻二化螟4齡幼蟲對阿維菌素、殺蟲單、氟蟲清和三唑磷的抗性水平。蘭亦全等[5]用點滴法測定了福建省福州市、南平、莆田、廈門等地甜菜夜蛾4齡幼蟲的抗性水平，并比較了3種新型藥劑對6個田間種群的毒力。

生物檢測法可根據藥劑的理化性質及作用特點、害蟲的危害特點及其他生物學特性等確定，也可根據情況進行適當的改進。該方法也存在一些局限性，檢測的時候需要大量活蟲，費時費力；獲得的結果滯后于抗性的發展速度，不適合用于早期的抗性檢測；不能測出抗性產生的機制，只能測出抗性水平[6]。

2區分劑量法

區分劑量法是利用抗性個體百分率來表示抗性水平的高低，比較好的區分劑量是用殺死大約99%的敏感個體劑量，使用這個標準作為區分劑量是允許極少量的敏感個體存活，而又幾乎不殺死更高劑量下可能死亡的抗性個體[7]。于2004年，郭瑩等在研究不同溫度下，小菜蛾對毒死蜱敏感程度時運用此方法，發現在一定范圍的低溫環境下飼養的小菜蛾對藥劑毒死蜱更敏感[8]。唐振華等在研究淡色庫蚊對馬拉硫磷抗性時，提出可以區分劑量法來區分RR、RS和SS個體，并最終測得抗性個體百分率。

區分劑量法比傳統的生物測定法更簡便，可以進行早期的抗性檢測，標定準確的區分劑量能夠監測出初次出現的少數抗性個體，起到早期的預警作用。

3生化測定法

昆蟲產生抗藥性主要是由于靶標酶對殺蟲劑的敏感能力降低或是解毒酶對殺蟲劑的解毒能力增強有關，這是對昆蟲抗藥性進行生化檢測法的理論依據。一般對酯酶、多功能氧化酶（包括NADPH -細胞色素P - 450還原酶、細胞色素P450、NADH-細胞色素b - 5還原酶、細胞色素b - 5、環氧化物水化酶、芳烴羥化酶及磷脂等）和谷胱甘肽- S -轉移酶3種酶進行檢測，從而確定昆蟲的抗農藥水平。

常用的檢測方法有濾紙斑點法、硝酸纖維素膜斑點法、微量滴定度酶標板法。譚維嘉等[9]研究指出，棉蚜對溴氰菊酯的敏感性與酯酶之間存在相關性，隨著棉蚜對溴氰菊酯的不敏感性增加，棉蚜體內的酯酶活力卻在增高。Bu11等[10]研究發現，煙蚜夜蛾體內的谷胱甘肽- S -轉移酶活力隨著煙蚜夜蛾對甲基對硫磷的抗性升高而增高。劉永杰等[11]發現，甜菜夜蛾抗性品系體內的細胞色素P450含量比敏感品系的高。楊帆等[12]研究表明，桃蚜高效氯氰菊酯抗性品系比敏感品系體內的乙酰膽堿酯酶活性高。生化檢測法與傳統的生物測定法相比，生化測定法更加準確、快速，可以對單頭昆蟲進行抗性檢測，能夠較早的監測出昆蟲的抗性情況。

4神經電生理檢測法

用神經電生理方法比較害蟲的敏感性或抗性已經越來越多地被國內外學者所采用。該主要應用于研究敏感與抗性昆蟲的神經靶標敏感性差異以及藥劑的聯合作用。電壓鉗技術和細胞膜片鉗技術是神經電生理技術的兩個最基本最直接的方法。細胞膜片鉗技術的不斷完善，對神經電生理技術起到了巨大的推動作用。Pichon等[13]用電壓鉗技術研究了美洲大蠊大軸突的殺蟲劑的作用機理和電生理學特性，結果表明，殺蟲劑的作用在與電壓相關的鈉、鉀通道上。還有研究證明，煙葉蛾的神經不敏感性是對擬除蟲菊酯產生抗藥性的重要原因[14]。Amar等[15]利用細胞膜鉗技術研究了溴氰菊酯對蜚蠊胚胎神經細胞的作用，表明胚胎神經元靜息電位較低，具有電不敏感性。

雖然神經電生理檢測方法更加快捷、操作起來很方便，但是電生理測得的結果必須與室內測定及田間試驗結果相結合，這樣才能具有更高的可靠性。利用電生理技術直接快速地測定害蟲抗藥性，還需要進一步的研究。

參考文獻

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[3]施德，虞軼俊，盛仙俏，等.浙江省褐飛虱抗藥性監測與治理[J].中國稻米，2008（1）：67-68.

[4]曹明章，沈晉良，張金振，等.二化螟抗藥性監測和對三唑磷抗性的遺傳分析[J].中國水稻科學，2004，18（1）：73-79.

[5]蘭亦全，趙士熙，吳剛.福建主要菜區甜菜夜蛾的抗藥性監測[J].熱帶作物學報，2005，26（4）：90-93.

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[9]譚維嘉，王荷，曹煜.棉蚜對溴氰菊酯不敏感性與水解酶的變化初探[J].植物保護學報，1988，15（2）：135-138.

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[12]楊帆，帥霞.桃蚜高效氯氰菊酯抗藥性與乙酰膽堿酯酶的關系[J].植物保護，2008，34（5）：60-62.

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收稿日期：2015—10—22