p53凋亡刺激蛋白抑制因子表達水平與鼻咽癌臨床病理學特征的關系▲

吳 芳 王仁生 張 勇 方業穎 胡 凱

(廣西醫科大學第一附屬醫院放療科，南寧市 530021，E-mail：96160f@163.com)

論著·臨床研究

p53凋亡刺激蛋白抑制因子表達水平與鼻咽癌臨床病理學特征的關系▲

吳 芳 王仁生 張 勇 方業穎 胡 凱

(廣西醫科大學第一附屬醫院放療科，南寧市 530021，E-mail：96160f@163.com)

目的 探討p53凋亡刺激蛋白抑制因子(iASPP)表達水平與鼻咽癌臨床病理學特征的關系。方法 采用免疫組化法檢測iASPP在62例鼻咽癌患者鼻咽癌組織中的表達情況，比較不同臨床病理特征者的iASPP表達情況。結果 62例患者中iASPP陽性表達者44例(71.0%)，陰性表達者18例(29.0%)。不同性別、年齡、病理分型、T分期和臨床分期患者的iASPP陽性表達率比較，差異均無統計學意義(P均>0.05)，而不同N分期患者的iASPP陽性表達率比較，差異有統計學意義(P<0.05)。N分期與iASPP陽性表達率呈正相關(r=0.368，P=0.003)。結論 鼻咽癌患者的N分期與iASPP陽性表達有關，iASPP的表達水平有可能成為鼻咽癌預后的預測指標。

鼻咽癌；p53凋亡刺激蛋白抑制因子；臨床病理特征

鼻咽癌是我國南方地區常見的惡性腫瘤之一，放射治療是鼻咽癌的主要治療手段，單純放療的5年生存率為50%～60%。隨著調強放療越來越廣泛地應用于臨床，目前鼻咽癌治療失敗的主要原因是遠處轉移[1]。因此尋找影響鼻咽癌侵襲轉移的分子標志物，對鼻咽癌的預后判斷及抗鼻咽癌侵襲轉移有著非常重要的意義。p53凋亡刺激蛋白抑制因子(inhibitory member of the apoptosis stimulating protein of p53 family，iASPP)是近年發現的一個重要的蛋白質，能競爭性地與p53結合，抑制p53基因誘導的細胞凋亡，是p53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulating protein of p53，ASPP)家族中唯一的抑制蛋白，被認為是一種新的癌基因。目前國內外對iASPP的研究主要針對肺癌、乳腺癌及白血病等，在鼻咽癌中尚缺乏研究。本研究應用免疫組化的方法，檢測iASPP在鼻咽癌組織中的表達情況，探討iASPP在鼻咽癌組織中的表達及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2012年1～6月在廣西醫科大學第一附屬醫院經病理證實的鼻咽癌患者的鼻咽癌組織石蠟病理標本62例。患者入組標準：(1)經病理檢查確診為鼻咽癌且尚未進行任何放療、化療等抗癌治療者；(2)按照鼻咽癌[2009美國癌癥聯合委員會(American Joint Committee on Cancer，AJCC)第7版]分期[2]為Ⅰ～Ⅳb期的患者；(3)功能狀態(performance status，PS)評分[3]≤2分；(4)放療前均行全身檢查，無遠處轉移和其他腫瘤病史；(5)放療前血常規、肝腎功能等各項指標均無異常。排除標準：(1)發生任何遠處轉移的患者；(2)既往或目前患任何其他惡性腫瘤的患者；(3)任何其他疾病或狀況為放化療禁忌證(如感染活躍期，心肌梗死后6個月內，癥狀性心臟病，包括不穩定心絞痛、充血性心衰或未控制的心律失常，免疫抑制治療)；(4)妊娠、哺乳期婦女；(5)嚴重骨髓功能障礙者；(6)具有出血傾向者。共納入患者62例，男47例，女15例，年齡19～71歲，中位年齡46歲。世界衛生組織分型[3]Ⅰ型2例、Ⅱ型3例、Ⅲ型57例。按美國癌癥聯合委員會 2009分期系統分期，Ⅰ期0例，Ⅱ期3例，Ⅲ期30例，Ⅳa-b期29例。T1、T2、T3、T4期分別為3、9、29、21例。N0、N1、N2、N3期分別為2、15、32、13例。

1.2 主要試劑 兔抗人iASPP多克隆抗體購于北京博奧森生物技術有限公司(批號bs-0284R)，Supervision即用型二步法檢測試劑盒購于上海長島生物技術有限公司(批號ZKSP-10446)。

1.3 檢測方法 采用免疫組化Supervision二步法檢測鼻咽癌組織中iASPP的表達，嚴格按試劑盒說明書操作：蠟塊按4 μm厚度切片，常規脫蠟水化。在pH 6.0的0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液中煮沸熱修復抗原，3% H2O2室溫孵育15 min，非免疫血清封閉40 min，加一抗4℃孵育過夜，加Supervision鼠/兔-辣根過氧化物酶廣譜檢測系統，室溫下孵育20 min，二氨基聯苯胺顯色，蘇木精復染，梯度酒精(70%、80%、90%無水酒精)脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.4 陽性結果判定 iASPP蛋白陽性定位于細胞漿和細胞核，以細胞漿和(或)細胞核出現棕黃色顯色為iASPP蛋白表達陽性。每張病理切片通過光學顯微鏡放大400倍，隨機選取5個視野進行iASPP陽性細胞結果判定。著色強度的判定：不著色為0分，淡黃色為1分，褐色為2分，深棕色為3分。陽性細胞百分比的判斷：<5%為0分，5%～25%為1分； 26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。兩部分的得分之和為最后的得分(0～1分為陰性，2分為弱陽性，3～5分為陽性，6～7分為強陽性)。

1.5 統計學分析 采用SPSS 17.0進行統計學分析。計數資料比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 鼻咽癌組織中iASPP的表達情況 62例鼻咽癌組織標本中，iASPP陽性表達44例(71.0%)，見圖1，陰性表達18例(29.0%)。

圖1 鼻咽癌組織中iASPP的表達(Supervision法，×400)

2.2 iASPP表達與鼻咽癌臨床病理因素間的關系 不同性別、年齡、病理分型、T分期和臨床分期患者的iASPP陽性表達率比較，差異均無統計學意義(P均>0.05)，但不同N分期患者的陽性表達率比較，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。進一步相關性分析結果顯示，iASPP陽性表達率和N分期呈正相關性(r=0.368，P=0.003)。

表1 iASPP表達水平與臨床病理因素間的關系(n，%)

3 討 論

iASPP是2003年發現的ASPP家族新成員，由PPPIRl3L基因編碼，全長由828個氨基酸組成，存在于細胞質和細胞核。iASPP與其他兩個家族成員(ASPP1和ASPP2)在結構上的共同特點是C-末端都含有SH3結構域、錨蛋白重復序列、富含脯氨酸的結構域。C-末端是ASPP家族的主要作用位點，能與p53 DNA結合區域結合從而發揮作用。但與其他兩個家族成員不同的是，iASPP能競爭性地與p53結合，抑制p53基因誘導的細胞凋亡，是ASPP家族中唯一的抑制蛋白，被認為是一種新的癌基因。大量研究表明iASPP在多種惡性腫瘤中均呈現高表達，而在正常組織中低表達或不表達。其中，Zhang等[4]發現iASPP基因在急性早幼粒細胞白血病和急性粒-單核細胞白血病亞型M4EO中的表達明顯高于其他急性粒細胞白血病病類型，并且在急性白血病患者細胞中iASPP表達水平明顯高于完全緩解期患者和健康人，這提示iASPP基因可能在急性粒細胞白血病進展中發揮重要作用。Liu等[5]在對109例頭頸鱗癌標本進行檢測后發現，iASPP蛋白和mRNA在頭頸鱗癌組織中的表達顯著高于癌旁黏膜組織。Chen等[6]發現iASPP在非小細胞肺癌組織中的表達明顯高于癌旁組織。在口腔鱗狀細胞癌[7]、食管癌[8]、宮頸癌[9]、乳腺癌[10]、肝癌[11]、子宮內膜癌[12]、卵巢癌[13]等組織中，iASPP均呈高表達。這些研究結果提示iASPP的高表達可能在腫瘤的發生中發揮著非常重要的作用。本研究結果也顯示，在62例鼻咽癌患者中，iASPP在大部分患者(71.0%)鼻咽癌組織中呈陽性表達。

隨著對iASPP基因研究的不斷深入，人們發現iASPP與腫瘤的一些生物學行為密切相關。Chen等[6]通過shRNA技術下調A459和95D肺癌細胞中iASPP的表達，結果發現細胞的增殖能力隨之下降。Chen等[14]研究發現口腔舌鱗癌細胞中iASPP表達增加與腫瘤分化差及淋巴結轉移有關，而降低iASPP的表達可導致癌細胞G0/G1期阻滯，細胞凋亡減少，增殖能力下降。Laska等[15]認為iASPP可以促進腫瘤細胞遷移，并且可能對促進腫瘤轉移起重要作用。Liu等[12]用免疫組織化學法檢測45例子宮內膜腺癌組織和26例正常子宮內膜組織中iASPP的表達，結果顯示子宮內膜腺癌中iASPP表達明顯增加，并與腫瘤浸潤及淋巴結轉移密切相關。Cao等[9]分析149例早期宮頸鱗癌(FIGO Ⅰb1-Ⅱa期)中iASPP的表達及其與臨床病理因素間的關系，結果顯示iASPP在宮頸鱗癌中表達升高，并與腫瘤分期、深間質浸潤、盆腔淋巴結轉移等密切相關，iASPP高表達者5年總生存期和無病生存期明顯低于iASPP低表達者(P<0.05)，進一步行多因素分析顯示iASPP高表達是宮頸癌總生存率的獨立預后因素。以上研究結果均提示iASPP可能與腫瘤的進展有關，其可成為評估患者預后的一個指標。本研究中，不同N分期患者鼻咽癌組織的iASPP陽性表達率存在差異(P<0.05)，兩者呈正相關性(P<0.05)，即隨著N分期的增高iASPP陽性表達率升高，提示iASPP表達與鼻咽癌預后密切相關，這與上述文獻報告相似。

綜上所述，iASPP在鼻咽癌組織中的表達水平與患者的N分期有關，其有可能成為鼻咽癌預后的一個預測指標，但尚需進一步擴大病例研究。

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Relationship between expression level of inhibitory member of the apoptosis stimulating protein of p53 family and clinicopathological features in nasopharyngeal carcinoma

WUFang,WANGRen-sheng,ZHANGYong,FANGYe-yin,HUKai

(DepartmentofRadiotherapy,theFirstAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China)

Objective To explore the relationship between expression level of inhibitory member of the apoptosis stimulating protein of p53 family (iASPP) and clinicopathological features in nasopharyngeal carcinoma.Methods Immunohistochemistry was used to detect the expression of iASPP in the carcinoma tissues of 62 patients with nasopharyngeal carcinoma.The clinicopathological features were compared among the patients with different expressions of iASPP.Results Of 62 patients,positive expression of iASPP was observed in 44 patients (71.0%),and negative expression in 18 patients(29.0%).No significant difference in the positive expression rate of iASPP was found among the patients with different genders,ages,pathological types,T stages or clinical stages(P>0.05).But there was significant difference in the positive expression rate of iASPP among the patients with different N stages(P<0.05).The positive expression rate of iASPP positively correlated with N stage(P<0.05).Conclusion N stage correlates with the positive expression of iASPP in patients with nasopharyngeal carcinoma.iASPP expression level may be a prognostic predictor of nasopharyngeal carcinoma.

Nasopharyngeal carcinoma,Inhibitory member of the apoptosis stimulating protein of p53 family,Clinicopathological feature

廣西醫科大學青年科學基金(GXMUYSF2014036)

吳芳(1978～)，女，博士，副主任醫師，研究方向：鼻咽癌綜合治療。

王仁生(1963～)，男，博士，主任醫師，研究方向：鼻咽癌綜合治療，E-mail：13807806008@163.com。

R 739.6

A

0253-4304(2016)08-1075-03

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.08.07

2016-03-13

2016-05-31)