宮頸細胞DNA倍體測定聯合人乳頭瘤病毒感染檢測篩查宮頸癌的價值▲

莫偉杰 趙仁峰 李 偉 藍 智 吳月蓮

(1 廣西皮膚病防治研究所，南寧市 530003，E-mail：552159985@qq.com；2 廣西壯族自治區人民醫院婦產科，南寧市 530021；3 廣西艾滋病臨床治療中心(南寧)暨南寧市第四人民醫院，南寧市 530023)

臨床創新

宮頸細胞DNA倍體測定聯合人乳頭瘤病毒感染檢測篩查宮頸癌的價值▲

莫偉杰1趙仁峰2李 偉1藍 智3吳月蓮2

(1 廣西皮膚病防治研究所，南寧市 530003，E-mail：552159985@qq.com；2 廣西壯族自治區人民醫院婦產科，南寧市 530021；3 廣西艾滋病臨床治療中心(南寧)暨南寧市第四人民醫院，南寧市 530023)

目的 探討宮頸細胞DNA倍體測定聯合人乳頭瘤病毒(HPV)感染檢測在宮頸癌篩查中的價值。方法 宮頸癌高危患者600例，分別采用AcCell系統進行宮頸細胞DNA定量分析和第二代雜交捕獲技術(HC2)檢測高危型HPV。上述檢測任何一項陽性患者進行陰道鏡下取材病理診斷。以病理檢查結果為“金標準”，分析上述兩種檢測方法在宮頸癌篩查中的價值。結果 600例宮頸癌高危患者中，AcCell系統篩查宮頸細胞DNA倍體陽性276例(46.0%)；HC2篩查HPV-DNA陽性239例(39.8%)。397例病理學檢查結果：慢性炎癥195例，宮頸上皮內瘤樣病變輕度97例，宮頸上皮內瘤樣病變中度44例，宮頸上皮內瘤樣病變重度35例，宮頸浸潤癌26例。細胞DNA定量分析陽性診斷宮頸癌的敏感性為92.31%，特異性為40.16%；HC2檢測方法診斷宮頸癌的敏感性為69.23%，特異性為45.55%。DNA定量分析方法結合HC2檢測篩查宮頸癌的敏感性和特異性分別為61.54%、 85.71%。結論 細胞DNA定量分析方法宮頸癌篩查的敏感性高，該方法與HC2檢測相結合，可提高特異性。

宮頸癌；DNA定量分析；人乳頭瘤病毒；第二代雜交捕獲技術；篩查

宮頸癌發病前存在一個較長的、可逆的癌前病變期，是目前唯一可以早期發現并能治愈的婦科癌癥，其篩查方法一直受到婦科醫生的重視。近年來有許多新的宮頸癌篩查及診斷方法不斷出現，其中細胞DNA定量分析方法一直受到關注。本文對宮頸癌高危患者進行細胞DNA含量測定聯合第二代雜交捕獲技術(hybrid capture Ⅱ，HC2)檢測人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染，探討其在宮頸癌篩查中的價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2012年1月至2015年1月廣西皮膚病防治研究所和廣西壯族自治區人民醫院收治有宮頸癌高危因素患者600例，包括異常宮頸出血、接觸性出血、宮頸糜爛、宮頸異常贅生物、宮頸癌術后等，經薄層液基細胞學技術(thinprep cytologic test，TCT)檢測，診斷為未明確診斷意義的不典型鱗狀細胞(atypical squamous cells of undetermined significance，ASCUS)。年齡22～65(36.00±8.02)歲。

1.2 方法 600例患者分別采用全自動DNA倍體分析系統檢測宮頸細胞DNA倍體含量和HC2檢測宮頸細胞HPV-DNA。這兩種篩查結果中有任意一項為陽性者，建議進行病理檢查。(1)宮頸細胞DNA倍體含量：DNA倍體分析系統檢查評定標準：所有染色DNA(Feulgen DNA)染色片用AcCell全自動細胞圖像分析系統進行掃描處理。染色質量控制用HL60細胞株作對照。一般情況下，AcCell系統對每張玻片上6 000個以上的細胞核進行掃描測定。經掃描后的每個細胞核均有123個特征值，其中包括形態特征、吸光特征、具體結構特征、 馬爾可夫(Markovian)和非Markovian結構特征和長度特征等。AcCell系統根據不同細胞成分所具有的不同特征參數來自動完成細胞分類和計數，如正常上皮細胞、增生或癌變細胞、淋巴細胞、中性白細胞及未參與診斷的重疊細胞核，聚焦不良細胞核和核碎片等垃圾細胞。標準對照細胞為同張玻片上的100個正常上皮細胞，所測出的平均光密度為2的參考值，其變異系數值小于5%。 婦產科醫生用陰道窺器暴露宮頸，先用無菌紗布擦去宮頸表面的黏液，然后手持宮頸刷從宮頸外口插入宮頸管，使刷絲中央進入頸管內5～8 mm，周邊刷絲貼住頸管黏膜面，逆時針或順時針旋轉3～5圈，收集宮頸外口及宮頸管脫落細胞，停留8 s后取出宮頸刷，將刷頭垂直方向彈入樣本收集管內，在保存液中攪拌、漂洗、離心2次后送實驗室檢查。采用液基薄層制片技術制成薄層涂片，進行Feulgen DNA染色。Feulgen DNA染色片經全自動細胞DNA倍體定量分析系統測定診斷[1]。(2)高危型HPV-DNA檢測： HC2標本采集：Digene公司提供專用錐形采集刷和保存瓶，將采集刷放置于受檢者宮頸口鱗柱上皮交界處向同一方向輕輕旋轉3～4圈，停留10 s，取出采集刷立即放于保存瓶中。標本采集后放于-4℃冰箱保存，3 d內送到實驗室檢測。檢測高危型HPV-DNA試劑盒以及DML2000熒光光度儀均為美國Digene公司產品。

1.3 診斷標準 (1)細胞DNA倍體結果判定：根據AcCell系統診斷軟件所做的細胞DNA倍體分析結果和建議有如下3種情況：正常DNA二倍體細胞為主，未見異倍體細胞及異倍體細胞峰，建議每2年復查1次；出現DNA指數大于2.5細胞及DNA指數為1～2的細胞數超過被測細胞總數的10%；出現異倍體細胞峰及大量DNA指數大于2.5細胞即判定為陽性，建議活檢。 (2)HC2結果判定：HPV-DNA≥1.0 pg/ml即為陽性。

1.4 陰道鏡及病理學檢查 上述細胞DNA倍體檢測和HC2-HPV-DNA篩查方法中有一項為陽性者，建議電子陰道鏡下取材進行病理檢查。在操作過程中，除了在正常的3、6、9、12點取組織行病理檢查外，還在醋酸白試驗疑似病灶處多取幾點，避免漏診。住院患者行電套圈外科切除術后或手術切除子宮后標本，送病理檢查。病理診斷報告分為：慢性炎癥；宮頸上皮內瘤樣病變輕度(cervical intraepithelial neoplasia Ⅰ，CIN Ⅰ)；宮頸上皮內瘤樣病變中度(cervical intraepithelial neoplasia Ⅱ，CIN Ⅱ)；宮頸上皮內瘤樣病變重度(cervical intraepithelial neoplasia Ⅲ，CIN Ⅲ)；原位癌或早期浸潤癌；浸潤癌。CIN Ⅱ級及以下的病變屬于低級別宮頸內瘤樣病變；CINⅢ及以上的病變屬于高級別宮頸內瘤樣病變。

2 結 果

2.1 兩種不同的宮頸癌篩查方法結果 600例宮頸癌高危患者中，AcCell系統篩查細胞DNA倍體陽性患者276例(46.00%)，陰性324例(54.00%)。HC2篩查HPV-DNA陽性239例(39.83%)，陰性361例(60.17%)。共有397例進行病理學檢查，結果診斷為宮頸癌26例。26例宮頸癌患者中，HC2篩查陽性18例，AcCell系統篩查陽性24例，其中16例HC2 和AcCell系統篩查均為陽性。見表1。

表1 病理檢查與細胞DNA定量分析、HC2檢測結果(n)

2.2 兩種篩查方法的敏感性和特異性 以397例宮頸組織病理診斷結果為“金標準”。397例患者中，病理診斷為CIN Ⅲ/宮頸原位癌(carcinoma in situ，CIS)及以上級別的宮頸疾病61例，其中CIN Ⅲ/CIS 35例，宮頸浸潤癌26例。宮頸細胞DNA倍體陽性診斷宮頸癌的敏感性為92.31%(24/26)，特異性為40.16%(149/371)；診斷CIN Ⅲ及以上病變的敏感性為88.52%(54/61)，特異性為42.85%(144/336)。HPV-DNA陽性診斷宮頸癌的敏感性為69.23%(18/26)，特異性為45.55%(169/371)；診斷CIN Ⅲ及以上病變的敏感性為68.85%(42/61)，特異性為47.02%(158/336)。宮頸細胞DNA倍體及HPV-DNA均陽性診斷宮頸癌的敏感性和特異性分別為61.54%(16/26)和 85.71%(318/371)； 診斷CIN Ⅲ及以上病變的敏感性和特異性分別為57.38%(35/61)和89.88%(302/336)。

2.3 DNA定量分析與HC2檢測均為陽性的情況 病理檢查診斷為CINⅢ/CIS的35例患者中，其中有19例兩種篩查方法結果均為陽性，占54.28%(19/35)；26例宮頸癌中，有16例兩種篩查方法均為陽性，占61.54%(16/26)；CINⅢ及以上患者61例，有35例兩種篩查方法均為陽性，占57.38%(35/61)。

3 討 論

宮頸細胞DNA定量分析技術是一種全自動的細胞分析技術，其工作原理是采用顯微分光度與圖像處理分析技術相結合，直觀地逐個測量每一個細胞。在正常細胞和腫瘤細胞在生長增殖過程中，細胞核內DNA結構和含量都會發生變化，正常細胞有固定數量的DNA含量(7.6 pg)，其DNA指數為1，增殖周期DNA指數在1～2，而腫瘤細胞DNA指數≥2.5。細胞癌變的本質是細胞迅速無限增殖和轉移，測定細胞核DNA含量可作為惡性腫瘤的指標之一[2]。該項技術用于宮頸癌前病變及宮頸癌的篩查和診斷在國內外已有大量報告[3-4]。由美國Digene公司開發的非放射性檢測宮頸細胞高危型HPV-DNA的HC2技術是一種液相雜交法，其利用特異的RNA探針與變性后的HPV-DNA單鏈雜交，同時結合酶聯免疫化學發光原理使基因信號放大，從而達到檢測靶基因的目的[5]。在本研究中，我們對常規TCT檢查結果陽性的患者，進行全自動細胞DNA定量分析和HC2檢測，但都不作為診斷方法，而是作為篩查方法，從中挑選出高危宮頸癌病例作進一步檢查，如活檢進行確診，以提高陽性檢出率，減少細胞病理學醫生和婦科醫生的工作量。

本研究結果發現，DNA定量分析方法篩查宮頸癌的敏感性為92.31%，特異性為40.16%；HC2檢測篩查宮頸癌的敏感性為69.23%，特異性為45.55%，HC2檢測結果與肖克林等[6]的報告相一致，但DNA定量分析檢測結果的敏感性、特異性均低于國內的報道[7-8]，其原因可能與標本放置時間過長有關。但是在同樣的實驗室條件下，DNA定量分析方法篩查的敏感性高于HC2篩查，提示更多早期宮頸癌患者可以通過DNA定量分析篩查被發現，從而得到及時確診和治療。而其中有少數被誤判為陽性而需要做活檢的患者，經病理檢查證實無異常后無需做任何處理。在基層醫院采用HC2檢測高危型HPV作為初篩宮頸癌有一定的實用意義，而在有條件的醫院可以輔以宮頸細胞DNA定量分析，兩種方法聯用能夠減少宮頸高度病變篩查的假陽性率，提高敏感性。本研究結果發現，DNA定量分析及HC2檢測結果均為陽性診斷宮頸癌的敏感性和特異性分別為61.54%和85.71%；診斷CINⅢ及以上病變的敏感性和特異性分別為57.38%和89.88%，說明兩種篩查方法的聯合應用診斷敏感性有所降低，但診斷特異性明顯提高。在有條件的醫院，建議將兩種方法相結合，以降低假陽性率，提高檢測效能。病理檢查診斷宮頸癌26例，上述兩種篩查方法均為陽性16例，占61.54%；CINⅢ及以上患者61例，兩種篩查方法均為陽性35例，占57.38%。說明兩種檢測方法對宮頸癌的預測和診斷存在一致性。同時也提示了我們任何單一的宮頸癌篩查方法都有一定的局限性。在基層醫院由于缺乏有經驗的細胞學醫生，開展大規模宮頸癌普查時采用全自動DNA倍體分析系統成本效益比較合理。

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廣西醫藥衛生科研課題(Z2012033)

莫偉杰(1966～)，女，本科，主治醫師，研究方向：婦科腫瘤篩查、皮膚病防治。

吳月蓮(1970～)，女，碩士，主任醫師，研究方向：婦科腫瘤及內分泌、盆底功能障礙性疾病，E-mail：malijuli1997.02.28@163.com。

R 737.33

A

0253-4304(2016)01-0105-03

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.01.32

2015-09-28

2015-12-14)