化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測孕婦抗TP抗體陽性判斷值探討

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化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測孕婦抗TP抗體陽性判斷值探討

梅毒是由蒼白螺旋體引起的一種慢性全身感染的性傳播疾病，嚴(yán)重危害母嬰健康[1]。為防止母嬰傳播，采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay，CLIA)檢測孕婦血清抗梅毒螺旋體(treponema pallidum ，TP)抗體已列為常規(guī)工作，但由于孕婦內(nèi)環(huán)境改變等因素的干擾，部分抗TP抗體呈陽性反應(yīng)的樣本并非真正的陽性[2]，尤其是信號/臨界值(signal-to-cut off, S/CO)比值接近陽性判斷值的樣本。因此，在婦幼保健機(jī)構(gòu)進(jìn)行TP篩查時，將抗TP抗體 CLIA測定S/CO比值的陽性界值設(shè)定在何處較為合適，是一個值得探討的問題。

材料和方法

一、材料

1. 樣本及來源樣本為來自于上海市嘉定區(qū)婦幼保健院2014年1至9月產(chǎn)檢孕婦抗TP抗體檢測S/CO比值≥1.0的樣本，分離血清2 mL，-80 ℃保存待檢。

2.試劑和儀器抗TP抗體CLIA試劑盒為北京科美東雅公司產(chǎn)品，陽性判斷限S/CO比值≥1.0，批號為20131021；抗TP抗體免疫印跡法(western blotting, WB)試劑為德國歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗試劑公司產(chǎn)品，批號為LTP091401。試劑均在有效期內(nèi)，按說明書操作。Chemclin CLIA系統(tǒng)由北京科美東雅公司生產(chǎn)。

二、方法

1.CLIA檢測按照試劑說明書操作，在Chemclin CLIA系統(tǒng)上進(jìn)行檢測。試劑均在有效期內(nèi)，同時檢測上海市臨床檢驗中心提供的質(zhì)控品并在控。

2. WB檢測對S/CO比值≥1.0的樣本按照說明書進(jìn)行WB確證試驗。歐蒙TP-IgG-WB試劑膜條有4條特異性抗原帶，分別為TpN15、TpN17、TpN45和TpN47。判斷標(biāo)準(zhǔn)：未出現(xiàn)抗原帶為陰性，1條抗原帶顯色為可疑陽性，2條及2條以上抗原帶顯色為陽性。

三、統(tǒng)計學(xué)方法

統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS 15.0軟件，CLIA系統(tǒng)檢測性能采用受試者工作特征(receiver operating characteristic， ROC)曲線確定。

結(jié)果

一、抗TP抗體的CLIA檢測

13 974份樣本經(jīng)CLIA檢測呈陽性反應(yīng)152份，初篩陽性率為1.09%。對S/CO比值≥1.0的152份樣本進(jìn)行WB檢測，結(jié)果為：陽性119例，占孕婦群體的0.85%，占初篩呈陽性反應(yīng)樣本的78.29%；不確定7例，占孕婦群體的0.05%，占初篩呈陽性反應(yīng)樣本的4.61%；陰性26例，占孕婦群體的0.19%，初篩呈陽性反應(yīng)樣本中假陽性率為17.11%。見表1。

表1　152份CLIA呈陽性反應(yīng)樣本W(wǎng)B確認(rèn)結(jié)果

二、ROC曲線確定的抗TP抗體篩查試驗的檢測效能

根據(jù)以WB結(jié)果(WB結(jié)果為“不確定”的樣本未列入)為金標(biāo)準(zhǔn)繪制的ROC曲線，當(dāng)診斷效能最好 [約登指數(shù)(敏感性+特異性-1)最大(0.968)]時抗TP抗體 S/CO比值 的臨界值為3.32，見表2；曲線下面積為0.997，見圖1。

表2　抗TP抗體初篩試驗不同臨界值條件下的檢測效能

圖1　孕婦血清抗TP抗體檢測的ROC曲線圖

三、初篩試驗結(jié)果陽性預(yù)測值≥95%時的S/CO比值的確定

鑒于抗TP抗體 CLIA的篩選作用，為達(dá)到既減少假陽性所致的不良后果，又能適當(dāng)減少后續(xù)確證試驗的樣本數(shù)，特統(tǒng)計初篩試驗不同臨界值范圍的陽性預(yù)測值，當(dāng)初篩試驗結(jié)果陽性預(yù)測值≥95%時，其S/CO比值為3.25。見表3。

表3　抗TP抗體初篩試驗不同臨界值范圍的陽性預(yù)測值

續(xù)表3

討論

妊娠合并梅毒對圍產(chǎn)兒危害極大。孕婦梅毒患者血中的TP可播散到胎兒所有器官，易引起胎兒全身性疾病及先天性梅毒等[3]。國外發(fā)達(dá)國家和地區(qū)對孕婦有較完善的篩查制度[4]。目前國內(nèi)婦幼系統(tǒng)大多采用CLIA篩查孕婦抗TP抗體，當(dāng)特定樣本的檢測信號(發(fā)光值)超過試劑盒設(shè)定的陽性判斷值時，即判斷為反應(yīng)性(國內(nèi)通常稱為陽性)[5]，并據(jù)此報告相應(yīng)的檢驗結(jié)果。這種結(jié)果對于強(qiáng)陽性或明顯陰性的樣本，造成假陰性或假陽性的可能性很小，但對于處于臨界值附近的弱反應(yīng)性樣本的影響可能較大，孕婦由于處于窗口期或妊娠期間體內(nèi)免疫球蛋白等的改變，常常發(fā)生假陰性或假陽性現(xiàn)象。特別是假陽性結(jié)果不僅有害孕婦身心健康，而且極易誘發(fā)醫(yī)療糾紛。WB檢測的抗TP抗體針對TP外膜的4種脂蛋白，具有理想的免疫活性，敏感性高、特異性好，克服了臨床常用的甲苯胺紅不加熱血清試驗(tolulized red unheated serum test，TRUST)、TP顆粒凝集試驗(treponema pallidum particle agglutination assay，TPPA)和CLIA等方法的不足。WB既是各參比實(shí)驗室的常用檢測方法，也是晚近文獻(xiàn)建議的確證試驗[6-8]。

本研究顯示，孕婦群體中用Chemclin CLIA系統(tǒng)篩查抗TP抗體呈陽性反應(yīng)的樣本假陽性率為17.11%，陽性判斷值(S/CO比值)宜作調(diào)整。本研究表明，1.09%(152/13 974)的孕婦為抗TP抗體初篩陽性，陽性率低于高昆等[9]報道的檢測人群。對CLIA檢測S/CO比值≥1.0的樣本進(jìn)一步用WB檢測，2個及2個以上條帶(陽性)119份(占孕婦群體的0.85%，占初篩呈陽性反應(yīng)樣本的78.29%)；單個條帶(不確定)7份(占孕婦群體的0.05%，占初篩呈陽性反應(yīng)樣本的4.61%)；陰性26份(占孕婦群體的0.19%，初篩呈陽性反應(yīng)樣本中假陽性率為17.11%)。應(yīng)用ROC曲線分析，在約登指數(shù)最大的條件下，陽性判斷值(S/CO比值)為3.32；為減少篩查試驗陽性所需補(bǔ)充確證試驗的樣本數(shù)，分析不同臨界值范圍的陽性預(yù)測值，確定初篩試驗結(jié)果陽性預(yù)測值≥95%時的S/CO比值為3.25。根據(jù)本研究結(jié)果，建議將檢測信號的S/CO比值的陽性判斷值提高到3.32，對處于1.0~3.32之間的樣本應(yīng)納入灰區(qū)[10]，執(zhí)行灰區(qū)樣本的處理程序，必要時進(jìn)一步做WB或核酸檢測等確證試驗，以盡可能減少假陽性所造成的后果。

綜上所述，孕婦樣本中有較高比例的抗TP抗體假陽性，可能是其體內(nèi)免疫、血脂及內(nèi)分泌環(huán)境等因素改變引起的干擾所致，這有別于快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗及TRUST方法的生物學(xué)假陽性。為降低抗TP抗體篩查試驗假陽性所造成的不良后果，又減少須進(jìn)行確證試驗的樣本數(shù)，各實(shí)驗室應(yīng)針對不同人群和檢測系統(tǒng)(試劑)建立合適的臨界值，并確定篩查試驗呈陽性反應(yīng)的樣本需進(jìn)行確證試驗的S/CO比值范圍。

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(本文編輯：姜敏)

蔡徐山 ，齊結(jié)華， 陳宇，王東江，吳守樂

(上海市嘉定區(qū)婦幼保健院檢驗科， 上海 201821)

摘要：目的建立適合孕婦的抗梅毒螺旋體(TP)抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA)陽性判斷值。方法用科美東雅Chemclin CLIA系統(tǒng)檢測13 974例孕婦血清抗TP抗體，對抗TP抗體篩查試驗呈陽性反應(yīng)[信號/臨界值(S/CO)比值≥1.0]的樣本，用免疫印跡法(WB)分析確認(rèn)。采用受試者工作特征(ROC)曲線評價CLIA的檢測性能。結(jié)果Chemclin CLIA系統(tǒng)檢出抗TP抗體 S/CO比值≥1.0的樣本152例，初篩呈陽性反應(yīng)的樣本比率為1.09%；初篩呈陽性反應(yīng)樣本經(jīng)WB確認(rèn)，陽性119例，不確定7例，陰性26例，初篩呈陽性反應(yīng)樣本中假陽性率為17.11%。根據(jù)ROC曲線，約登指數(shù)最大時，抗TP抗體 S/CO比值為3.32；Chemclin CLIA系統(tǒng)抗TP抗體篩查試驗陽性預(yù)測值≥95%的S/CO比值為3.25。結(jié)論為既降低抗TP抗體篩查試驗假陽性率，又減少須進(jìn)行補(bǔ)充確證試驗的樣本數(shù)，各實(shí)驗室應(yīng)建立針對不同人群和檢測系統(tǒng)(試劑)合適的界值，以確定篩查試驗陽性樣本需進(jìn)行確證試驗的S/CO比值范圍。

關(guān)鍵詞：抗梅毒螺旋體抗體；化學(xué)發(fā)光免疫分析法；確證試驗；陽性判斷值； 孕婦

Investigation on the positive cut off value of anti-TP antibody in pregnant women by chemiluminescence immunoassayCAIXushan，QIJiehua，CHENYu，WANGDongjiang，WUShoule.(DepartmentofClinicalLaboratory，MaternalandChildrenHealthcareHospitalofJiading，Shanghai201821，China)

Abstract:ObjectiveTo establish a reasonable positive cut off value of anti-treponema pallidum (TP) antibody in pregnant women by chemiluminescence immunoassay(CLIA). MethodsA total of 13 974 serum samples from pregnant women for anti-TP antibody were collected. All the samples were determined by Kemei Dongya Chemclin CLIA system. The positive samples [signal-to-cut off (S/CO) ratio≥1.0] were further verified by western blotting (WB). The performance was evaluated by receiver operating characteristic (ROC) curve. ResultsThe 152 samples of S/CO ratio≥1.0 were determined by Chemclin CLIA system. The screening positive reaction rate was 1.09%. The results verified by WB for the screening positive samples showed that 119 samples were positive， 7 samples were indeterminate，and 26 samples were negative. The false positive rate of screening positive reaction samples was 17.11% . The ROC curve indicated that the S/CO ratio for anti-TP antibody was 3.32 when Youden index reached maximum. The S/CO ratio was 3.25, when positive predictive value was ≥95% of Chemclin CLIA system. ConclusionsIn order to both reduce the false positive rate of anti-TP antibody screening and minimize the number of samples to be further determined by confirmation assay，each laboratory should set up a suitable S/CO ratio for different populations and determination systems (reagents) and determine the S/CO ratio scope to be further determined by confirmation assay.

Key words:Anti-treponema pallidum antibody; Chemiluminescence immunoassay; Confirmation assay; Positive predictive value; Pregnant woman

收稿日期：(2015-05-19)

作者簡介：蔡徐山，男，1972年生，碩士，副主任技師，主要從事免疫學(xué)及分子生物學(xué)檢驗和研究工作。

中圖分類號：

文章編號：1673-8640(2015)12-1190-03R446.61

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.12.006