雷公藤多苷灌胃對大鼠糖尿病腎病的治療作用及機制

趙陽，劉佳琨，陳強，徐杰，王天生

(1天津市第四中心醫院，天津300140；2天津市第五中心醫院)

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雷公藤多苷灌胃對大鼠糖尿病腎病的治療作用及機制

趙陽1，劉佳琨1，陳強1，徐杰1，王天生2

(1天津市第四中心醫院，天津300140；2天津市第五中心醫院)

摘要：目的觀察雷公藤多苷灌胃對大鼠糖尿病腎病的治療作用，并探討其作用機制。方法將45只Wistar大鼠隨機分為正常組、對照組和實驗組，各15只。對照組和實驗組予以鏈脲佐菌素55 mg/kg腹腔內注射建立糖尿病腎病大鼠模型，正常組給予同等劑量的生理鹽水腹腔注射。建模成功后，實驗組大鼠給予雷公藤多苷1.8 g/(kg·d)灌胃，1次/d；正常組及對照組給予同等劑量的生理鹽水灌胃，1次/d。三組大鼠自由飲水進食，不給予任何降糖處理。三組大鼠灌胃前(治療前)及灌胃12周后(治療后)分別檢測其血糖、24小時尿蛋白、血清肌酐和尿素氮。同時于灌胃12周末處死大鼠，檢測其腎皮質結締組織生長因子(CTGF)。結果實驗組和對照組大鼠治療前24小時尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平高于正常組(P均<0.05)；實驗組大鼠治療后24小時尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平較治療前降低(P均<0.05)，且低于對照組治療后(P均<0.05)。正常組、實驗組和對照組治療后大鼠腎皮質CTGF相對表達量分別為0.18±0.03、0.52±0.07、0.69±0.08，實驗組、對照組與正常組相比，實驗組與對照組相比，P均<0.05。治療后實驗組大鼠24小時蛋白尿與腎組織中CTGF表達水平呈正相關(r=0.54,P<0.05)。結論 雷公藤多苷灌胃對大鼠糖尿病腎病有明顯的治療作用，可能通過下調糖尿病大鼠腎臟CTGF表達抑制蛋白尿、保護腎功能。

關鍵詞：雷公藤多苷；糖尿病；糖尿病大鼠；結締組織因子；腎功能；蛋白尿；動物實驗

糖尿病腎病是糖尿病患者最為常見的腎臟并發癥，并已成為腎功能衰竭的重要原因[1]。我國糖尿病腎病的發病率呈現明顯上升趨勢，目前已成為終末期腎病的第二位原因，僅次于各種腎小球腎炎。由于糖尿病腎病患者存在復雜的代謝紊亂，一旦發展到終末期腎病，往往比其他腎病的治療更加棘手。因此，及時治療糖尿病腎病意義重大。目前糖尿病腎病確切發病原因及機制并不十分清楚，大多數研究認為與高血糖、腎素-血管緊張素-醛固酮系統紊亂、腎臟血流動力學紊亂有關[2]。近年來的研究[3,4]顯示，結締組織生長因子(CTGF)在糖尿病腎病的發病中也發揮重要作用。2014年1月10日～ 2014年6月10日，我們觀察了雷公藤多苷灌胃對大鼠糖尿病腎病的治療作用，并對其作用機制進行了探討。現將結果報告如下。

1材料與方法

1.1動物、藥品、試劑及儀器清潔級Wistar大鼠45只，購自天津醫科大學實驗動物中心。雷公藤多苷，購自遠大醫藥(中國)有限公司。羊抗鼠CTGF單隆抗體，購自美國Cell Signaling公司；羊抗鼠β-actin抗體，購自Sigma公司；鏈脲佐菌素，購自Sigma公司。臺式微型離心機(Mierofuge18)，購自BechmanCoulter公司；渦旋振蕩器(Vortex-GenieZ)，購自美國Scilnd公司；全自動生化分析儀，購自美國貝克曼庫爾特公司。

1.2大鼠分組、模型制作及給藥將45只清潔級Wistar大鼠隨機分為正常組、對照組和實驗組，各15只。對照組和實驗組予以鏈脲佐菌素55 mg/kg腹腔內注射建立糖尿病腎病大鼠模型，正常組給予同等劑量的生理鹽水腹腔注射。建模成功后實驗組大鼠給予雷公藤多苷1.8 g/(kg·d)灌胃，1次/d；正常組及對照組給予同等劑量的生理鹽水灌胃，1次/d。三組大鼠自由飲水進食，不給予任何降糖處理。

1.3血糖、24小時尿蛋白、血清肌酐和尿素氮、腎皮質CTGF檢測三組大鼠灌胃前(治療前)及灌胃12周時(治療后)分別檢測其血糖、24小時尿蛋白、血清肌酐和尿素氮。同時于灌胃12周末處死大鼠，采用免疫印跡法檢測其腎皮質CTGF。

2結果

2.1治療前后三組大鼠血糖、24小時尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平比較治療前實驗組和對照組大鼠24小時尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平高于正常組(P均<0.05)；治療后實驗組大鼠24小時尿蛋白、血清肌酐和尿素氮較治療前明顯降低(P均<0.05)，且低于對照組治療后(P均<0.05)。詳見表1。

表1　 三組大鼠治療前后血糖、24小時尿蛋白、

注：與同組治療前相比，*P<0.05；與正常組和對照組治療后相比，#P<0.05。

2.2治療后三組大鼠腎皮質CTGF表達比較治療后正常組、實驗組和對照組大鼠腎皮質CTGF相對表達量分別為0.18±0.03、0.52±0.07、0.69±0.08；實驗組和對照組大鼠腎皮質CTGF與正常組相比，P均<0.05；實驗組CTGF與對照組相比，P<0.05。

2.3治療后實驗組大鼠24小時蛋白尿與腎皮質CTGF表達水平的相關性實驗組大鼠24小時蛋白尿與腎組織中CTGF表達水平呈正相關(r=0.54,P<0.05)。

3討論

糖尿病腎病的病因和發病機制不清，目前認為是多因素參與，在一定的遺傳背景以及部分危險因素的共同作用下致病[5]。糖尿病腎病早期可觀察到腎臟血流動力學異常，表現為腎小球高灌注和高濾過,腎血流量和腎小球濾過率升高，且增加蛋白攝入后升高的程度更顯著。血糖過高主要通過腎臟血流動力學改變以及代謝異常導致腎臟損害，其中代謝異常導致腎臟損害的機制主要有以下幾方面：腎組織局部糖代謝紊亂，可通過非酶糖基化形成糖基化終末代謝產物；多元醇通路的激活；二酰基甘油-蛋白激酶c途徑的激活；已糖胺通路代謝異常。上述代謝異常除參與早期腎小球高濾過，更為重要的是促進腎小球基底膜增厚和細胞外基質蓄積，促進腎間質纖維化和腎小球硬化。近年來的研究[4]發現，糖尿病腎病的發病機制除與上述因素有關外，同時可能與腎皮質中CTGF過度表達有關。CTGF是1991年Frazier等[6]首先在人臍靜脈內皮細胞的條件培養基中發現的，它是一種由349個氨基酸組成、分子量為34～38 kD的富含半胱氨酸的分泌肽。最初研究[7]發現，CTGF對成纖維細胞具有趨化及促有絲分裂作用，隨后發現CTGF還具有促細胞增殖、遷移及分化等作用。體內研究[8]發現，在早期糖尿病腎病階段，CTGF可介導系膜基質的聚集和腎小球纖維化；在晚期糖尿病腎病中，CTGF可介導腎間質纖維化。腎小球纖維化是糖尿病腎病的重要病理學特征。因此認為CTGF在糖尿病腎病發病機制中發揮重要作用。

雷公藤多苷是由中藥衛矛科雷公藤屬植物提取精制而成，是目前臨床上應用較多的非甾體類免疫抑制劑，已廣泛用于治療多種原發性和繼發性腎小球疾病，對慢性腎小球腎炎、腎病綜合征、過敏性紫癜性腎炎、糖尿病腎病和狼瘡性腎炎等具有較好療效，可顯著減少尿蛋白排出。文獻[9]報道，雷公藤多苷對細胞免疫和體液免疫均有抑制作用。但關于雷公藤多苷可減少腎臟病患者蛋白尿的分子機制并不十分清楚。在本研究中，實驗組雷公藤多苷灌胃12周后，其24小時尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平明顯降低，且低于對照組治療后，說明雷公藤多苷可降低糖尿病大鼠蛋白尿，對大鼠腎功能有一定的保護作用。同時本研究還發現，實驗組大鼠24小時蛋白尿與腎皮質CTGF表達水平存在明顯的相關性，說明雷公藤多苷可能通過抑制腎臟中CTGF的表達來改善糖尿病大鼠腎功能。

參考文獻：

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[3] Thomson SE, McLennan SV, Kirwan PD, et al. Renal connective tissue growth factor correlates with glomerular basement membrane thickness and prospective albuminuria in a non-human primate model of diabetes: possible predictive marker for incipient diabetic nephropathy[J]. J Diabetes Complications, 2008,22(4):284-294.

[4] Schmidt-Ott KM. Unraveling the role of connective tissue growth factor in diabetic nephropathy[J]. Kidney Int, 2008,73(4):375-376.

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[7] Zhu B, Ma AQ, Yang L, et al. Atorvastatin attenuates bleomycin-induced pulmonary fibrosis via suppressing iNOS expression and the CTGF (CCN2)/ERK signaling pathway[J]. Int J Mol Sci, 2013,14(12):24476-24491.

[8] Kobayashi T, Okada H, Inoue T, et al. Tubular expression of connective tissue growth factor correlates with interstitial fibrosis in type 2 diabetic nephropathy[J]. Nephrol Dial Transplant, 2006,21(2):548-549.

[9] 李平,皇甫春榮,湯春輝.雷公藤多苷治療小兒紫癜性腎炎療效及對患兒免疫功能的影響[J].中國臨床藥理學雜志,2014,30(10):895-898.

收稿日期：(2015-07-24)

通信作者：王天生

基金項目：天津市衛生局科技 資助項目(2014247)。

中圖分類號：R589.1

文獻標志碼：A

文章編號：1002-266X(2015)47-0031-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.47.011