NMP22、CA19-9、CEA在膀胱癌中的表達及臨床意義

左玉良，竇中嶺

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NMP22、CA19-9、CEA在膀胱癌中的表達及臨床意義

左玉良1，2，竇中嶺1

摘要：目的探討NMP22、CA19-9、CEA 3種腫瘤標記物在膀胱癌中的表達及臨床意義。方法收集72例膀胱癌及10例非膀胱癌的組織標本，應用免疫組織化學測定NMP22、CA19-9、CEA的表達情況，分析3種腫瘤標記物與膀胱癌病理分級、臨床分期之間的關系。結果NMP22、CA19-9、CEA在膀胱癌組織中的表達陽性率明顯高于非膀胱癌組織，NMP22的表達與膀胱癌的病理分級和腫瘤大小均呈正相關，與年齡呈負相關。CA19-9的表達與膀胱癌的病理分級及臨床分期均呈負相關。CEA的表達與膀胱癌的病理分級、臨床分期和腫瘤大小呈正相關。結論NMP22、CA19-9、CEA檢測是膀胱癌早期診斷及術后復發監測的重要手段，可以對膀胱癌的生物學特點作出判斷，為臨床治療方案的選擇和預后的判斷提供更為充足的證據。

關鍵詞：膀胱癌；NMP22；CA19-9；CEA；免疫組織化學

作者單位：1.河南科技大學第一附屬醫院，河南洛陽 471000

2.河南科技大學附屬黃河醫院，河南三門峽 472000

在泌尿系統腫瘤當中，膀胱癌的發病率高居首位，近年來膀胱癌的發病率有上升趨勢。膀胱癌是嚴重威脅人類健康的疾病，其術后復發率較高，保留膀胱的各種手術治療，約50%在2 a內腫瘤可能復發，約10%～15%的復發腫瘤惡性程度有增加趨勢。因此，長期規律隨訪并早期發現腫瘤復發是膀胱腫瘤治療成功的關鍵之一。膀胱鏡檢查及活檢是膀胱癌的診斷金標準，但屬侵入性的檢查，經濟成本較高，并有導致尿路感染的風險。核基質蛋白22(nuclear matrix protein 22,NMP-22)、糖鏈抗原19-9(carbohydrate antigen 19-9, CA19-9)及癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)腫瘤標記物對膀胱癌的早期診斷、治療和預后判斷及復發監測起到積極作用。為探討NMP22、CA19-9及CEA在膀胱癌組織中的表達情況及其臨床意義，作者應用免疫組化S-P法檢測上述3種腫瘤標記物在72例膀胱癌及10例非膀胱癌組織中的表達情況，分析報道如下。

1資料與方法

1.1資料收集72例膀胱癌病例及10例非膀胱癌病例，分為觀察組及對照組。觀察組患者男56例，女16例，年齡(62.5±8.6)歲；腫瘤單發54例，多發18例，瘤體直徑0.5～6.0 cm；72例膀胱癌中，初發膀胱癌43例，復發膀胱癌29例。對照組患者男7例，女3例，年齡(55.3±7.1)歲；其中9例為膀胱良性病變，1例為輸尿管癌病例。觀察組術前行泌尿系超聲、CT和膀胱鏡等檢查，經尿道膀胱腫瘤電切術、膀胱部分切除或膀胱全切術治療，并獲取膀胱癌組織標本。對照組經尿道膀胱腫瘤電切術及膀胱鏡檢查獲取膀胱良性病變組織標本，正常膀胱組織標本由輸尿管癌病例行輸尿管根治術中獲取。72例觀察組均為膀胱尿路上皮癌，其中低分級35例，高分級37例；臨床分期：T1N0M0期34例，T2N0M0期25例，T3N0M0期13例。對照組9例為慢性膀胱炎，1例為正常膀胱組織。

1.2方法所有組織標本均采用免疫組化S-P法進行免疫染色(CEA免疫染色不需高壓熱修復)。使用NMP22免疫組化試劑盒(上海安研商貿有限公司)，CA19-9及CEA免疫組化試劑盒(河南賽諾特生物技術有限公司)。

1.3NMP22免疫染色結果判斷標準細胞核出現棕黃色著色或棕黃色顆粒為染色陽性，NMP22免疫染色細胞百分比低于10%或未見染色定為陰性，而染色范圍超過10%為陽性。CA19-9免疫染色結果判斷標準：細胞質和(或)細胞膜出現棕黃色著色或棕黃色顆粒為染色陽性，因CA19-9在正常尿路上皮細胞的胞質和細胞表面亦有表達，故CA19-9免疫染色細胞百分比低于10%或未見染色定為陰性，而染色范圍超過10%為陽性。CEA免疫染色結果判斷標準：CEA在正常膀胱黏膜中為陰性，故細胞質和(或)細胞膜出現棕黃色著色或棕黃色顆粒定為陽性。

1.4統計學分析應用SPSS 13.0統計軟件對數據進行分析，計量資料采用均數±標準差表示，組間率的比較用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1NMP22、CA19-9和CEA表達情況NMP22、CA19-9、CEA在10例對照組均為陰性表達，而在72例膀胱癌組織中均有表達，3種腫瘤標記物兩組間差異均有統計學意義。NMP22在72例膀胱癌細胞核中陽性表達47.2%(34/72)，在低分級和高分級膀胱癌中陽性表達為34.3%(12/35)和59.5%(22/37)，在T1、T2和T3期膀胱癌中陽性表達分別為50.0%(17/34)、40.0%(10/25)和53.8%(7/13)，見圖1～2。

CA19-9陽性表達為73.6%(53/72)，在膀胱癌癌細胞質和細胞膜呈陽性染色，見圖3；在低分級和高分級膀胱癌中陽性表達85.7%(30/35)和62.2%(23/37)，在T1、T2和T3期膀胱癌中陽性表達97.0%(33/34)、64.0%(16/25)和30.8(4/13)。

CEA在72例膀胱癌組織中陽性表達65.3%(47/72)，在膀胱癌癌細胞質和細胞膜陽性染色，見圖4；低分級和高分級膀胱癌中陽性表達40.0%(14/35)和89.2%(33/37)，在T1、T2和T3期膀胱癌中陽性表達50.0%(17/34)、72.0%(18/25)和92.3%(12/13)。

圖1　NMP22在T1期膀胱癌的表達(SP,×200)

圖2　NMP22在T2期膀胱癌的表達(SP,×200)

圖3　CA19-9在T3期的膀胱癌表達(SP,×200)

圖4　CEA在T3期的表達膀胱癌(SP,×200)

2.2NMP22、CA19-9和CEA表達與年齡NMP22的表達與膀胱癌患者的年齡呈負相關，而CA19-9與CEA的表達與患者年齡無相關性，見表1。

表1　NMP22、CA19-9和CEA與年齡　例(%)

2.3NMP22、CA19-9和CEA與腫瘤大小NMP22陽性表達比隨膀胱腫瘤瘤體的增大而升高，3組間差異具有統計學意義(P<0.05)，提示NMP22在膀胱癌中的表達與腫瘤大小呈正相關。CA19-9在膀胱癌中的表達與腫瘤大小無相關性 (P>0.75) 。CEA的陽性表達比隨膀胱腫瘤瘤體的增大而升高，3組間差異具有統計學意義(P<0.05)，提示CEA在膀胱癌中的表達與腫瘤大小呈正相關，見表2。

表2　NMP22、CA19-9和CEA與腫瘤大小　　例(%)

2.4NMP22、CA19-9和CEA在初發和復發膀胱癌中的表達NMP22、CA19-9和CEA在復發膀胱癌中的表達陽性比例均高于初發膀胱癌，但均無統計學意義(P>0.05)，而NMP22、CA19-9和CEA在復發膀胱癌中的聯合表達陽性率高于初發膀胱癌，兩組間差異具有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3　3種腫瘤標記物聯合表達陽性與膀胱癌　例(%)

2.5NMP22、CA19-9和CEA與膀胱癌病理分級及TNM分期NMP22在高分級膀胱癌中表達陽性率高于低分級 (P<0.05)，提示NMP22與膀胱癌的病理分級呈正相關，但NMP22與膀胱癌的臨床分期無相關性(P>0.5)。CA19-9在低分級和表淺性膀胱癌中的表達與膀胱癌的病理分級和臨床分期均呈負相關(P<0.025，P<0.005)。而與CA19-9表達相反，CEA表達在高分級及浸潤性膀胱癌中的表達陽性率均高于低分級和表淺性膀胱癌(P<0.005，P<0.025)，CEA與膀胱癌的病理分級及臨床分期均呈正相關。

3討論

NMP22是核基質蛋白的一種，為核有絲分裂器蛋白的一個亞單位，對DNA的復制和轉錄、RNA的合成和剪接、基因表達的調節均起著重要作用[5-6]。當細胞發生惡變時，核內遺傳物質在有絲分裂末期分配極度異常，核有絲分裂器蛋白合成激增。Lokeshwar等研究發現膀胱癌患者細胞中核基質蛋白濃度為正常細胞的25倍，本組NMP22在非膀胱癌膀胱組織中表達呈陰性，而在膀胱癌組織中表達呈陽性，尤其在高分級膀胱癌中表達較高，可能與高分級膀胱癌細胞增殖分裂更活躍，核內NMP22濃度升高更明顯有關。

同時，NMP22表達陽性率隨膀胱腫瘤瘤體的增大而升高，提示NMP22在膀胱癌中的表達與腫瘤大小呈正相關。NMP22在細胞凋亡后，由細胞核釋出，以可溶性復合物或片段的形式存在于尿中，膀胱癌患者尿NMP22濃度水平為非癌對照組的20～80倍。NMP22在膀胱癌的早期篩查、診斷和監測中特異性、靈敏度較高，Kehinde等報道在新確診的膀胱癌患者中，尿細胞學和NMP22檢測的敏感性分別為28%和88%，在復發膀胱癌中，它們的敏感性分別為33%和57%，NMP22可以作為已確診和可疑膀胱癌患者的評估標準。Gutierrez等[10]認為6 U·mL-1為尿NMP22檢測的理想臨界值，尿NMP22檢測雖然不能代替膀胱鏡檢查，但其高敏感性可以調整復查膀胱鏡的間隔時間。Jamshidian等[11]以10.1 U·mL-1為尿NMP22診斷膀胱癌參考值，可以評估膀胱癌的分級及分期。Stampfer等[12]也報道了膀胱癌GⅠ和GⅡ、GⅠ和GⅢ之間尿NMP22水平均有統計學差異。而且，在膀胱癌術后的監測及隨訪中，何朝宏等[13]認為尿NMP22水平>6 U·mL-1者應及時行膀胱鏡檢查，避免漏診，而尿NMP22水平<6 U· mL-1者可推遲膀胱鏡檢查時間。本研究中NMP22在膀胱癌的表達與膀胱癌的病理分級呈正相關，提示NMP22的表達可能與膀胱癌細胞增殖分裂程度有關。

CA19-9是一種細胞膜上的糖蛋白，主要用于消化道腫瘤的診斷、療效判斷及隨訪。近年來，研究發現CA19-9的檢測可能對膀胱腫瘤生物學特性的監測和預后判斷起一定的作用[14-16]。在本研究中CA19-9在膀胱癌中的表達呈陽性，陽性率為73.6%，其中在低分級和高分級膀胱癌中的表達陽性率分別為85.7%和62.2%，在T1、T2及T3期膀胱癌中的表達陽性率分別為97.0%、64.0%和30.8%，提示CA19-9在表淺性、低分級的膀胱癌中表達率較高。 研究發現血清或尿CA19-9水平的升高表明膀胱癌預后差，血清CA19-9水平改變可反映膀胱癌的進展或緩解[17]。田溪泉等[18]研究發現CA19-9水平的升高與腫瘤浸潤、轉移以及患者預后密切相關。Pall等[19]發現浸潤性膀胱癌患者的血清CA19-9水平較表淺膀胱癌患者高，且隨著浸潤深度的增加，血清CA19-9水平逐漸升高，同時發生轉移的膀胱癌患者的血清CA19-9水平較未轉移膀胱癌患者高。因此，血清CA19-9可以作為一種預后指標，在評價治療效果和監測膀胱癌復發及轉移中起到重要的作用。本研究中CA19-9在低分級和表淺性膀胱癌中的表達陽性率明顯高于高分級和浸潤性膀胱癌，其在膀胱癌中的表達與膀胱癌的病理分級和臨床分期均呈負相關，而在田溪泉和Pall報道中，浸潤性及晚期膀胱癌患者血清CA19-9水平較表淺性膀胱癌患者高，可能與此期膀胱癌組織生長、浸潤致組織細胞壞死、崩解使細胞內CA 19-9釋放和吸收入血有關[18-19]。

CEA是一種結構復雜的可溶性跨膜糖蛋白，也是一種廣譜腫瘤標記物。當尿CEA以30 ng·mL-1為檢測參考值，膀胱癌患者尿中CEA含量升高程度與臨床分期、腫瘤大小、侵犯方式等有關，腫瘤復發患者尿CEA水平升高更明顯，經過有效治療后，尿中CEA水平明顯下降[20]。Zimmerman等[21]研究發現從T1期到T3期的膀胱癌患者，尿CEA的平均水平逐步升高，經過治療后的患者尿CEA平均水平顯著低于治療前，初始治療后半年內復發患者的尿CEA平均水平高于同期治療未復發的患者。同樣血CEA也可以作為一種腫瘤標記物被應用于膀胱癌的診斷和監測[22-25]，血清CEA水平和膀胱癌的分級呈正相關，CEA水平升高的患者，往往有較差的腫瘤預后，部分膀胱癌病人經過新輔助化療后，CEA水平可下降或恢復正常。同樣在本研究中，CEA在膀胱癌中的表達與腫瘤大小、膀胱癌的病理分級和臨床分期均呈正相關，其在不同分期膀胱癌中的表達與上述報道中膀胱癌患者尿及血清中CEA水平的檢測情況相符合，提示CEA的檢測在膀胱癌的診斷、治療和監測中具有重要的意義。

綜上所述，NMP22、CA19-9及CEA這3種腫瘤標記物與膀胱癌的病理分級或臨床分期均有關聯，提示NMP22、CA19-9及CEA的檢測可作為膀胱癌早期診斷、術后復發監測及預后判斷的重要監測手段，它們作為輔助因子與影像學資料、病理檢查等臨床資料相結合，可以對膀胱癌的生物學特點作出更加精確的判斷，為臨床治療方案的選擇和預后的判斷提供了更為充足的證據。

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Clinical Significance on Expression of NMP22, CA19-9 and

CEA in Bladder Cancer

ZUO Yu-liang,DOU Zhong-ling

(First Affiliated Hospital of Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the clinical significance on expression of NMP22, CA19-9 and CEA in bladder cancer.MethodsCollected 72 cases of bladder cancer and 10 cases of non-bladder cancer, using immunohistochemistry to detect the expression of NMP22, CA19-9 and CEA in bladder cancer and non-bladder cancer tissues, it was analyzed the relationship between their expression in bladder cancer and pathology classification and clinical stage. ResultsNMP22, CA19-9 and CEA expression in bladder cancer tissues were significantly higher than that of non-bladder cancer. NMP22 expression in bladder cancer tissue was positively correlated with pathology classification and tumor size, but no correlation with clinical stage.NMP22 expression in bladder cancer was negatively correlated with age. CA19-9 expression in bladder cancer tissue was negatively correlated with pathology classification and clinical stage. CEA expression in bladder cancer tissues was positively correlated with pathology classification, clinical stage, and tumor size. ConclusionThe delection of NMP22, CA19-9 and CEA, have important role of early diagnosis and monitoring of postoperative recurrence in bladder cancer, it can make more accurate judgement on the biological characteristics of bladder cancer, and provide more sufficient evidence for choice of clinical treatment and prognosis judgement.

Key words:bladder cancer；NMP22；CA19-9；CEA；immunohistochemistry

作者簡介：左玉良(1979-)，男，河南正陽人，主治醫師，從事泌尿外科腫瘤診療工作。

收稿日期：2015-08-17

中圖分類號：R737.14,R446.6

文獻標志碼：A

文章編號：1672-688X(2015)04-0252-05