TLR4/NF-κB與急性冠脈綜合征的相關性及通心絡的干預作用

TLR4/NF-κB與急性冠脈綜合征的相關性及通心絡的干預作用

李玉紅謝萍1李遠2謝輝袁躍龍洪有勤徐光旭侯明英

(重慶市永川區人民醫院心內科，重慶402160)

摘要〔〕目的檢測不同類型冠心病患者炎性因子的變化及通心絡的穩定斑塊作用。方法選擇冠心病患者66例，正常對照組24例，比較各組間Toll樣受體(TLR)4、核因子(NF)-κB及腫瘤壞死因子(TNF)-α變化。將急性冠狀動脈綜合征(ACS)患者分為常規治療組和通心絡治療組，治療4 w后再次檢測上述指標。結果ACS患者TLR4、NF-κB、TNF-α的表達較穩定性心絞痛組和正常對照組顯著增高(P<0.01)。治療后兩組TLR4、NF-κB和TNF-α水平均降低(P<0.05)。且通心絡治療組TLR4、NF-κB和TNF-α水平降低更顯著(P<0.05)。結論通心絡可減輕動脈的炎癥反應，干預動脈粥樣斑塊的進展，有望成為新的穩定斑塊藥物。

關鍵詞〔〕急性冠脈綜合征；Toll樣受體4；核因子-κB；腫瘤壞死因子-α

中圖分類號〔〕R544.1〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：重慶市衛生局醫學科研計劃項目(2012-2-303)；重慶市永川區科委軟科學指導項目

1甘肅省人民醫院心內科

2重慶醫科大學附屬永川醫院中心實驗室

第一作者：李玉紅(1971-)，女，副主任醫師，碩士，主要從事冠心病基礎與臨床研究。

Toll樣受體(TLR)是介導先天免疫和炎癥反應的主要受體，是連接先天免疫和獲得性免疫的橋梁。TLR4被激活，啟動胞內信號轉導，最終激活核因子(BNF)-κB，從而參與冠心病的發生、發展。早期發現并穩定易損斑塊對降低心血管事件有重要作用。目前對于冠狀動脈內斑塊不穩定或破裂的藥物干預研究多局限于他汀類藥物。最近有研究顯示〔1〕，通心絡能干預動脈粥樣硬化斑塊發展、有效預防斑塊破裂。但是對于通心絡能否通過抑制TLR4/NF-κB信號通路，從而發揮穩定斑塊的作用，目前尚不明確。本實驗通過觀察急性冠脈綜合征(ACS)患者通心絡治療前后TLR4、NF-κB、腫瘤壞死因子(TNF)-α的變化，了解通心絡對炎癥反應的抑制作用，探討通心絡治療ACS的可能機制。

1資料與方法

1.1一般資料46例ACS患者，其中不穩定性心絞痛24例，急性心肌梗死22例，男29例，女17例，年齡(60.01±12.08)歲，體重指數〔BMI,(23.26±1.98)kg/m2〕，吸煙15例，高血壓21例。將其隨機分為常規治療組22例，男14例、女8例，平均年齡(59.20±12.01)歲，BMI(22.10±1.87)kg/m2，吸煙6例，高血壓11例；通心絡治療組24例，男15例、女9例，平均年齡(60.21±12.86)歲，BMI(24.13±1.57)kg/m2，吸煙9例，高血壓10例。常規治療組給予ACS的常規治療，包括阿司匹林、低分子肝素、β受體阻滯劑、硝酸酯類等。通心絡治療組在常規治療的基礎上合用通心絡(2粒，3次/d，河北以嶺藥業公司生產)。

穩定性心絞痛患者20例，男12例，女8例，平均年齡(61.06±13.03)歲，BMI(25.03±2.01)kg/m2,吸煙7例，高血壓8例。不穩定性心絞痛、急性心肌梗死和穩定性心絞痛均按美國心臟病學會/美國心臟協會標準，且均經冠狀動脈造影證實。排除急性感染、惡性腫瘤、自身免疫性疾病、血管疾病、嚴重肝腎疾病、近1 w內有手術或外傷史者。

正常對照組為以胸痛住院，既往無高血壓、糖尿病和冠心病史，經心電圖、心肌酶學和冠狀動脈造影排除冠心病的患者24例，其中男13例，女11例，平均年齡(56.80±8.30)歲，BMI(23.14±2.12)kg/m2，吸煙12例，無高血壓患者。ACS組、穩定性心絞痛組及正常對照組，在年齡、性別、BMI、吸煙量及血脂等方面差異均無統計學意義(P>0.05)。常規治療組和通心絡治療組在年齡、性別、體重指數、吸煙量及血脂等方面差異均無統計學意義(P>0.05)。

1.2標本采集所有入選患者治療前1 d和治療4 w后分別清晨空腹采集肘靜脈血5 ml，其中3 ml用乙二胺乙酸二鉀(EDTAK2)抗凝，另外2 ml不抗凝，立即用3 000 r/min低溫離心機分離血漿，留取血清-75℃冰箱保存，備用。

1.3TLR4的測定流式細胞儀檢測外周血單核細胞TLR4表達，取100 μl用EDTA-K2抗凝的全血，加入20 μlPE標記鼠抗人TLR4單抗(美國，Biolegend公司)，混勻后室溫孵育30 min，用標本處理儀進行細胞固定和破膜，離心后棄上清，用2 ml Stain緩沖液(ph 7.4的磷酸緩沖液加2%小牛血清加0.1%疊氮鈉)洗兩遍，細胞沉淀用500 ml Stain緩沖液重懸后上流式細胞儀(美國，Coulter公司)檢測，同時設不加標記抗體的陰性對照管。

1.4NF-κB的測定采用酶聯免疫法測定NF-κB的水平。

1.5TNF-α的測定采用放射免疫法測定TNF-α的水平。

1.6統計學分析采用SPSS18.0進行方差分析、t檢驗。TLR4與NF-κB、TNF-α之間的關系采用Spearman相關分析。

2結果

2.1外周血單核細胞TLR4、NF-κB表達和血清TNF-α的水平的變化ACS組外周血單核細胞TLR4、NF-κB表達和血清TNF-α水平較穩定性心絞痛組和正常對照組顯著增高(P<0.01)，穩定性心絞痛組和正常對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2ACS患者TLR4、NF-κB與TNF-α的相關性ACS患者外周血單核細胞TLR4、NF-κB表達與NF-κB、TNF-α的水平呈正相關(r=0.717、0.721,P<0.05)。

2.3ACS患者治療前后TLR4、NF-κB表達和TNF-α水平的變化治療前通心絡治療組和常規治療組外周血單核細胞TLR4、NF-κB表達和血清TNF-α水平差異無統計學意義(P>0.05)。治療后兩組外周血單核細胞TLR4、NF-κB表達和血清TNF-α水平均降低(P<0.05)。且通心絡治療組外周血單核細胞TLR4、NF-κB表達和血清TNF-α水平較常規治療組降低更顯著(P<0.05)。見表2。

表1　各組TLR4、NF-κB、 TNF-α水平比較

與正常對照組比較：1)P<0.01；與穩定性心絞痛組比較：2)P<0.01

表2　ACS患者治療前后TLR4、NF-κB 、TNF-α水平的變化

與本組治療前比較：1)P<0.05；與常規治療組治療后比較：2)P<0.05

3討論

ACS確切機制尚未闡明，冠脈粥樣斑塊不穩定是其基本病理生理特點。參與斑塊不穩定或破裂的可能機制較為復雜。目前研究表明炎癥在其中起重要的作用。TLR4是介導免疫炎癥反應的主要模式識別受體，當病原體入侵或損傷和硬化的動脈處存在有內源性配體如低度修飾的低密度脂蛋白時TLR通路即被活化，啟動胞內信號轉導，最終激活NF-κB。NF-κB是具有多向性調節作用的核轉錄因子，主要調控與免疫、炎癥反應相關的基因的表達〔2〕。作為上游信號分子的NF-κB對炎性細胞因子及toll受體等因子的基因轉錄發揮重要的調控作用。NF-κB的活化誘導單核/巨噬細胞產生TNF-α等免疫炎性細胞因子、共刺激分子以及黏附分子等，參與冠心病的發生、發展〔3〕。Methe等〔4〕研究表明，ACS患者外周血單核細胞TLR4表達明顯增加，且與斑塊穩定性相關。TNF-α是一種具有多生物活性的炎性細胞因子，與機體的免疫炎癥反應關系密切，參與動脈粥樣硬化及冠心病的發生、發展。本研究結果提示外周血單核細胞TLR4、NF-κB與TNF-α水平明顯增高與ACS發生、發展顯著相關。或許TLR4、NF-κB、TNF-α不僅可以作為冠心病的危險因子，也可作為冠心病心血管事件發生的預測和預后指標。通心絡是由人參、水蛭、土鱉蟲、全蝎、蜈蚣、蟬蛻、降香、冰片等藥物組成，具有益氣養血、活血通絡的作用。其治療冠心病已10多年，確切療效已成共識。有研究在冠狀動脈硬化大白兔模型實驗中發現通心絡有穩定斑塊作用，且其作用相當于小劑量辛伐他汀〔5〕。有研究表明通心絡能降低細胞胞質氧化型低密度脂蛋白膽固醇濃度，抑制動脈的炎癥反應，減緩動脈粥樣硬化進程〔6〕。本研究表明通心絡能減輕動脈粥樣硬化斑塊炎癥反應，有穩定斑塊作用。此作用可能與其抑制TLR4過度表達，及其信號通路下游炎性細胞因子TNF-α的分泌，從而穩定冠狀動脈粥樣硬化易損斑塊，減少心血管事件發生。

4參考文獻

1Zhang L，Liu Y，Lu XT，etal.Traditional Chinese medication Tongxinluo dose-dependently enhances stability of vulnerable plaques：a comparison with a high-dose simvastatin therapy〔J〕.AM J Physiol Heart Circ，2009;297(6)：H2004-H2014.

2Zhang GL，Sankar Ghosh.Toll-like receptor-mediated NF-κB activation：a phylogenetically conserved paradigm in innate immunity〔J〕.J Clin Invest,2001；107(1)：13-9.

3Wyss CA，Neidhart M，Altwegg L，etal.Cellular actors，Toll-like receptors，and local cytokine profile in acute coronary syndromes〔J〕.Eur Heart J，2010；31(12)：1457-69.

4Methe H，Kim JO，Kofler S，etal.Expansion of circulating TLR4-positive monocytes in patients with ACS〔J〕.Circulation，2005；111(20)：2654-61.

5李震，楊躍進，秦學文，等.通心絡與辛伐他汀對兔粥樣硬化斑塊不穩定性干預的對比研究〔J〕.中華醫學雜志，2006；86(44)：3149-50.

6吳以嶺，游佳華，袁國強，等.通心絡超微粉對高脂飲食兔胸主動脈NF-κB、胞間粘附分子1及血管細胞粘附分子1表達的影響〔J〕.中華心血管病雜志，2007；35(3)：271-4.

〔2014-02-16修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)