乳巖內消霜的急性毒性研究

乳巖內消霜的急性毒性研究

陳瑞雪馬民廖銳別鳳杰顏顯欣呂燕紅黃茂杰徐騫李狄非

(暨南大學醫學院，廣東廣州510632)

摘要〔〕目的觀察乳巖內消霜外用給藥對SD大鼠是否有急性毒性作用。方法健康成年雌性SD大鼠分為4組，采用乳巖內消霜基質和大、中、小劑量乳巖內消霜作用于健康成年雌性SD大鼠背部皮膚，觀察其對SD大鼠的生理活動、精神狀態、皮膚、體重、血常規、血液生化學等指標的影響。結果各組大鼠處理后，毛發、生理活動、精神狀態等一般指標正常；各組大鼠體重差異不顯著(P>0.05)；各組大鼠血液學一般檢查、血液生化學等指標的差異均無統計學意義(P>0.05)；與基質組比較，乳巖內消霜組大鼠給藥區皮膚角質層輕度變薄，無炎細胞浸潤，毛囊結構和真皮層未見病變。結論乳巖內消霜對動物無明顯急性毒性作用，是一種較安全的外用中藥制劑。

關鍵詞〔〕乳巖內消霜；急性毒性

中圖分類號〔〕R-332〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：國家自然科學基金(No.81473688；No.81173265); 廣東省科技計劃項目(No.2012B031800155); 中央高?；究蒲袠I務費專項資金項目(No.21612422); 教育部新世紀優秀人才支持計劃(NCET-13-0827)； 廣州市科技計劃項目(No.2014J4100104)；暨南大學2013年度廣東省大學生創新計劃項目(No.1055913147)；暨南大學2014年度國家級大學生創新創業訓練計劃項目(No.201410559075)

通訊作者：馬民(1973-)，男，教授，博士生導師，主要從事中西醫結合研究。

第一作者：陳瑞雪(1988-)，女，在讀博士，主要從事中西醫結合研究。

乳巖內消霜是一種中藥外用乳膏劑(國家發明專利申請號：201110029344.1)，組成藥物為大黃、延胡索、丁香、玫瑰花等9味中藥材，采用不同濃度乙醇水溶液加熱回流法提取各中藥材的活性成分，制成干浸膏，最后添加基質而成。動物實驗已證實乳巖內消霜對于治療乳腺癌前病變、阻斷乳腺癌的發生有較顯著的效果〔1，2〕。乳腺癌的發生是一系列病理過程的累積，因此在乳腺癌發生前阻斷病理過程尤為重要。乳巖內消霜正是用于治療乳腺癌前病變的藥物，然而由于未作安全性研究，該制劑并未廣泛應用于臨床。本實驗研究乳巖內消霜對動物的急性毒性作用，為臨床安全應用提供依據。

1材料與方法

1.1實驗動物SPF級SD大鼠，雌性，200～250 g，廣州中醫藥大學實驗動物中心提供。

1.2藥物與試劑

1.2.1藥物自制大、中、小劑量的乳巖內消霜(含干浸膏量之比為4∶2∶1)，乳巖內消霜基質。

1.2.2試劑苦味酸(廣東臺山粵僑試劑塑料有限公司)、戊巴比妥鈉(美國Sigma)、氯化鈉注射液(青島首和金海制藥有限公司)、甲醛溶液(廣州化學試劑廠)，蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒(Beyotime，碧云天生物技術研究所)、中性樹膠(廣州市秀威貿易有限公司)。

1.3主要儀器電子天平(XS125A-SCS，Precisa Instruments Ltd./Switzerland)、低速冷凍離心機(KDC-2044，科大創新股份有限公司)、自動正置生物顯微鏡(LEICA DM6000B)。

1.4實驗方法

1.4.1分組及給藥方法健康成年雌性SD大鼠24只常規飼養7 d，大鼠生長狀況正常。實驗前24 h用脫毛膏將全部大鼠的脊臀部脫毛，約5 cm×8 cm。按體重編號，苦味酸標記，完全隨機化分組。分為4組，每組6只，即乳巖內消霜基質組、乳巖內消霜大、中、小劑量組(以下簡稱霜劑基質組、霜劑大劑量組、霜劑中劑量組和霜劑小劑量組)。

實驗前大鼠稱重，觀察脫毛區皮膚完整光滑無破損，將霜劑大、中、小劑量、霜劑基質各5 g(干浸膏量分別為2 600、1 300、650、0 mg/kg)均勻涂抹于各組大鼠脫毛區，分別相當于人體用量(中劑量霜劑1 g·50 kg-1·d-1)的328.3、164.1、82.1、0倍，用油紙、紗布、膠布固定，每只動物分籠飼養。

1.4.2觀察指標藥物涂抹24 h后，剪去膠布、紗布等，用棉球擦去霜劑或基質，生理鹽水洗凈。每天觀察大鼠皮膚、毛發、眼和黏膜、中樞神經系統、呼吸運動、四肢活動等表現以及死亡情況；于去除藥物第2、4、7天記錄大鼠體重情況；第7天全部大鼠腹腔注射2%戊巴比妥鈉生理鹽水溶液(40 mg/kg)，腹主動脈取血，取2 ml血于EDTAK2真空抽血管，行血液學一般指標檢測；其余約5 ml血于促凝采血管，3 000 r/min離心10 min，取上部血清約400 μl行血液生化學檢測，樣品于1 h內送至暨南大學第一附屬醫院檢驗科檢測；取各組大鼠心、肝、脾、肺、腎等主要臟器，肉眼觀察外觀；將給藥部位皮膚剪下，注意不能破壞皮膚，置于10%甲醛溶液，石蠟包埋，切片，HE染色，顯微鏡下觀察。

1.5統計學分析采用SPSS13.0軟件進行SNK檢驗、Tamhane′s T2法檢驗。

2結果

2.1一般狀態觀察每日觀察大鼠情況，發現去除藥物后，霜劑大劑量組和中劑量組大鼠的給藥部位皮膚有中、輕度紅斑，到第7天皮膚紅斑基本消失；各組大鼠毛發、精神、活動、進食、飲水等均未見異常，未見大鼠死亡情況。經重復測量設計的方差分析，各組大鼠體重隨時間增加而增加(F=38.677，P=0)；時間與處理交互效應無統計學意義(F=0.711，P=0.695)；經多樣本均數間兩兩比較的SNK檢驗，各組大鼠體重差別無統計學意義(P=0.477)，見表1。

表1　藥物處理前后大鼠體重

2.2血液學檢測經完全隨機設計資料的方差分析，各組大鼠血液學一般檢查資料：白細胞計數(WBC)(F=0.517，P=0.678)、紅細胞(RBC)(F=3.11，P=0.067)、血小板(PLT)(F=0.414，P=0.746)、血紅蛋白(HGB)(F=2.742，P=0.089)。因此，不能認為4組資料以上各血液學指標的均數不同，見表2。

表2　各組大鼠血液學指標情況

2.3血液生化學指標經完全隨機設計資料的方差分析，各組大鼠血液生化學資料：谷丙轉氨酶(ALT)(F=0.353，P=0.788)、谷草轉氨酶(AST)(F=2.798，P=0.085)、血尿素氮(BUN)(F=1.404，P=0.289)、血肌酐(CREA)(F=0.152，P=0.926)。因此，不能認為4組大鼠的以上血液生化學指標的均數不同，見表3。

表3　各組大鼠血液生化學指標情況 ± s， n=6)

2.4主要臟器改變肉眼觀察各組大鼠的心、肝、脾、肺、腎等主要臟器顏色、形態均無異常，肉眼未見病理改變。

2.5皮膚變化比較乳巖內消霜組與基質組比較，大鼠給藥部位皮膚表皮完整，角質層輕度變薄，未見炎細胞浸潤等其他病變，毛囊、真皮等未見病變，見圖1。

圖1　SD大鼠給藥部位皮膚病理片(HE，×200)

3討論

乳巖內消霜外用24 h后，對SD大鼠的毛發、生理、精神活動等未造成明顯影響；大、中劑量乳巖內消霜24 h涂藥對大鼠皮膚有刺激性，但去除藥物后1 w內皮膚恢復；乳巖內消霜外用對動物的體重增長未造成明顯影響，對大鼠血液一般指標，以及肝臟功能、腎臟功能無明顯急性毒性作用；各組大鼠的心、肝、脾、肺、腎等主要臟器未見異常；乳巖內消霜組大鼠的皮膚角質層輕度變薄，無其他病理改變。因此，乳巖內消霜對動物無明顯急性毒性作用，是一種較為安全的中藥外用制劑。

4參考文獻

1Zhang GJ，Li DH，Liao R，etal.The study of interference with Ruyanneixiao cream on hemorheology and mammary microcirculation of mammary precancer rats〔A〕.Advanced Materials Research，Advances in Chemistry ResearchⅡ，PTS1～3〔C〕.2nd International Conference on Chemical Engineering and Advanced Materials，2012；(554-556):1789-93.

2Li DH，Zhang GJ，Ma Y，etal.The modulation of Ruyanneixiao cream on AP-2 gamma and HER 2 in rat breast tissues with mammary precancerous lesions〔J〕.J Invest Med，2013;61(4):S23-4.

〔2014-12-23修回〕

(編輯李相軍)