Th 17/Treg平衡與葡萄胎嚴重程度的關(guān)系

郭賽群，張 穎，王麗峰，邱文山，溫都蘇，譚春燕，楊 嵐廣東醫(yī)學(xué)院附屬廉江市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 廉江 54400；廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 湛江5400

既往有研究發(fā)現(xiàn)葡萄胎惡變伴隨Th1/Th2失衡［1］，我們在既往的研究中發(fā)現(xiàn)葡萄胎惡變出現(xiàn)Treg數(shù)量的增加［2］。作為與Th1/Th2緊密相聯(lián)的Th17/Treg平衡，我們推測Th17/Treg平衡參與了葡萄胎的惡變，其機制可能是Th17功能減弱，不足以制衡Treg的過度免疫抑制，而出現(xiàn)免疫耐受。為此，我們探討Th17/Treg平衡在葡萄胎惡變的作用，并發(fā)現(xiàn)葡萄胎患者確實存在Th17/Treg的失衡，且與嚴重程度相關(guān)。

1 資料與方法

1.1 患者入選與分組

經(jīng)臨床表現(xiàn)、B超及HCG等確診，合并免疫系統(tǒng)疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等；近8周內(nèi)服用激素或免疫抑制劑者［3］。共收集檢測葡萄胎患者60例（輕中重各20例），同時收集20例絨癌患者作為陽性對照，并且收集同齡段的20名健康女性作為陰性對照。以上入選對象年齡均無統(tǒng)計學(xué)差異。

1.2 標(biāo)本采集與指標(biāo)檢測

于入選后次日清晨空腹抽取以上觀察對象的靜脈血5 ml，抗凝后于4℃保存待檢。對不同分度葡萄胎患者進行清宮或活檢，取得蛻膜組織后進行分離，獲取蛻膜基質(zhì)細胞留待下述免疫學(xué)檢測[4]。

1.3 流式細胞術(shù)

采用Beckman多色流式細胞儀檢測外周血及蛻膜組織內(nèi)Th17細胞及其胞內(nèi)細胞因子IL-17、IL-23，及其功能因子RORγt的含量；同樣采用流式細胞術(shù)，檢測Treg及其胞內(nèi)功能因子IL-10、TGF-β1及Foxp3的百分含量[5]。CD4-FITC、CD25-FITC以及IL-10、TGF-β1及Foxp3抗體，均購自美國eBioscience公司。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

定量資料采均數(shù)±標(biāo)準差表示，采用單因素方差分析SBK法比較3組間的兩兩差異；相關(guān)性分析采用Spearman非參數(shù)法。運用統(tǒng)計軟件包SPSS 13.0分析數(shù)據(jù)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 流式細胞術(shù)檢測結(jié)果

絨癌患者Th17、IL-17、IL-23及RORγt與正常人比較均無統(tǒng)計學(xué)差異，而葡萄胎患者僅IL-23與正常人無顯著性差異，Th17、IL-17及RORγt均顯著低于正常人及絨癌患者（P<0.05）。與正常人比較，絨癌患者Treg、IL-10、TGF-β及Foxp3均顯著升高，且顯著高于葡萄胎患者，三組間任意兩組均有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。三組間的Th17/Treg平衡以葡萄胎患者最低，顯著低于另外兩組，三組間差異兩兩差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，表1）。

表1 3組外周血內(nèi)Th17、Treg及其細胞因子含量與Th17/Treg平衡的比較(x±s,%)

2.2 葡萄胎患者Th17、Treg及Th17/Treg平衡的比較

隨著病變嚴重程度加重，葡萄胎患者外周血及蛻膜內(nèi)Treg數(shù)量遞增，而Th17及Th17/Treg遞減。與外周血比較，葡萄胎患者蛻膜內(nèi)Th17升高，而蛻膜Treg含量降低。組間比較方面，除蛻膜內(nèi)Treg無組間差異外（P=0.068），其余組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均為P<0.05，表2）。

2.3 相關(guān)性分析

表2 不同病變程度葡萄胎患者Th17、Treg及Th17/Treg平衡的比較(x±s,%)

外周血及蛻膜Treg均與病變程度分級呈顯著正相關(guān)性；而Th17及Th17/Treg均與分級呈顯著負相關(guān)性，其中相關(guān)程度最大為Th17/Treg平衡與重度的關(guān)系（以上所得r值的絕對值均大于0.7，P值均小于0.05，表3）。

3 討論

葡萄胎的病因未明，但有越來`越多的證據(jù)表明，葡萄胎的發(fā)病與免疫異常有因果關(guān)系。人體免疫學(xué)分為體液免疫及細胞免疫，其中體液免疫以抗體等為主，而細胞免疫則以T細胞及B細胞等為主［6］。目前國際上以T細胞的研究為主。近年國內(nèi)外不少學(xué)者從免疫學(xué)角度探討妊娠滋養(yǎng)細胞疾病的發(fā)病機制，并發(fā)現(xiàn)T細胞數(shù)量及功能的異常在葡萄胎發(fā)病機制當(dāng)中發(fā)揮重要作用［7］。CD4+輔助性T細胞（Th）是以表達CD4分子為特征的一個重要T細胞亞群，目前主要分為Th1（分泌IL-2及IFN-γ為特征）及Th2亞群（分泌IL-4、IL-8及TNF-α等為特征），且Th的過度活化已被證實為葡萄胎的一個新的發(fā)病機制［8］。近年還發(fā)現(xiàn)一種以分泌IL-17為主要特征的CD4+輔助性T細胞，命名為Th17 T細胞亞群，功能以提呈抗原、促進免疫反應(yīng)為主［9］。在CD4+T細胞里面，還有一個特殊的亞群—CD4+CD25+Treg細胞，該細胞以分泌IL-10及TGF-β1為主要特征，且以Foxp3蛋白作為主要的轉(zhuǎn)錄因子，功能以調(diào)節(jié)尤其是抑制免疫反應(yīng)為主［10］。由此看出，同樣作為CD4+T細胞，Th及Treg恰好行使了相反的功能，亦即Th17促進免疫反應(yīng)，而Treg抑制免疫反應(yīng)，因此Th17/Treg構(gòu)成一對平衡，從而在某些免疫性疾病如血管炎性肉芽腫、自身免疫脊髓炎、多發(fā)性硬化癥等起到重要角色［11］。但目前尚未見有研究探討葡萄胎，尤其是惡變的葡萄胎患者的Th17/Treg變化特點，這不利于葡萄胎的新型免疫機制的研究。

表3 Th17/Treg平衡與葡萄胎病變程度的關(guān)系（r/P）

本研究發(fā)現(xiàn)，絨癌患者Th17、IL-17、IL-23及RORγt與正常人比較均無統(tǒng)計學(xué)差異，而葡萄胎患者僅IL-23與正常人無顯著性差異，Th17、IL-17及RORγt均顯著低于正常人及絨癌患者，這說明一個重要現(xiàn)象：Th17、IL-17及RORγt三者在鑒別葡萄胎與絨癌起到重要作用！與正常人比較，絨癌患者Treg、IL-10、TGF-β及Foxp3均顯著升高，且顯著高于葡萄胎患者，三組間任意兩組均有統(tǒng)計學(xué)差異，因此在Treg的差異方面與Nagymanyoki［1,4］報道的有所類似。從Th17與Treg的比較可以看出，Th17細胞在葡萄胎的表達的特異性要優(yōu)于Treg。從平衡（比值）看，三組間的Th17/Treg平衡以葡萄胎患者最低，顯著低于另外兩組，三組間差異兩兩差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，說明葡萄胎患者的Th17減少、Treg增多的現(xiàn)象要較絨癌患者更為顯著。

在與病情嚴重程度的相關(guān)性方面，我們發(fā)現(xiàn)隨著病變嚴重程度加重，葡萄胎患者外周血及蛻膜內(nèi)Treg數(shù)量遞增，而Th17及Th17/Treg遞減，說明病情越重，平衡失調(diào)則越重。與外周血比較，葡萄胎患者蛻膜內(nèi)Th17升高，而蛻膜Treg含量降低，這說明蛻膜組織內(nèi)的細胞數(shù)量改變要較外周血顯著。組間比較方面，除蛻膜內(nèi)Treg無組間差異外，其余組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，說明蛻膜內(nèi)Treg的特異性不如Th17理想。相關(guān)性分析顯示，外周血及蛻膜Treg均與病變程度分級呈顯著正相關(guān)性；而Th17及Th17/Treg均與分級呈顯著負相關(guān)性，其中相關(guān)程度最大為Th17/Treg平衡與重度的關(guān)系，這表明通過統(tǒng)計學(xué)分析證實了免疫細胞的數(shù)量與葡萄胎程度存在直接聯(lián)系。

通過本研究我們認為，外周血及蛻膜內(nèi)Th17細胞減少、Treg增多，從而導(dǎo)致Th17/Treg比值變小從而向Treg傾斜，是葡萄胎的一個重要免疫學(xué)現(xiàn)象，并且與葡萄胎的嚴重程度呈顯著相關(guān)性。因此Th17/Treg對葡萄胎患者具有重要的臨床意義。

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