心腦佳配方對酒精依賴大鼠肝損傷的保護作用

心腦佳配方對酒精依賴大鼠肝損傷的保護作用

杜愛林李爽萬佳1王丹朱峰1孟莉萬光瑞

(新鄉醫學院生理學與神經生物學教研室，河南新鄉453003)

摘要〔〕目的觀察心腦佳配方對酒精依賴大鼠肝損傷的保護作用。方法45只SD雄性大鼠隨機分為正常組、酒精依賴模型組、心腦佳配方小、中、大劑量組。用電鏡觀察肝組織超微結構的變化。檢測血清低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)水平。結果電鏡下觀察到B組肝細胞內線粒體腫脹,脂滴數量增加;心腦配方小、中劑量組線粒體結構基本正常,部分肝細胞胞質內可見少量脂滴;心腦配方高劑量組肝細胞內線粒體數目增多。模型組大鼠血清LDL、TG、TC均高于正常組(P<0.05)；心腦配方小、中、大劑量組與模型組大鼠比較,血清LDL、TC、TG水平均有不同程度地降低；模型組大鼠血清HDL明顯低于正常組大鼠(P<0.01)；心腦配方小、中、大劑量組與模型組大鼠比較，血清HDL均有不同程度地升高。結論心腦佳配方可明顯改善大鼠因酒精依賴引起的肝組織損傷。

關鍵詞〔〕心腦佳配方；酒精依賴；超微結構；甘油三酯

中圖分類號〔〕R575.5；R285.5〔

基金項目：河南省科技廳基礎與前沿研究項目(No.112300410053)

通訊作者：萬光瑞(1962-)，男，碩士，教授，碩士生導師，主要從事藥物成癮工作。

1鄭州大學

第一作者：杜愛林(1972-)，男，碩士，副教授，主要從事藥物成癮工作。

酒精濫用一直是全球范圍內重要的公共健康問題。心腦佳配方由葛根、天麻等六味中藥組成，是新鄉醫學院萬光瑞教授從眾多對心血管和大腦有保護作用的食藥兩用中藥，按照現代中藥藥理研究遴選出作用強、安全、性能穩定的中藥復方制劑。本文旨在為臨床有效地治療酒精依賴患者肝損傷尋找有效藥物或功能性食品。

1材料與方法

1.1主要儀器和試劑透射電子顯微鏡(H-7500，日立)。心腦佳配方：自制。

1.2動物及分組鄭州大學動物中心提供清潔級健康SD雄性大鼠45只〔許可證號：scxk(豫)2005-0001〕，體重120～160 g。分為正常組、模型組、心腦佳配方小、中、大劑量組。正常組大鼠正常飲食，其余各組大鼠飲含6%(V/V)酒精水溶液28 d〔1〕。酒精依賴模型組，食物正常。心腦佳配方小、中、大劑量組(總黃酮含量為260、520、780 mg)，心腦佳配方各組為相應藥物摻入各組食物。進行28 d，水合氯醛麻醉,腹主動脈取血,分離血清,留取肝組織。

1.3透射電鏡觀察超微結構取大鼠肝組織樣品，大小約1 mm3由新鄉醫學院電鏡室協助完成。

1.4血清學檢測大鼠腹主動脈取血,分離血清，由新鄉市軍分區醫院檢驗科檢測血清低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)。

2結果

2.1肝細胞超微結構的變化正常組肝細胞細胞核呈圓形或橢圓形，胞膜完整，核仁清晰，核膜清晰完整，線粒體形態正常，嵴結構清晰，細胞內偶見小脂滴。酒精依賴模型組部分細胞胞膜不完整，細胞核異染色質邊集。肝細胞內線粒體腫脹變形，嵴斷裂模糊，胞質內充滿大量大小不一的脂滴。心腦佳配方低劑量組肝細胞內分布大小不等的脂滴。心腦佳配方中劑量組核膜清晰，線粒體結構基本正常，部分肝細胞胞質內可見少量脂滴。心腦佳配方高劑量組肝細胞內線粒體數目增多，脂滴少見。見圖1。

2.2心腦佳配方對酒精依賴大鼠血清LDL、HDL、TC、TG水平的影響模型組大鼠血清LDL、TG、TC均高于正常組(P<0.05);而不同劑量的心腦佳配方組大鼠與模型組大鼠比較,血清LDL、TC、TG水平均有不同程度地降低。其中心腦配方中劑量組大鼠與模型組大鼠比較，血清LDL明顯降低(P<0.01)，心腦配方小、大劑量組大鼠與模型組大鼠比較，血清LDL降低(P<0.05);配方小、中、大劑量組大鼠與模型組大鼠比較，血清TC降低(P<0.05),心腦配方小、大劑量組大鼠與模型組大鼠比較，血清TG降低(P<0.05),心腦配方大劑量組大鼠與模型組大鼠比較，血清TG明顯降低(P<0.01)。模型組大鼠血清HDL明顯低于正常組大鼠(P<0.01)；配方小劑量組大鼠與模型組大鼠比較，血清HDL升高(P<0.05),D、E組大鼠與模型組大鼠比較，血清HDL明顯升高(P<0.01)。見表1。

圖1　各組肝細胞超微結構(×12 000)

組別LDLHDLTCTG正常組2.29±0.142)0.54±0.162)1.72±0.081)0.71±0.161)模型組2.89±0.170.23±0.042.04±0.201.00±0.11低劑量組2.46±0.211)0.46±0.151)1.75±0.121)0.79±0.101)中劑量組2.45±0.132)0.40±0.032)1.77±0.471)0.75±0.181)高劑量組2.57±0.071)0.40±0.082)1.77±0.241)0.76±0.082)

與模型組比較：1)P<0.05，2)P<0.01

3討論

酒精依賴相關基因在腦或肝組織中高度表達，涉及神經遞質系統或乙醇代謝過程〔2，3〕。酒精性肝病發病機制復雜，一般認為，長期飲酒可使體內乙醛生成量增加，NADH/NAD的平衡改變而導致脂肪代謝和轉運紊亂〔4〕。酒精在體內可通過動員外周脂肪分解，釋放大量脂肪酸，促進肝臟TG合成增加〔5〕。此外，酒精可加重酒精代謝產物的肝毒性〔6〕，導致肝細胞脂肪攝取增多，促進脂肪肝的形成。患急性酒精性肝病時，肝細胞可出現輕微脂肪病變，表現為肝細胞內有脂滴沉積〔7〕， 線粒體腫脹，偶而出現巨大線粒體〔8，9〕，粗面內質網擴張斷裂， 核糖體脫失。本試驗中通過電鏡觀察肝細胞的超微結構改變 ，發現與正常組相比，表現出肝細胞脂肪變性的病理改變。 通過給予低劑量心腦佳配方組，肝細胞內脂滴沉積有不同程度地減少；而給予中、高劑量心腦佳配方組中，大鼠肝細胞內線粒體數目增多提示一定劑量的心腦佳配方能夠通過促進線粒體增生，加快乙醇在體內的代謝過程，從而降低乙醇對肝細胞的損傷程度。心腦佳配方的這種作用可能與本配方中葛根、天麻等中藥的總黃酮對慢性酒精性肝損傷具有顯著防治作用有關。

本研究表明，酒精依賴模型機體脂質代謝紊亂程度明顯加重；而對于過量飲酒所致的脂質代謝紊亂,心腦佳表現出良好的調節作用，心腦佳治療組大鼠肝功能、血脂有不同程度地改善。其中，心腦佳中劑量組與低劑量組相比，療效有顯著提高；心腦佳高劑量組與中劑量組相比，療效有所提高，但并不顯著。心腦佳可明顯改善肝組織超微結構的病理損傷， 對酒精造成的脂質代謝紊亂具有一定的調節作用。

4參考文獻

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9馮琴，方志紅，崔劍巍,等.葛根對大鼠酒精性肝損傷的干預作用〔J〕.上海中醫藥雜志，2007；41(4)：64-8.

〔2013-09-15修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)