巴戟天醇提物對大鼠腦缺血再灌注損傷組織TNF-αIL-6表達水平的影響

鄧 強河南駐馬店市中心醫院神經外科 駐馬店 463000

巴戟天醇提物對大鼠腦缺血再灌注損傷組織TNF-αIL-6表達水平的影響

鄧 強
河南駐馬店市中心醫院神經外科 駐馬店 463000

目的 探討巴戟天醇提物（RMOEE）對大鼠腦缺血再灌注損傷組織腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）表達水平的影響。方法 40只健康雄性SD大鼠隨機均分為假手術組、腦缺血再灌注損傷模型組、RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組4組，每組10只。RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組大鼠連續1周按相應劑量進行RMOEE灌胃，而假手術組和腦缺血再灌注損傷模型組大鼠僅進行同體積生理鹽水灌胃。末次給藥1h后采用改良的Zea-Longa線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，測定各組大鼠腦組織含TNF-α、IL-6表達水平。結果 RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組腦組織TNF-α、IL-6表達水平較腦缺血再灌注損傷模型組低（P＜0.05）。RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組TNF-α、IL-6表達水平比較差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 RMOEE可通過減少TNF-α、IL-6表達而減輕大鼠腦缺血再灌注損傷。

巴戟天醇提物；缺血再灌注損傷；腫瘤壞死因子-α；白介素-6

腦缺血再灌注損傷是顱腦外傷、腦部手術等過程中的常見損傷，其發病與炎癥反應關系密切［1］。巴戟天醇提物（radix morindae officinalis ethanolic extracts，RMOEE）是從雙子葉植物茜草科植物巴戟天中提取出來的，其在心臟、腎臟缺血再灌注損傷過程中具有抗炎、抗氧化、抗凋亡等作用［23］。本文通過測定RMOEE對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷腦組織腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）表達水平的影響，觀察其對這種損傷的保護作用。

1 材料與方法

1.1 藥品、試劑及儀器 巴戟天（一等品，廣東省德慶縣藥材公司，RMOEE的提取和鑒定由河南省食品藥品檢驗所完成）；TNF-α、IL-6ELISA試劑盒（美國Peprotech公司，批號分別為：20130922、20131107）；全自動酶聯免疫分析儀（北京中西遠大科技有限公司）。

1.2 實驗分組及處理 40只健康雄性SD大鼠，體質量304～347g，由河南省實驗動物中心提供，給予適應性喂養1周后，隨機均分為假手術組、腦缺血再灌注損傷模型組、RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組4組，每組10只。RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組大鼠連續1周按相應劑量進行RMOEE灌胃，而假手術組和腦缺血再灌注損傷模型組大鼠僅進行同體積生理鹽水灌胃。末次給藥1h后采用改良的Zea-Longa線栓法［4-5］制備大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型。

1.3 TNF-α、IL-6測定 造模結束后，各組大鼠常規取出右側大腦組織，稱取約0.5g腦組織塊，4℃預冷生理鹽水沖洗組織塊表面，濾紙吸干，精確稱質量并以0.1g：0.9mL的比例制成生理鹽水腦組織勻漿，4 000r/min于4℃條件下離心10min，取上清液，然后按照ELISA試劑盒說明測定TNF-α、IL-6水平。

1.4 統計學處理 采用SPSS 11.0處理數據，計量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間比較采用LSD-t檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

腦缺血再灌注損傷模型組TNF-α、IL-6表達水平較假手術組高（P＜0.05）。RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組腦組織TNF-α、IL-6表達水平較腦缺血再灌注損傷模型組低（P＜0.05）。RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組TNF-α、IL-6表達水平比較差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 各組大鼠小腦組織中TNF-α、IL-6水平比較 （±s，pg/g）

表1 各組大鼠小腦組織中TNF-α、IL-6水平比較 （±s，pg/g）

注：與假手術組比較，＊P＜0.05；與腦缺血再灌注損傷模型組比較，＃P＜0.05；與RMOEE1.5g/（kg·d）組比較，※P＜0.05

組別 TNF-αIL-6假手術組254.31±28.61 89.33±11.25腦缺血再灌注損傷模型組 697.27±56.89＊205.74±22.84＊RMOEE1.5g/（kg·d）組 505.84±38.06＃149.60±17.34＃RMOEE3.0g/（kg·d）組 398.35±42.11＃※114.23±12.55＃※F值89.568 107.257 P值 ＜0.001 ＜0.001

3 討論

目前，關于巴戟天的研究主要集中于缺血、缺血再灌注損傷、衰老、腎陽虛等病癥的防治方面，本文所用RMOEE是從巴戟天中提取而來，已被證實具有抗氧化、抗炎、抗衰老、補腎壯陽等功效［2-3，6］。由于炎癥反應已被證實參與了機體缺血再灌注損傷的發生發展過程，在這一過程中包括TNF-α、IL-6在內的眾多炎癥因子表達水平發生了變化。TNF-α是一種生物學功能多樣的細胞因子，包括內皮細胞、免疫細胞、平滑肌細胞在內的多種細胞均能夠分泌合成TNF-α，正常機體內存在微量的TNF-α，能夠維持機體的正常生物學功能，若其表達水平異常升高，則會導致一系列機體異常，目前，已被證實其在惡性腫瘤、心腦血管疾病、衰老、風濕等多種疾病患者體內存在異常高表達［3，7］。IL-6來源于內皮細胞、巨噬細胞和T淋巴細胞，能夠通過與其他細胞因子或其受體結合促進炎癥反應的進展，在缺血再灌注損傷的進展過程中起促進作用［3，8］。

本文結果顯示，腦缺血再灌注損傷模型組TNF-α、IL-6表達水平較假手術組高（P＜0.05），提示缺血再灌注損傷模型成功建立；RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組腦組織TNF-α、IL-6表達水平較腦缺血再灌注損傷模型組低（P＜0.05），證明RMOEE能夠改善其損傷；RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組TNF-α、IL-6表達水平比較差異有統計學意義，且前者優于后者，提示RMOEE的作用可能與藥物劑量有一定關系。總之，RMOEE可通過減少TNF-α、IL-6的表達而減輕大鼠腦缺血再灌注損傷，值得進一步深入探討具體機制。

［1］李全輝，紀志鵬，葛運飛，等.三七總皂苷對大鼠肝缺血再灌注損傷的保護作用［J］.浙江中西醫結合雜志，2014，24（8）：665-668.

［2］李凱，司忠義，李巖欣，等.巴戟天對大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響［J］.軍醫進修學院學報，2012，33（3）：277-279；301.

［3］張向前，王雪俠.巴戟天醇提物對大鼠腎缺血再灌注損傷的保護作用［J］.中國醫藥導報，2013，10（5）：22-24.

［4］Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats［J］.Stroke，1989，20（1）：84-91.

［5］梁正羽，唐松山，周東.線栓法大腦中動脈阻塞模型及神經保護因子研究進展［J］.中國臨床藥理學與治療學，2014，19（9）：1 069-1 074.

［6］何艷，程再興，陳紅，等.不同產地巴戟天鹽制后補腎陽功效的比較研究［J］.時珍國醫國藥，2014，25（4）：856-858.

［7］劉娟，陳麗琴，蘇秀蘭，等.人冠狀動脈粥樣硬化斑塊內白細胞介素6和18及腫瘤壞死因子α表達與斑塊穩定性有關［J］.中國動脈硬化雜志，2008，16（7）：537-540.

［8］孟學峰，范曄，薛連峰.小青龍湯加味改善慢性支氣管炎急性發作期患者血清IL-6和TNF-α的研究［J］.中醫研究，2009，22（6）：27-29.

（收稿2015-02-15）

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A

1673-5110（2015）13-0074-02