Aquaporin1在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其臨床意義

何佳 李文良 谷峰 馬勇杰

·基礎(chǔ)研究·

Aquaporin1在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其臨床意義

何佳①李文良①谷峰②馬勇杰③

目的：探討水通道蛋白1（aquaporin1，AQP1）在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況及其與臨床病理參數(shù)、預(yù)后的關(guān)系，觀察AQP1對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲的影響。方法：采用免疫組織化學(xué)染色法檢測135例腫瘤組織中AQP1的表達(dá)情況，分析AQP1與膠質(zhì)瘤臨床病理特征的關(guān)系，使用臨床資料完整的103例膠質(zhì)瘤標(biāo)本分析AQP1與生存的關(guān)系。將AQP1連接至慢病毒表達(dá)質(zhì)粒載體后感染惡性膠質(zhì)瘤LN229細(xì)胞，Western blot檢測目的蛋白的表達(dá)；MTT實(shí)驗和Transwell小室實(shí)驗分別檢測膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和侵襲能力。結(jié)果：AQP1的表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤的病理分級呈正相關(guān)，AQP1高表達(dá)與患者預(yù)后差相關(guān)（P<0.05）。過表達(dá)AQP1可增強(qiáng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、侵襲能力（P<0.05）。結(jié)論：AQP1表達(dá)與膠質(zhì)瘤進(jìn)展密切相關(guān)，其表達(dá)上調(diào)可顯著增強(qiáng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和侵襲能力，有望為膠質(zhì)瘤的臨床檢測及治療提供新思路。

膠質(zhì)瘤 水通道蛋白1 增殖 侵襲 生存

惡性腦膠質(zhì)瘤是成人中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)惡性腫瘤，患者2年生存率僅為20%～30%［1］，目前對于惡性膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的具體分子生物學(xué)機(jī)制仍未明確。近年來，水通道蛋白家族在腫瘤中的作用越來越受到重視。水通道蛋白1（aquaporin1，AQP1）在結(jié)腸癌、脈絡(luò)叢乳頭狀瘤、成血管細(xì)胞瘤、肺腺癌、支氣管癌、浸潤型乳腺癌中表達(dá)上調(diào)［2-6］，在膽管細(xì)胞癌表達(dá)下調(diào)［7］，在結(jié)腸癌中，AQP1的表達(dá)與組織分級呈正相關(guān)，與患者預(yù)后呈負(fù)相關(guān)［8-9］，而AQP1高表達(dá)的胸膜間皮瘤患者生存較好［10］。除此之外，AQP1增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞（結(jié)腸癌、黑色素瘤和乳腺癌）的遷移能力［11-13］，進(jìn)而增強(qiáng)腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移潛能。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，AQP1主要表達(dá)于脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞，參與腦脊液的形成［14］。然而，AQP1與膠質(zhì)瘤的關(guān)系尚未明確。本研究選取135例膠質(zhì)瘤樣本進(jìn)行免疫組織化學(xué)實(shí)驗，并在膠質(zhì)母細(xì)胞系LN229中過表達(dá)AQP1，觀察其對LN229細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病例資料 收集2004年1月至2012年6月天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院行手術(shù)切除的神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本135例。手術(shù)標(biāo)本經(jīng)40 g/L中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。所有病例術(shù)前均未行放化療，其中男性83例，女性52例；年齡9～80歲，中位年齡58歲。腫瘤直徑（4.51± 1.49）cm。本研究經(jīng)天津醫(yī)科大學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。選擇隨訪資料完整的神經(jīng)膠質(zhì)瘤病例103例進(jìn)行隨訪，隨訪方式為電話隨訪，內(nèi)容包括一般情況、臨床癥狀及影像學(xué)檢查。隨訪起點(diǎn)為確診日期，末次隨訪時間為2013年5月31日，至隨訪截止日，生存31例，死亡72例，無失訪病例。1.1.2 實(shí)驗材料和主要試劑 AQP1兔抗人多克隆抗體（SC-20810）購自美國Santa Cruz公司，PV-9000免疫組織化學(xué)試劑盒（北京中杉生物技術(shù)有限公司）。人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株LN229購自美國ATCC（American Type Culture Collection），細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI 1640（美國Invitrogen公司），胎牛血清（北京Hyclone公司），二甲基亞砜（北京Solarbio公司），0.25%胰蛋白酶（美國Sigma公司），BCA蛋白分析試劑盒、硝酸纖維素膜（美國Pierce公司），PCR儀（德國Eppendorf公司），質(zhì)粒提取試劑盒（德國Qiagen公司）。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)染色 石蠟切片、脫蠟、水化，PBS清洗3次5 min，0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液（pH= 6.0）修復(fù)2 min 50 s。加3%過氧化氫溶液后室溫放置10 min，PBS沖洗后加一抗（AQP1兔抗人多克隆抗體，1:500），4℃過夜，PBS沖洗后加聚合物增強(qiáng)劑，37℃孵育25 min，PBS沖洗，加酶標(biāo)抗兔/鼠聚合物，37℃20 min，PBS沖洗。加現(xiàn)配制的DAB顯色液，在顯微鏡下觀察，陽性顯色為棕黃色。自來水沖洗3～5遍，蘇木素復(fù)染，0.1%鹽酸分化，返藍(lán)。酒精梯度脫水，中性樹脂封片。

1.2.2 結(jié)果判斷 免疫組織化學(xué)的評分由兩位病理科醫(yī)師獨(dú)立完成。表達(dá)強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn)：0：無棕色顆粒；1：黃色；2：棕色；3：深棕色。染色面積評分標(biāo)準(zhǔn)：顯微鏡下每張切片隨機(jī)選取10個高倍視野（×400），計算每個視野中陽性細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比，最后計算10個視野陽性細(xì)胞的平均百分比，記為0～100%。評分標(biāo)準(zhǔn)：0：0～25%；1：26%～50%；2：51%～75%；3：76%～100%。按照細(xì)胞染色強(qiáng)度及面積相乘進(jìn)行評分（0～9分）。將最終評分劃分為3個等級：無表達(dá)0分，低/中表達(dá)1～4分，高表達(dá)5～9分。生存分析中將AQP1的評分劃分為兩組：無/低表達(dá)0～3分，高表達(dá)4～9分。

1.2.3 重組質(zhì)粒構(gòu)建 利用PCR分別獲取人源AQP1、mGFP片段。將mGFP插入慢病毒載體PCDH-CMVMCS-EF1-Puro的多克隆位點(diǎn)（MCS）Xba I和Not I酶切位點(diǎn)之間，即PCDH-CMV-MCS-EF1-Puro-mGFP（對照組），用EcoR I和BamH1雙酶切AQP1及重組慢病毒表達(dá)質(zhì)粒載體，將AQP1連入上述載體即可構(gòu)建出重組質(zhì)粒；轉(zhuǎn)化感受態(tài)宿主菌DH5α，涂布在含氨芐青霉素的LB平板上，37℃孵育過夜，挑取單菌落，提取質(zhì)粒后雙酶切鑒定。

1.2.4 細(xì)胞培養(yǎng) 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株LN229用含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液（含青霉素、鏈霉素各100 U/mL），5%CO2、37℃培養(yǎng)。

1.2.5 磷酸鈣法轉(zhuǎn)染HEK-293T細(xì)胞包裝病毒 10cm培養(yǎng)皿中接種HEK-293T細(xì)胞，孵育24 h，使細(xì)胞密度達(dá)到50%；將溶液（含包裝質(zhì)粒、重組質(zhì)粒及病毒轉(zhuǎn)染試劑）滴入10 cm培養(yǎng)皿中，37℃培養(yǎng)5 h，更換新鮮培養(yǎng)液。繼續(xù)培養(yǎng)48 h，吸出上清液，滴加病毒濃縮液，4℃過夜。次日，4℃，6 000 g，離心30 min。收集上清，重懸沉淀，-80℃保存。

1.2.6 慢病毒感染LN229細(xì)胞 6孔盤中接種LN229細(xì)胞，孵育24 h，使細(xì)胞密度達(dá)到30%。吸棄培養(yǎng)液，滴加10 mg/mL的Polybrene 0.6 μL，病毒濃縮液200 μL，培養(yǎng)液400 μL，37℃培養(yǎng)，次日更換培養(yǎng)液。48 h后，2 μg/mL的puro篩選，分別命名為vector/LN229、AQP1/LN229。

1.2.7 Western blot檢測蛋白量變化 將細(xì)胞在冰上裂解，提取蛋白后測定蛋白濃度，取相同蛋白含量的樣品，8%SDS-PAGE膠電泳分離，轉(zhuǎn)膜后，用5%脫脂奶粉封閉1 h，加一抗AQP1（1:500）4℃孵育，次日，TBST洗膜3次，用相應(yīng)的堿性磷酸酶（AP）偶聯(lián)的二抗（1:8 000）室溫孵育50 min，TBST洗膜4次，顯色。

1.2.8 MTT增殖實(shí)驗 接種24孔板：5×103個/孔，加培養(yǎng)基500 μL/孔，每組細(xì)胞設(shè)3個副孔，共種3塊板，置細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5%CO2）培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁后轉(zhuǎn)染，每隔48 h取1塊上述24孔板行MTT，共5次。MTT方法：吸棄原有培養(yǎng)基，加MTT 50 μL/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4 h；吸棄上清，加二甲基亞砜500 μL/孔；震蕩10 min后分于96孔板的3個孔中，每孔150 μL，于酶標(biāo)儀570 nm波長測定OD值，以1、3、5、7、9 d的結(jié)果繪制圖表。

1.2.9 Transwell侵襲實(shí)驗 將Matrigel膠均勻鋪于Transwell小室膜上，每孔加入細(xì)胞5×105個，將小室置于加有300 μL趨化因子EGF（10 ng/mL）的24孔板內(nèi)，37℃、5%CO2，孵育24 h后取出小室，小心擦掉上室細(xì)胞，PBS洗滌3次，4%多聚甲醛固定，吉姆薩染色，100倍顯微鏡下計數(shù)5個視野的細(xì)胞數(shù)，求出每個視野的平均穿膜細(xì)胞數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。AQP1在膠質(zhì)瘤患者年齡、腫瘤大小中的表達(dá)差異采用單因素方差分析，與其他臨床病理參數(shù)的關(guān)系使用Spearman相關(guān)分析，采用Kaplan-Meier法分析AQP1的表達(dá)與生存期的關(guān)系。兩組間均數(shù)比較用t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AQP1在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)

AQP1定位于膠質(zhì)瘤組織的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜（圖1），在低級別膠質(zhì)瘤中，AQP1主要表達(dá)在細(xì)胞膜，在高級別膠質(zhì)瘤中，AQP1在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜均有表達(dá)。AQP1表達(dá)水平隨著膠質(zhì)瘤惡性程度的增高而增加，并且與膠質(zhì)瘤病理級別呈正相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，表1）。AQP1表達(dá)與患者年齡、性別、術(shù)前水腫、腫瘤大小、腫瘤部位無相關(guān)性，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

圖1 AQP1在不同級別膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)Figure 1 Immunohistochemical staining of AQP1 in gliomas

表1 膠質(zhì)瘤組織中AQP1的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系Table 1 Relationship between AQP1 expression and clinicopathological variables in glioma

2.2 膠質(zhì)瘤中AQP1表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

選取103例完整隨訪資料進(jìn)行分析，單因素法分析顯示，病理分級、AQP1表達(dá)、年齡、腫瘤大小與患者的生存時間相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，表2），其中高表達(dá)AQP1患者的生存時間較低表達(dá)者明顯縮短（P<0.05，圖2）。

表2 膠質(zhì)瘤患者總生存的單因素及多因素分析Table 2 Univariate and multivariate analyses of overall survival of glioma patients

圖2 AQP1表達(dá)與膠質(zhì)瘤患者生存的關(guān)系Figure 2 AQP1 expression and overall survival analyses of glioma patients

圖3 Western blot檢測轉(zhuǎn)染不同慢病毒載體后AQP1在LN229細(xì)胞中的表達(dá)Figure 3 Western blot for detection of AQP1 expression in LN229 cells

在多因素分析中，病理分級、AQP1表達(dá)、年齡、腫瘤大小與患者的生存時間相關(guān)（P<0.05，表2），表明AQP1的表達(dá)可作為膠質(zhì)瘤患者潛在的獨(dú)立預(yù)后因子。

2.3 Western blot檢測蛋白的表達(dá)

選取膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株LN229作為細(xì)胞模型，由于該細(xì)胞株不表達(dá)AQP1，因此本研究組構(gòu)建AQP1過表達(dá)的慢病毒篩選出穩(wěn)定的AQP1過表達(dá)細(xì)胞株，空載體慢病毒作為對照。Western blot檢測過表達(dá)細(xì)胞株中AQP1蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果顯示LN229細(xì)胞未檢測到內(nèi)源性AQP1（分子量為28 kD）的表達(dá)，外源蛋白AQP1（AQP1與GFP融合表達(dá)后，分子量為54 kD）的表達(dá)顯著強(qiáng)于內(nèi)源性AQP1的表達(dá)。對照組vector/LN229未檢測到外源性AQP1的表達(dá)，AQP1/LN229組的外源性AQP1強(qiáng)表達(dá)（圖3），提示過表達(dá)AQP1的穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建成功。

2.4 過表達(dá)AQP1后對膠質(zhì)瘤細(xì)胞LN229增殖能力的影響

MTT實(shí)驗結(jié)果表明，從第3天開始AQP1過表達(dá)組細(xì)胞表現(xiàn)出較強(qiáng)的增殖趨勢；第7天時，AQP1過表達(dá)組和空載體對照組細(xì)胞增殖率分別為（22.87± 1.49）%和（19.09±1.44）%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P< 0.05，圖4）。

2.5 過表達(dá)AQP1對膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲能力的影響

Transwell侵襲實(shí)驗結(jié)果顯示，在以10 ng/mL的EGF作為趨化因子的條件下，AQP1/LN229組細(xì)胞穿透基質(zhì)膠和濾膜的平均數(shù)目明顯大于vector/LN229組細(xì)胞，分別為（312.00±24.29）個和（118.40±34.03）個，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），說明AQP1過表達(dá)后膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲能力增強(qiáng)（圖5）。

圖4 MTT實(shí)驗檢測兩組細(xì)胞增殖能力的差異Figure 4 Methyl thiazolyl tetrazolium(MTT)assay for detection of differ?ence in cell proliferation ability between the two groups

圖5 Transwell侵襲實(shí)驗檢測兩組細(xì)胞體外侵襲能力的差異Figure 5 Transwell assay for detection of difference in cell invasion abili?ty between the two groups

3 討論

腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見的原發(fā)性腫瘤，發(fā)病率占原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的30%［15］，其發(fā)生發(fā)展是一個復(fù)雜的多因素、多階段病理生理過程。本研究從臨床資料和體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗兩個層面驗證了AQP1在惡性膠質(zhì)瘤發(fā)展過程中的重要作用。AQP1是一種高度保守的膜結(jié)合蛋白，具有特異性跨膜運(yùn)輸水分子的功能，分子大小為28 kDa［16］。據(jù)報道AQP1與多種惡性腫瘤的發(fā)展及轉(zhuǎn)移相關(guān)，并且在乳腺癌和結(jié)腸癌中AQP1的高表達(dá)與患者預(yù)后差相關(guān)［3，9］。然而，AQP1與腦腫瘤關(guān)系的報道較少。有研究表明，在小樣本膠質(zhì)瘤組織中（各級別膠質(zhì)瘤5例），AQP1在高級別腫瘤中的表達(dá)高于低級別腫瘤［17-18］。然而，由于樣本量的局限性，AQP1與膠質(zhì)瘤病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系尚不明確。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測AQP1在135例人腦膠質(zhì)瘤組織的表達(dá)。結(jié)果顯示，隨著腫瘤級別的升高，AQP1表達(dá)增加。Kaplan-Meier生存曲線提示，AQP1低表達(dá)患者預(yù)后好于高表達(dá)者。膠質(zhì)瘤患者單因素生存分析顯示，AQP1表達(dá)、病理分級、年齡、腫瘤大小等因素與患者生存呈負(fù)相關(guān)。有研究證實(shí)，p53、異檸檬酸脫氫酶1（IDH1）、O6-甲基鳥嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（MGMT）及CD133與膠質(zhì)瘤惡性程度密切相關(guān)，然而鮮見報道AQP1與上述基因存在相關(guān)性。AQP4是AQP家族的另外一個成員，主要在膠質(zhì)瘤細(xì)胞膜上表達(dá)，AQP1則主要在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，兩者均于膠質(zhì)瘤的進(jìn)展過程中發(fā)揮重要作用［19］。本研究根據(jù)Cox回歸模型篩選膠質(zhì)瘤預(yù)后因素發(fā)現(xiàn)，AQP1的表達(dá)可作為膠質(zhì)瘤患者潛在的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。

惡性腫瘤的重要生物學(xué)特征是腫瘤細(xì)胞具有無限復(fù)制潛能。膠質(zhì)瘤的病理分級越高，惡性程度越強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞增殖遷移越快。因此，降低腫瘤細(xì)胞增殖率是治療腫瘤的有效途徑。本研究構(gòu)建了AQP1過表達(dá)LN229細(xì)胞系，通過MTT試驗，探討AQP1與膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的關(guān)系。結(jié)果表明，AQP1過表達(dá)組比空載體對照組細(xì)胞的增殖速度快，AQP1過表達(dá)細(xì)胞在MTT實(shí)驗第3天時就表現(xiàn)出更高的增殖率，第7天時AQP1過表達(dá)組與對照組細(xì)胞增殖率的差異增大。

遷移是腫瘤細(xì)胞浸潤和轉(zhuǎn)移的前提，其過程主要包括細(xì)胞前端伸出偽足，偽足與細(xì)胞外基質(zhì)形成新的細(xì)胞黏著，細(xì)胞體收縮，細(xì)胞尾端與周圍基質(zhì)解離［20］。有研究發(fā)現(xiàn)，敲除AQP1的內(nèi)皮細(xì)胞，結(jié)腸癌細(xì)胞遷移能力明顯降低［11，20］；干擾AQP1在黑素色瘤細(xì)胞中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞遷移能力明顯下降，并且AQP1與Lin7/β-catenin相互作用進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞的遷移能力［21］。推測AQP1可能通過與Lin7/β-catenin作用，一方面引起肌動蛋白重組，使質(zhì)膜形成突起并快速更新，另一方面介導(dǎo)水分子通過跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)快速進(jìn)入偽足，增加水的滲透性，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移［20］。本研究采用慢病毒載體感染膠質(zhì)瘤細(xì)胞，增加其AQP1的表達(dá)，結(jié)果證實(shí)過表達(dá)AQP1增強(qiáng)了膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖能力。

綜上所述，本研究在臨床資料和細(xì)胞水平兩個層面驗證了高表達(dá)AQP1能夠促進(jìn)惡性膠質(zhì)瘤的進(jìn)展過程，預(yù)示患者的不良預(yù)后，初步闡明AQP1在惡性膠質(zhì)瘤發(fā)展過程中的重要作用。本研究結(jié)果為進(jìn)一步探討AQP1對膠質(zhì)瘤的調(diào)控機(jī)制和研發(fā)阻斷AQP1藥物治療膠質(zhì)瘤提供了可靠的實(shí)驗依據(jù)，為惡性膠質(zhì)瘤的臨床治療提供了新的思路和靶點(diǎn)。

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（2015-03-30收稿）

（2015-05-07修回）

（編輯：邢穎）

Aquaporin1 expression in glioma patients and its potential function in glioma progression

Jia HE1,Wenliang LI1,Feng GU2,Yongjie MA3
1Department of Intracranial Tumor,2Breast Pathology Laboratory,3Biology Laboratory of Tumor Cell,Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital,National Clinical Research Center for Cancer,Tianjin Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy,Tianjin 300060,China

Yongjie MA;E-mail:yongjiemagu@aliyun.com

Objective:To explore the expression of aquaporin1(AQP1)in human glioma tissues and its relationship with the clinicopathological parameters and prognosis of this tumor.This study also observed the function of AQP1 in the proliferation and invasion of LN229 glioblastoma cells.Methods:The expression of AQP1 in 135 cases of glioma was detected by immunohistochemical method,and the correlation between AQP1 and pathological features of glioma was analyzed.The relationship of AQP1 with survival was also investigated using 103 specimens with complete clinical data.AQP1 was successfully transfected into LN229 cells with lentiviral vector,and the expression ofAQP1 protein was tested by Western blot.Cell proliferation was detected by using methyl thiazolyl tetrazolium assay,whereas cell invasion was determined by Transwell assay.Results:The expression of AQP1 was positively correlated with pathological grading.High AQP1 expression was associated with poor prognosis(P<0.05).Moreover,the overexpression of AQP1 can significantly increase the proliferation and invasion of LN229 cells(P<0.05).Conclusion:AQP1 is closely associated with the progression of glioma.Upregulation of the AQP1 expression promoted the proliferation and metastasis of glioma cells.These findings indicated thatAQP1 can function as a therapeutic target for glioma in future research.

glioma,aquaporin1,proliferation,invasion,survival

10.3969/j.issn.1000-8179.20150336

①天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院顱腦腫瘤科，國家腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津市腫瘤防治重點(diǎn)實(shí)驗室（天津市300060）；②乳腺病理研究室；

③腫瘤細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗室

馬勇杰 yongjiemagu@aliyun.com

何佳 專業(yè)方向為顱腦腫瘤尤其膠質(zhì)瘤的基礎(chǔ)與臨床研究。

E-mail：stephnia2010@163.com