高密度脂蛋白組分中血漿淀粉樣蛋白A與載脂蛋白A-Ⅰ比值在冠心病診斷中的價值*

趙慧，劉紅，王冬雪，閆麗榮，柴琳，李彥，江岳鑫，華潞，管曉媛，熊筱偉，黃一玲，李一石

高密度脂蛋白組分中血漿淀粉樣蛋白A與載脂蛋白A-Ⅰ比值在冠心病診斷中的價值*

趙慧，劉紅，王冬雪，閆麗榮，柴琳，李彥，江岳鑫，華潞，管曉媛，熊筱偉，黃一玲，李一石

目的：探討高密度脂蛋白（HDL）組分中血漿淀粉樣蛋白A（SAA）與載脂蛋白A-Ⅰ（apoA-Ⅰ）比值在冠心病診斷中的價值。

方法：入選我院冠狀動脈造影患者152例，按冠狀動脈狹窄程度分為冠心病組77例，對照組75例。密度梯度超速離心法分離提取血漿HDL，酶聯免疫吸附法分別檢測HDL及血漿中SAA與apoA-Ⅰ的含量。

結果：與對照組相比，冠心病組HDL組分中SAA（HDL-SAA）顯著升高（P＜0.001），HDL組分中apoA-Ⅰ（HDL-apoA-Ⅰ） 顯著降低（P＜0.001）。多因素logistic回歸分析顯示HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值與冠心病風險獨立相關（ 比值比：9.521, 95%可信區間：3.345～27.100，P＜0.001）。受試者工作特征曲線分析顯示HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值具有中等程度診斷冠心病的能力（曲線下面積：0.712，95%可信區間：0.632～0.793，P＜0.001），最佳診斷臨界點為3.27。血漿中SAA/apoA-Ⅰ比值與HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值呈顯著正相關（r=0.857，P＜0.001），診斷冠心病的能力相似（曲線下面積：0.676，95%可信區間：0.591～0.761，P＜0.001），診斷的最佳臨界點為8.3。

結論：HDL組分中SAA/apoA-Ⅰ比值與冠心病風險獨立相關，可能成為冠心病診斷的線索。

冠心病；血漿淀粉樣蛋白A；載脂蛋白A-Ⅰ；高密度脂蛋白；受試者工作特征曲線

Methods: A total of 152 patients who received coronary angiography in our hospital were studied. According to the degree of coronary stenosis, the patients were divided into 2 groups. CAD group, n=77 and Control group, n=75. HDL was isolated by density gradient ultracentrifugation and the levels of SAA and apoA-I both in HDL and plasma were examined by ELISA.

Results: Compared with Control group, CAD group had increased ratio of HDL-SAA/HDL-apoA-I, P＜0.001. Multivariate logistic regression analysis indicated that the ratio of HDL-SAA/HDL-apoA-I was independently related to the risk of CAD (OR=9.521, 95% CI 3.345-27.100, P＜0.001). Receiver operating characteristic curve (ROC) analysis

presented that the ratio of HDL-SAA/HDL-apoA-I had the medium value for CAD diagnosis (AUC=0.712, 95% CI 0.632-0.793, P＜0.001), the best cut-off value was at 3.27. The plasma ratio of SAA/apoA-I was positively related to the ratio of HDL-SAA/HDL-apoA-I (r=0.857, P＜0.001), the ratio of SAA/apoA-I had the similar value for CAD diagnosis (AUC=0.676, 95% CI 0.591-0.761, P＜0.001), the best cut-off value was at 8.3.

Conclusion: The ratio of SAA/apoA-I in HDL is positively related to the risk of CAD, it might be become a potential diagnostic marker in patients with CAD.

(Chinese Circulation Journal, 2015,30:211.)

近年來研究表明：與單純檢測血漿高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平相比，針對高密度脂蛋白（HDL）功能的檢測可為心血管疾病風險的評估提供更有價值的依據[1]。HDL生理功能的發揮與其組成成分密切相關。冠心病患者血漿HDL組分的變化可引起其功能的改變[2，3]，檢測血漿HDL組分相關蛋白可能成為冠心病診斷新的切入點。載脂蛋白A-Ⅰ（apoA-Ⅰ）是HDL的主要組分，通過促進膽固醇外流、抗炎癥及抗氧化等作用抑制動脈粥樣硬化[4，5]。血漿淀粉樣蛋白A（SAA）是一種急性時相蛋白，炎癥時可取代HDL中的apoA-Ⅰ，使HDL抗動脈粥樣硬化的能力減弱甚至喪失[6-8]。HDL中apoA-Ⅰ與SAA的水平在一定程度上反映了HDL的功能。故本研究將以HDL組分中SAA（HDLSAA）/HDL組分中apoA-Ⅰ（HDL-apoA-Ⅰ）比值作為評價指標，探討該指標在冠心病診斷中的應用價值。

1 資料與方法

研究對象：選取2012-05至2012-07在我院行冠狀動脈造影的患者152例，其中冠心病組77例（經冠狀動脈造影證實存在至少一支主要冠狀動脈狹窄≥50%者），對照組75例（經冠狀動脈造影證實無冠狀動脈明顯狹窄者）。排除標準：①近期曾有創傷、出血、手術史；②心力衰竭、急性心肌梗死、血流動力學不穩定需要血管活性藥物或機械輔助循環者；③瓣膜性心臟病，心肌病，Ⅲ度房室傳導阻滯，心房顫動、難以控制的血壓升高等嚴重心血管疾病者；④患有明確的免疫性疾病、炎癥性疾病、急慢性感染、貧血（血紅蛋白：女性＜110 g/L，男性＜120 g/L）、肝腎功能不全、甲狀腺疾病、腫瘤性疾病者，及已服用他汀類、貝特類調脂藥物或其他有證據表明能夠影響機體炎癥狀態及血脂水平的藥物者。高血壓定義為收縮壓≥140 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）和（或）舒張壓≥90 mmHg，或正在服用降壓藥物。糖尿病診斷標準采用美國糖尿病協會標準，即：空腹血糖≥7.0 mmol/L，或葡萄糖耐量試驗2 h血糖≥11.1 mmol/L，或正在服用降糖藥或注射胰島素。本研究經阜外醫院倫理委員會批準，所有受試者均簽署知情同意書。

研究方法：采集患者空腹靜脈血，立即于4℃，3000 rpm離心10 min，提取上層新鮮血漿。應用密度梯度超速離心法分離提取血漿HDL[9]。HDL純度采用SDS-PAGE檢測，蛋白量采用二喹啉甲酸（BCA）法檢測。應用酶聯免疫吸附法（ELISA ）檢測血漿和HDL樣品中的SAA及apoA-Ⅰ水平。血脂、高敏C反應蛋白（hs-CRP）等生化指標采用常規實驗室方法檢測。

統計學分析：用SPSS17.0軟件進行分析。Kolmogorov-Smirnov法對數值型變量進行正態性檢驗。正態分布的數值型變量以均值±標準差（x±s）表示，偏態分布的數值以中位數（P25，P75）表示。分類變量以頻數或百分數表示。兩組間比較：正態分布的數值型變量采用獨立樣本t檢驗，偏態分布的數值型變量進行log轉換為正態分布后采用獨立樣本t檢驗。分類變量組間比較采用卡方檢驗和Fisher精確檢驗。單因素/多因素logistic回歸分析冠心病危險因素。受試者工作特征曲線（ROC曲線）評價指標診斷冠心病的價值。以約登指數最大決定最佳臨界點。ROC曲線下面積比較采用非參數Z檢驗。變量之間的相關性分析采用Pearson或Spearman相關性分析。多元線性回歸分析HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值的影響因素。以上均以雙側P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組基線資料比較

冠心病組吸煙史、合并高血壓病的比率均顯著高于對照組（P均＜0.05）。冠心病組血漿hs-CRP水平、SAA水平以及HDL-SAA水平比對照組均顯著升高（P＜0.001），而血漿HDL-C水平（P＜0.05）、apoA-Ⅰ水平（P＜0.001）及HDL-apoA-Ⅰ水平（P＜0.001）比對照組均顯著降低。其他參數兩組間差異均無統計學意義（P均＞0.05）。表1

2.2 HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值與冠心病的相關性分析

以冠心病作為因變量，其他傳統心血管危險因素，如性別、年齡、體重指數、糖尿病、高血壓病、吸煙史、hs-CRP、HDL-C、低密度脂蛋白膽固醇、總膽固醇、甘油三酯以及HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值分別作為自變量，逐一進行單因素logistic回歸分析，結果顯示吸煙史、高血壓病、HDL-C、hs-CRP以及HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值均與冠心病的發生風險相關（P＜0.05）。將這些可能的危險因素進一步帶入多因素logistic回歸模型中，分析顯示：在校正了其他傳統危險因素后，HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值仍與冠心病的發生相關（P＜0.001）。表2

表1 兩組基線資料比較

注：與對照組比*P＜0.05**P＜0.001。△為偏態分布以中位數(P25，P75)表示。HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇 LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇 hs-CRP：高敏C反應蛋白 SAA：血漿淀粉樣蛋白A apoA-Ⅰ：載脂蛋白A-Ⅰ HDL-SAA：HDL組分中SAA HDL- apoA-Ⅰ: HDL組分中apo A-Ⅰ

?

2.3 HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值在冠心病診斷中的價值

以冠狀動脈造影確診的冠心病為狀態變量，以HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值作為檢驗變量，繪制ROC曲線（圖1）。HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值診斷冠心病的曲線下面積為0.712 （95%可信區間：0.632～0.793）。利用約登指數確定診斷最佳臨界點為3.27，敏感度為0.44，特異度為0.89。

圖1 高密度脂蛋白組分中血漿淀粉樣蛋白A/載脂蛋白A-Ⅰ比值與血漿中血漿淀粉樣蛋白A/載脂蛋白A-Ⅰ比值診斷冠心病的受試者工作特征曲線

2.4 血漿中SAA/apoA-Ⅰ比值與HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值的相關性分析

Spearman相關性分析顯示血漿中SAA/apoA-Ⅰ比值與HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值具有良好的相關性（r=0.857，P＜0.001，圖2）。為此我們進一步繪制ROC曲線分析血漿中SAA/apoA-Ⅰ比值在冠心病診斷中的價值（圖1）。曲線下面積為0.676（95%

可信區間：0.591～0.761）。非參數Z檢驗分析比較兩指標診斷冠心病的價值差異，證實血漿中SAA/ apoA-Ⅰ比值與HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值在冠心病的診斷中價值相似（Z=0.6059，P=0.5445）。利用約登指數確定診斷的最佳臨界點為8.3，敏感度為0.61，特異度為0.68。

圖2 高密度脂蛋白組分中血漿淀粉樣蛋白A/載脂蛋白A-Ⅰ比值與血漿中血漿淀粉樣蛋白A/載脂蛋白A-Ⅰ比值Spearman相關性

2.5 影響HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值的因素分析

多元線性回歸分析結果顯示：HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值與血漿hs-CRP水平相關，偏相關系數為0.552（P＜0.001）。其他冠心病危險因素，如性別、年齡、體重指數、吸煙史、高血壓、糖尿病及血脂等指標均未進入回歸方程。

3 討論

本研究發現：冠心病組與對照組相比，HDLSAA顯著升高，HDL-apoA-Ⅰ顯著降低，升高的HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值與冠心病的發生風險獨立相關，且在冠心病的診斷中具有一定的價值。血漿中SAA/apoA-Ⅰ比值與HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值的相關性良好，診斷冠心病的能力相似，雖然靈敏度較高，但特異度不及HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值，提示血漿中SAA/apoA-Ⅰ比值可部分替代HDLSAA/HDL-apoA-Ⅰ比值用于冠心病的臨床診斷。

長期以來，HDL被視為心血管保護性物質，臨床上以血漿HDL-C水平作為衡量心血管事件發生風險的指標。然而，最近的研究卻發現高HDL-C水平者心肌梗死的發生率并未降低[10]，而升高血漿HDL-C水平的藥物也并未顯著降低患者的心血管死亡風險[11]。這些事實均說明：單純關注血漿HDL-C水平不能夠全面地反映HDL的功能。由于HDL功能與其組分關系密切，因此檢測HDL中某些組分的含量可能成為評估HDL功能的一種手段，進而有助于預測心血管疾病的發生風險。本研究通過比較冠心病患者與非冠心病對照者血漿HDL組分，發現：冠心病患者HDL-SAA水平顯著升高，并伴有HDL-apoA-Ⅰ水平的明顯下降，導致了HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值的升高。升高的HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值在校正了其他傳統心血管危險因素后，仍與冠心病的發生風險顯著相關，這表明HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值是冠心病的獨立危險因素，而HDL-C水平與冠心病發病間的關系無統計學意義。進一步ROC曲線分析結果顯示：該比值在冠心病診斷中具有很高的特異度和中等水平的靈敏度。當HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值大于3.27時，該指標能夠較為準確地鑒別出冠心病患者。因此，在預測冠心病風險方面，HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值可能是比單純血漿HDL-C水平更優越的指標。

HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值的升高是冠心病患者血漿HDL組分變化的結果。SAA是肝臟產生的一種急性時相蛋白，因其具有與apoA-Ⅰ相似的α螺旋結構，故能夠取代HDL中的apoA-Ⅰ，甚至成為HDL中主要的載脂蛋白樣物質[12]。體外研究表明SAA與HDL的結合呈劑量依賴性[13]。因此，我們推測：冠心病患者體內存在的慢性炎癥反應通過刺激SAA的產生增加，使血漿中SAA水平升高，而過多的SAA與apoA-Ⅰ競爭，導致了HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值的增加。多元線性回歸分析顯示：在全部研究對象中，HDL-SAA/ HDL-apoA-Ⅰ比值與血漿hs-CRP水平顯著正相關，也充分說明了冠心病時的炎癥激活與患者血漿HDL組分的這種變化有關。

apoA-Ⅰ是組成HDL的主要載脂蛋白，研究證實其與HDL促進膽固醇逆轉運、抑制低密度脂蛋白氧化以及體內的炎癥反應有關[14-17]。然而，當HDL中SAA的含量增加時，HDL的相關保護功能顯著降低[7-9]。目前，越來越多的研究發現：冠心病患者血漿及HDL中的SAA含量升高，而apoA-Ⅰ含量下降[18]。但HDL組分的這種改變與冠

心病的關系尚無定論，上述指標在冠心病診斷中的價值也不清楚。這可能與單一組分水平未能全面體現HDL的功能狀態有關。本研究在初步證實了冠心病患者HDL-SAA水平顯著升高，并伴有HDL-apoA-Ⅰ水平明顯下降的同時，首次評估HDL-SAA/ HDL-apoA-Ⅰ比值與冠心病發病風險的關系，并證實該比值與冠心病的發生風險獨立相關，且可以為冠心病的診斷提供較為特異的證據支持。這表明：與單一組分水平測定相比，HDL-SAA與HDL-apoA-Ⅰ的相對含量變化能夠更充分地反映HDL的功能狀態。冠心病患者HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值的顯著升高在一定程度上說明疾病時HDL向促動脈粥樣硬化功能轉變。

與檢測HDL組分水平相比，直接檢測血漿中SAA與apoA-Ⅰ的含量在應用上更為方便。因此，本研究同時對血漿中的SAA/apoA-Ⅰ比值的價值進行了評估。結果表明：與HDL組分變化相似，冠心病患者血漿中SAA的水平升高， apoA-Ⅰ的水平降低，二者比值顯著升高。血漿中SAA/apoA-Ⅰ比值與HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值之間具有良好的相關性，冠心病診斷的ROC曲線下面積為0.676。經過統計學分析比較證實血漿中SAA/apoA-Ⅰ比值與HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值的診斷價值無顯著差異。但血漿中SAA/apoA-Ⅰ比值的靈敏度高于HDLSAA/HDL-apoA-Ⅰ比值，而特異度有所降低。由此提示：血漿中SAA/apoA-Ⅰ比值能夠為冠心病篩查提供一定的線索。

結論：與非冠心病對照者相比，冠心病患者HDL-SAA/HDL-apoA-Ⅰ比值與血漿中SAA/apoA-Ⅰ比值水平均顯著升高。升高的比值與冠心病發生風險獨立相關，能夠為冠心病診斷提供一定的線索。

[1] Rosenson RS, Brewer HB Jr, Ansell B, et al. Translation of highdensity lipoprotein function into clinical practice: Current prospects and future challenges. Circulation, 2013, 128: 1256-1267.

[2] Riwanto M, Rohrer L, Roschitzki B, et al. Altered activation of endothelial anti- and proapoptotic pathways by high-density lipoprotein from patients with coronary artery disease: Role of highdensity lipoprotein-proteome remodeling. Circulation, 2013, 127: 891-904.

[3] 徐瑞霞, 李莎, 郭遠林. 高密度脂蛋白顆粒與穩定型冠心病的相關性研究. 中國循環雜志, 2013, 28: 352-355.

[4] Fisher EA, Feig JE, Hewing B, et al. High-density lipoprotein function, dysfunction, and reverse cholesterol transport. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2012, 32: 2813-2820.

[5] Shao B. Site-specific oxidation of apolipoprotein a-i impairs cholesterol export by abca1, a key cardioprotective function of hdl. Biochim Biophys Acta, 2012, 1821: 490-501.

[6] Weichhart T, Kopecky C, Kubicek M, et al. Serum amyloid a in uremic hdl promotes inflammation. J Am Soc Nephrol, 2012, 23: 934-947.

[7] Tolle M, Huang T, Schuchardt M, et al. High-density lipoprotein loses its anti-inflammatory capacity by accumulation of pro-inflammatoryserum amyloid a. Cardiovas Res, 2012, 94: 154-162.

[8] Tsun JG, Shiu SW, Wong Y, et al. Impact of serum amyloid a on cellular cholesterol efflux to serum in type 2 diabetes mellitus. Atherosclerosis, 2013, 231: 405-410.

[9] Havel RJ, Eder HA, Bragdon JH. The distribution and chemical composition of ultracentrifugally separated lipoproteins in human serum. J Clin Invest, 1955, 34: 1345-1353.

[10] Voight BF, Peloso GM, Orho-Melander M, et al. Plasma HDL cholesterol and risk of myocardial infarction: A mendelian randomisation study. Lancet, 2012, 380: 572-580.

[11] Hewing B, Moore KJ, Fisher EA. HDL and cardiovascular risk: Time to call the plumber? Circ Res, 2012, 111: 1117-1120.

[12] King VL, Thompson J, Tannock LR. Serum amyloid a in atherosclerosis. Curr Opin Lipidol, 2011, 22: 302-307.

[13] Miida T, Yamada T, Seino U, et al. Serum amyloid a （saa）-induced remodeling of csf-hdl. Biochim Biophys Acta, 2006, 1761: 424-433.

[14] Phillips MC. Molecular mechanisms of cellular cholesterol efflux. J Biol Chem, 2014, 289: 24020-24029.

[15] Navab M, Reddy ST, Van Lenten BJ, et al. High-density lipoprotein and 4f peptide reduce systemic inflammation by modulating intestinal oxidized lipid metabolism: Novel hypotheses and review of literature. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2012, 32: 2553-2560.

[16] Wu BJ, Ong KL, Shrestha S, et al. Inhibition of arthritis in the lewis rat by apolipoprotein a-i and reconstituted high-density lipoproteins. Arterioscler Throm Vasc Biol, 2014, 34: 543-551.

[17] 鐘巧青, 趙水平, 王星. 高密度脂蛋白對炎癥狀態下脂肪細胞膽固醇流出的影響. 中國循環雜志, 2012, 27: 145-148.

[18] Yan LR, Wang DX, Liu H, et al. A pro-atherogenic hdl profile in coronary heart disease patients: An itraq labelling-based proteomic approach. PloS one, 2014, 9: e98368.

The Diagnostic Value of HDL Associated Serum Amyloid A to Apolipoprotein A-I Ratio in Patients With Coronary Artery Disease

ZHAO Hui, LIU Hong, WANG Dong-xue, YAN Li-rong, CHAI Lin, LI Yan, JIANG Yue-xin, HUA Lu, GUAN Xiao-yuan, XIONG Xiao-wei, HUANG Yi-ling, LI Yi-shi.
Key Laboratory of Clinical Trial Research in Cardiovascular Drugs, Ministry of Health, Cardiovascular Institute and Fu Wai Hospital, CAMS and PUMC, Beijing (100037), China

Objective: To investigate the diagnostic value of high-density lipoprotein (HDL) associated serum amyloid A (SAA) to apolipoprotein A-I (apoA-I) ratio (SAA/apoA-I) in patients with coronary artery disease (CAD).

Coronary artery disease; Serum amyloid A; Apolipoprotein A-I; High-density lipoprotein; Receiver operating characteristic curve

2014-10-21）

（編輯：王寶茹）

“重大新藥創制”科技重大專項—《心血管創新藥物臨床研究技術平臺建設》（2012ZX09303-008-001）；國家臨床重點專科建設項目—《衛生部重點實驗室項目》

100037 北京市，北京協和醫學院 中國醫學科學院 國家心血管病中心 阜外心血管病醫院 衛生部心血管藥物臨床研究重點實驗室

趙慧 博士研究生 主要從事內科學、臨床藥理方向研究 Email:13521275315@163.com 通訊作者：李一石 Email：lchyl_fuwai@sina.com

R541

A

1000-3614（2015）03-0211-05

10.3969/j.issn.1000-3614.2015.03.004