云南藥用植物鼓槌石斛化學成分研究

陳亞萍，王婭娟, 2, 李玉鵬*, 張 君， 翁瑞旋, 楊曉琳

(1. 昆明醫科大學 藥學院暨云南省天然藥物藥理重點實驗室,云南 昆明 650500;2. 昆明醫科大學第一附屬醫院 藥劑科,云南 昆明 650031)

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云南藥用植物鼓槌石斛化學成分研究

陳亞萍1，王婭娟1, 2, 李玉鵬1*, 張 君1， 翁瑞旋1, 楊曉琳1

(1. 昆明醫科大學 藥學院暨云南省天然藥物藥理重點實驗室,云南 昆明 650500;2. 昆明醫科大學第一附屬醫院 藥劑科,云南 昆明 650031)

目的：對云南鼓槌石斛化學成分進行研究,發現活性化合物。方法：采用95%乙醇提取活性化合物，經硅膠柱層析和Sephadex LH-20柱層析進行分離純化后，以波譜分析(核磁共振氫譜、碳譜和質譜)鑒定其結構。結果：從石油醚萃取部分分離得到7個化合物，結構確定為: stigmasterol (1), β-sitosterol (2), 3,4-dihydroxy-benzoic acid (3), stigmast-4-en-3-one (4), ergosterol (5), moscatin(6) , daucosterol (7)。結論：化合物4為首次從本植物中分離得到。

鼓槌石斛；藥用植物；化學成分

石斛是蘭科(Orchidaceae)石斛屬(Dendrobium Sw.)多種植物的新鮮或干燥莖的統稱。我國76種石斛屬植物中有30多種作藥用[1]。在《神農本草經》中, 石斛被列為上品, 具有滋陰清熱、生津益胃、潤肺止咳、明目強身等功效[2]。國內學者曾從鼓槌石斛中得到聯芐、菲類、芴酮等類型的化學成分[3]。為合理開發和應用該植物的藥用價值,對鼓槌石斛化學成分進行研究,以找尋其活性先導化合物。

1 儀器與材料

Bruker DRX-500核磁共振儀,TMS為內標,化學位移(δ)值的單位用ppm, Varian Mat-711質譜儀,青島海洋化工廠生產硅膠, Sephadex LH-20: 20～80μm (Pharmacia Fine Chemical Co., Ltd.), 高效薄層層析硅膠G板(煙臺化工研究院), 10%硫酸乙醇溶液為顯色劑，溶劑為工業純, 重蒸, 其它試劑為化學純或分析純。實驗樣品采自云南思茅, 經昆明醫科大學藥學院暨云南省天然藥物藥理重點實驗室劉毅教授鑒定為鼓槌石斛。

2 化合物提取分離

鼓槌石斛全草4.11kg，用95%乙醇浸泡5次，每次2天，浸泡液過濾、減壓蒸干，用500mL蒸餾水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，制得石油醚萃取物 27.2g、乙酸乙酯萃取物192.4g。鼓槌石斛石油醚萃取物, 用硅膠柱層析分離，依次用石油醚-乙酸乙酯(20∶1,10∶1,5∶1,1∶1，0∶1)洗脫，以250mL為單位接收洗脫液，根據TLC檢測合并，得到3個部分, 其中第二部分經硅膠柱層析分離，Sephadex LH-20柱層析進行分離純化得到化合物1～4；第三部分經硅膠柱層析分離，Sephadex LH-20柱層析進行分離純化得到化合物5～7。

3 化合物結構鑒定

3.1 化合物1：stigmasterol

白色針狀晶體，MF:C29H48O, MW: 412;1HNMR (CDCl3, 500 MHz): δ 5.21 (1H, dd, J= 8.5, 17.2, H-22), 5.06 (1H, dd, J= 8.5, 17.2, H-23), 0.86 (3H, d, J= 1.5, H-29), 0.82 (3H, d, J= 4.3, H-27), 0.81 (3H, s, H-26), 0.82(3H, s, 18-CH3)。該化合物極性較小，易溶于氯仿，15%H2SO4乙醇顯色為紫紅色，與豆甾醇標準品進行TLC對照，在多種溶劑系統中Rf值均相同。且1HNMR,13CNMR數據與豆甾醇[4]基本一致，確定其為豆甾醇。

3.2 化合物 2： β-sitosterol

白色針晶體,MF:C29H50O,MW:414;1H-NMR (CDCl3,500 MHz): δ 5.32 (1H, d, J= 5.0, H-6), 3.50 (1H, m, H-3), 0.98 (3H, s, H-19), 0.92 (3H, d, H-21), 0.85 (3H, d, H-29), 0.82 (3H, t, H-27), 0.80 (3H, d, H-26), 0.70 (3H, s, H-18)。該化合物極性較小，易溶于氯仿,10%H2SO4乙醇顯色為紫紅色，與標準品進行TLC對照，在多種溶劑系統中Rf值均相同。且1HNMR,13CNMR數據與β-谷甾醇[5]基本一致，確定其為β-谷甾醇。

3.3 化合物3：3,4-dihydroxy-benzoic acid

白色針狀晶體,MF:C7H6O4,MW:154;1HNMR (CDCl3,500 MHz):δ 7.50(1H, d, J= 2.0, H-2), 7.45 (1H, dd, J= 8.0, 2.0, H-6), 6.90 (1H, d, J= 8.5, H-5);13C NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 170.5 (-COOH ), 150.2 (C-4), 146.0 (C-3), 124.0 (C-6), 122.0 (C-l), 117.5 (C-2 ), 115.2 (C-5)。氫譜數據和碳譜數據與文獻報道基本一致，確定該化合物的結構為3,4-dihydroxy-benzoic acid[6].

3.4 化合物4 ：stigmast-4-en-3-one

白色粉末, MF: C29H48O,MW:412;1HNMR (CDCl3,500 MHz):δ 5.50 (1H, s, H-4),2.32 (2H, m, H-2), 1.15 (3H, s, H-19), 0.89 (3H, d, J= 6.2, H-21), 0.81 (3H, t, J= 6.5, H-29), 0.80(3H, d, J= 6.5, H-26), 0.78 (3H, d, J= 6.5, H-27), 0.67 (3H, s, H-18)。該化合物極性較小，易溶于氯仿,與標準品進行TLC對照，在多種溶劑系統中Rf值均相同。且1HNMR,13CNMR數據與stigmast-4-en-3-one[7]基本一致，確定其為stigmast-4-en-3-one.

3.5 化合物5 ：ergosterol

淺黃色晶體, EI-MS (rel. int.) m/z: 396([M]+, 100), 378([M-H20]+, 7), 363 (79), 337 (43), 253 (38), 157 (37), 143 (46), 109 (29), 95 (32), 81 (56), 69 (84),55 (87)。該化合物極性較小，易溶于氯仿。10%H2SO4乙醇顯色為紫紅色，與標準品進行TLC對照，在多種溶劑系統中Rf值均相同。且1HNMR,13CNMR數據與ergosterol[8]基本一致，確定其為ergosterol.

3.6 化合物6 ：moscatin

白色晶體, MF:C15H12O3,MW:240;EIMS m/z (%):240(M+,100),225(49),197(45),139(18);1HNMR[(CD3)2CO,500MHz]: 9.50 (1H,s,5-OH),9.05(1H,s,2-OH),7.61(1H,d,J= 8.8,H-9),7.50(1H,d,J= 8.8,H-10),7.43(1H,dd,J=7.6, 7.6H-7), 7.40 (1H,dd,J= 7.6,2.0,H-6),7.13 (1H,dd,J=7.6,2.0,H-8),7.05(1H,d,J=2.4,H-1),7.00(1H,d,J= 2.4,H-3),4.15(3H,s,4-OMe)。氫譜數據與文獻報道基本一致，確定該化合物的結構為moscatin[9]。

3.7 化合物7 ：daucosterol

白色顆粒。MF: C35H60O6, MW:576; EIMS m/z(%): 414(苷元，6)，396 (100), 381 (7), 329 (2), 303 (5), 231 (3), 187 (3), 161 (15), 145 (21), 133 (12), 119 (10), 107 (17), 95 (22)；1HNMR (C5D5N, 500 MHz): δ 5.35 (1H, m, H-6), 5.09 (1H, J= 7.7, H-1), 4.58 (1H, d, J= 9.8), 4.43 (1H, m), 4.33 (2H, m), 4.10 (1H, m), 4.03 (2H, m)。該化合物難溶于氯仿、丙酮、甲醇，易溶于吡啶, 10%的硫酸乙醇顯色為紫紅色，與胡蘿卜苷標準品進行TLC對照,在多種溶劑系統中Rf值均相同。且1HNMR、13CNMR與胡蘿卜苷基本一致，所以確定其為胡蘿卜苷[10].

[1] 李滿飛,徐國鈞,徐珞珊,等.商品石斛的調查及鑒定(Ⅱ) [J].中草藥, 1991, 22(4):173-180.

[2] 南京中醫藥大學.中藥大辭典 [M].上海：上海科學技術出版社, 1985, 586-589.

[3] 張光濃, 畢志明, 王崢濤, 等.石斛屬植物化學成分研究進展[J].中草藥, 2003, 34(6): 5-8.

[4] 李玉鵬, 蔣金和, 劉瑩, 等.金釵石斛化學成分的研究[J].時珍國醫國藥,2010,21(1): 39-40.

[5] 喬竹穩，姚旭穎，單喜臣，等.馬齒莧化學成分研究 [J].齊齊哈爾大學學報, 2012, 28(1): 58-60.

[6] JIA LING GENG, CHANG AN GENG, JI JUN CHENG. Chemical constituents of Swertis cincta [J].Nat Prod Res Dev, 2012, 24: 42-46.

[7] CHANG S J, LIN T H, CHEN C C. Constituents from the stems of Dendrobium clavatum var. aurantiacum [J].J Chin Med, 2001, 12(3): 211-218.

[8] WU S H, CHEN Y W, Li Z Y, et al. Studies on the metabolites of Endophytic fungus phomopsis sp[J].Nat Prod Res Dev, 2008, 20:1014-1015.

[9] MAJUMDER P L, SEN R C. Structure of moscatin-a new phenanthrene derivative from the orchid Dendrobium moscatum [J]. Indian Journal of Chemistry,1987,26 B (1):18-20.

[10] CHENG W X, CHENG H Y, ZHANG Y P, et al. Chemical constituents of Vitex quinata [J].Nat Prod Res Dev, 2007, 19: 244-246.

(責任編輯：魏 曉)

Research of Chemical Constituents from Dendrobium Chrysotoxum

Chen Yaping1, Wang Yajuan1,2, Li Yupeng1*, Zhang Jun1, Weng Ruixuan1, Yang Xiaolin1

(1. School of Pharmaceutical Science &Yunnan Key Laboratory of Pharmacology for Natural Products,Kunming Medical University,Kunming 650500, China; 2. Pharmacy Department,the First Affiliated Hospital of Kunming Medical University, Kunming 650031, China)

Objective:To study the chemical constituents from Dendrobium chrysotoxum and find its bioactive compounds. Methods:The compounds were extracted by 95% alcohol and isolated by column chromatography on silica gel and Sephadex LH-20. Their structures were identified by spectroscopic analysis (1H NMR, 13CNMR and EIMS). Results:Seven compouds were obtained and identified as stigmasterol (1), β-sitosterol (2), 3,4-dihydroxy-benzoic acid (3), stigmast-4-en-3-one (4), ergosterol (5), moscatin(6) , daucosterol (7). Conclusion:Compounds 3 ,4 was originally isolated from this medicinal plant.

Dendrobium chrysotoxum; Medicinal Plant; Chemical Constituents

2014-10-28

國家自然科學基金項目(21202066); 云南省應用基礎研究基金項目(2012FB156)

陳亞萍(1981-)，女，昆明醫科大學實驗師，研究方向為天然藥物化學及藥物代謝動力學。

李玉鵬 (1978-), 男, 昆明醫科大學副教授,研究方向為天然藥物化學和藥理學。E-mail：liyupeng26@126.com

R284

A

1673-2197(2015)05-0014-02

10.11954/ytctyy.201505007