雅安藏茶和低聚木糖復配物潤腸通便作用

李 解，陳雪皎，郭承義，張 維，晏秀梅，郭 湘，許靖逸,3,*

（1.四川農業大學園藝學院，四川 雅安 625014；2.四川省雅安市義興藏茶有限公司，四川 雅安 625014；3.四川省茶業科學與工程重點實驗室，四川 雅安 625014）

雅安藏茶和低聚木糖復配物潤腸通便作用

李 解1，陳雪皎1，郭承義2，張 維1，晏秀梅1，郭 湘1，許靖逸1,3,*

（1.四川農業大學園藝學院，四川 雅安 625014；2.四川省雅安市義興藏茶有限公司，四川 雅安 625014；3.四川省茶業科學與工程重點實驗室，四川 雅安 625014）

通過建立便秘大鼠模型，研究雅安藏茶、低聚木糖及二者的復配物對便秘模型大鼠的潤腸通便作用。取體質量相近、同批次的健康雄性Wister大鼠50 只，隨機選取5 只作為正常對照組，其余大鼠用鹽酸洛哌丁胺制造大鼠便秘模型。取造模成功的40 只大鼠隨機分成8 組：模型對照組、雅安藏茶浸液組、低聚木糖組、雅安藏茶與低聚木糖復配低、中、高3 個劑量組、陽性對照組、藏茶粉末組，連續7 d灌胃受試樣品，測定各組大鼠的采食量、飲水量、體質量增量、最后24 h的糞便粒數、糞便含水率、小腸炭末推進率和腸道菌群等腸道功能評價指標。結果表明，雅安藏茶、低聚木糖及二者的復配物均能夠增加大鼠排便次數和質量，軟化糞便；促進便秘大鼠小腸的蠕動，促進腸道內有益菌的增殖，抑制有害細菌的生長，且雅安藏茶與低聚木糖具有協同通便效果，其通便效果與復配物質量濃度有關，總體以低聚木糖組與雅安藏茶復配高劑量組效果最好，其效果達到或優于陽性對照物番瀉葉，并能使便秘大鼠的排便功能恢復至接近正常對照組。雅安藏茶、低聚木糖及二者的復配物均具有潤腸通便的作用且對維持腸道菌群的平衡具有很好的功效。

藏茶；低聚木糖；大鼠；便秘；潤腸通便

隨著社會經濟的發展，人們的生活節奏加快，工作壓力增大，長期超負荷的生活和工作壓力導致世界70%的人患有不同程度的胃腸道疾病[1]。便秘是臨床上最為常見的功能性胃腸道疾病，是一種常見的健康問題，也是許多高致死率疾病如急性心腦血管疾病、癡呆、結直腸癌等的誘發因素[2-5]，患病率高達27%。近年來，隨著人們飲食結構的改變及精神心理和社會因素的影響，便秘發病率也呈現增高的趨勢，已嚴重影響了人們的生活質量；并且因其病因復雜、不易治療、易復發、治療期長久且副作用較大等因素已然成為困擾社會的一種公眾疾病。

黑茶是后發酵茶，由于其特殊的口感和良好的保健功效，近年來在我國乃至世界復蘇并迅速崛起，成為茶產業發展的一支龐大的生力軍。黑茶是以成熟茶樹的鮮葉為原料，經殺青、干燥、漚堆發酵、蒸壓等工序制成的一大類茶葉的總稱，包括四川雅安藏茶、湖南茯磚茶、湖北老青磚、廣西六堡茶、云南普洱茶等。雅安藏茶屬于最典型的黑茶，也是最早的黑茶，具有1 300多年的歷史，其制作工藝被列為我國非物質文化遺產（黑茶制作技藝Ⅷ-329即雅安藏茶制作技藝）。雅安藏茶用采摘于海拔1 000多米高山上的成熟鮮葉和紅苔，通過殺青、4 次渥堆發酵以及篩分、蒸茶和蹓茶等18 道工序制作而成[6]。經特殊工藝持久發酵制作而成的雅安藏茶含有近500種對人體有益的有機化合物，約700多種香氣化合物，無機物種類也相當豐富，包括磷、鉀、鎂、硒等多達15 種礦物質[7]，加之藏茶湯色紅濃明亮、滋味醇和回甘、爽口純滑、陳香顯著，故深受藏民的喜愛，成為千百年來青藏等邊疆地區少數民族的生命茶，有民諺：“寧可三日無糧，不可一日無茶”。現代科學研究表明，雅安藏茶具有降脂減肥、抗氧化、降三高、抗輻射、抗突變、抗病毒、解毒和優化水質、調理胃腸道和改善代謝等多種保健功效，故而雅安藏茶也被越來越多的人接受，目前遠銷俄、韓、日、蒙、澳等國家和東南亞及臺、港地區。

低聚木糖是一種天然存在的五碳糖醇，具有很好的降血糖、防齲齒、改善肝功能、潤腸通便等功能[8-9]，廣泛應用食品、醫藥與潔齒品中。通過人群服用雅安藏茶與低聚木糖復配物實驗發現，雅安藏茶與低聚木糖復配對習慣性和老年性便秘病人具有較好的通便效果[10]，低聚木糖具有協同促進作用，但動物實驗尚未見此類研究報道。

本實驗旨在研究不同劑量的雅安藏茶與低聚木糖復配物對大鼠胃腸道功能的影響，并確定其最佳復配劑量。為探索雅安藏茶的保健功能提供一定的理論依據，為進一步開發利用藏茶產品奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

健康雄性Wistar大鼠50 只，SPF級，體質量128～135 g，由成都達碩生物有限公司提供，動物合格證號：SCXK（川）2008-24。飼養環境：四川農業大學動物科學院人工受精站動物實驗房內飼養，室溫（22±2）℃，相對濕度50%～60%，12 h光暗交替處理，大鼠單籠喂養，標準飼料喂養7 d后開始實驗。

番瀉葉、鹽酸咯派丁胺 雅安市醫藥總店；炭末、羧基纖維素鈉 雅安市萬科實驗器材有限公司；雅安藏茶、低聚木糖 四川省雅安市義興藏茶有限公司。

雅安藏茶與低聚木糖復配物浸液制備：雅安藏茶用藥物粉碎機粉碎成末，過100 目篩。將雅安藏茶與低聚木糖以5∶1（m/m）混合制備為袋包裝（5.7 g/袋）的方式，將1 袋袋泡茶放入200 mL沸水中浸煮10 min后，將所得溶液用生理鹽水定容至20 mL得到質量濃度為0.285 g/mL的藏茶與低聚木糖復配高劑量茶湯（雅安藏茶0.25 g/mL，低聚木糖0.035 g/mL）；再各取上述復配高劑量茶湯10 mL，分別按照5、10 倍體積稀釋，得到質量濃度分別為0.057、0.028 5 g/mL的復配中、低劑量茶湯（雅安藏茶和低聚木糖的質量濃度分別為0.05、0.025 g/mL和0.007、0.003 5 g/mL）。

雅安藏茶、低聚木糖浸液制備：將雅安藏茶用藥物粉碎機粉碎，過100 目篩，稱取5 g粉末加入沸水中浸煮10 min，紗布過濾后，定容至100 mL得到質量濃度為0.05 g/mL的雅安藏茶浸液；稱取0.7 g低聚木糖粉末，加入沸水定容至100 mL得到質量濃度為0.007 g/mL的低聚木糖溶液。

番瀉葉浸液制備：稱取番瀉葉2.5 g，加入100 mL沸水中浸提25 min后，以紗布過濾藥液，棄藥渣，將所得番瀉葉濾液定容至500 mL，得到質量濃度為5 mg/mL的番瀉葉浸液，115 ℃滅菌15 min，放入4 ℃冰箱備用。

炭末液、鹽酸咯派丁胺液制備：取3.0 g炭末溶于50.0 mL質量分數0.5%的羧基纖維素鈉溶液中即為炭末液；取5.0 mg鹽酸咯派丁胺溶于1 mL質量分數0.9%生理鹽水中即為鹽酸咯派丁胺液。

1.2 儀器與設備

恒溫光照培養箱 哈爾濱市東聯電子開發有限公司；超凈工作臺 蘇州安泰空氣技術有限公司；DHG-9245A電熱恒溫鼓風干燥箱 上海奇欣科學儀器有限公司；BCD-236YH立柜式冰箱 青島Haier公司；恒溫水浴鍋 余姚市東方電工儀器廠；電子萬用爐 中興偉業儀器有限公司；電子天平 余姚紀銘稱重校驗設備有限公司。

1.3 方法

1.3.1 大鼠便秘模型的建立[11]

取月齡、體質量相近的Wistar大鼠50 只，隨機選取5 只作為正常對照組，灌胃生理鹽水，其余45 只大鼠則灌胃5.0 mg/（kg·d）（以體質量計，下同）鹽酸咯派丁胺，連續灌胃3 d，制造便秘大鼠模型。

1.3.2 大鼠分組及處理

取造模成功的40 只大鼠隨機分成8 組，每組5 只，分別為模型對照組、雅安藏茶浸液組（0.100 g/（kg·d））、低聚木糖組（0.014 g/（kg·d））、雅安藏茶與低聚木糖復配低劑量組（雅安藏茶0.050 g/（kg·d）+低聚木糖0.007 g/（kg·d））、復配中劑量組（雅安藏茶0.100 g/（kg·d）+低聚木糖0.014 g/（kg·d））、復配高劑量組（雅安藏茶0.500 g/（kg·d）+低聚木糖0.070 g/（kg·d））、陽性對照組（番瀉葉10.0 mg/（kg·d））[12]、雅安藏茶粉末組（0.100 g/（kg·d））。正常對照組、模型對照組按2.0 mL/（kg·d）的劑量連續7 d灌胃質量分數0.9%的生理鹽水，其余各組大鼠以同量同法灌胃相應的樣品，實驗期間大鼠自由進食。

1.3.3 大鼠排便實驗[13]

分別記錄造模3 d期間與灌胃受試樣品7 d期間各組大鼠的飲水量、采食量、體質量增量、最后24 h的糞便粒數、糞便鮮質量mf（g）和糞便干質量md（g）（收集的新鮮糞便在105 ℃烘干至恒定的質量即為糞便干質量），按照公式（1）計算大鼠糞便含水率。

1.3.4 小腸炭末推進實驗[14]

灌胃受試樣品7 d 后，所有大鼠禁食不禁水24 h，每只大鼠灌胃1.0 mL炭末液，25 min后脫頸處死大鼠，打開腹腔分離腸系膜，剪取上端從幽門至下端回盲部的小腸腸管，置于托盤上，輕輕將小腸拉成直線，測量小腸腸管總長度即為小腸全長l2（cm），從幽門至炭末前沿為炭末推進長度l1（cm）。 按照公式（2）計算炭末推進率。

1.3.5 腸道菌落檢測[15]

第7天灌胃受試樣品后，收集各組大鼠新鮮糞便，用無菌棉棒各挑取0.5 g立即加入到含有玻璃珠的50 mL生理鹽水中振蕩30 min，經磷酸鹽緩沖液10 倍遞增稀釋成10－1～10－6倍系列稀釋液；在無菌操作的條件下，取適宜稀釋倍數的樣品10 μL接種在各類培養基上（雙歧桿菌和乳酸桿菌分別用TPY和MRS培養基，腸桿菌用EMB瓊脂培養基，腸球菌用EC瓊脂培養基），每個稀釋倍數做3 個重復；37 ℃分別在厭氧（TPY、 MRS培養基）和有氧（EMB、EC培養基）恒溫培養箱培養48 h，以菌落形態、革蘭氏染色鏡檢、生化反應等指標鑒定計數菌落，求平均值計算菌落總數，取對數后進行統計處理。

1.4 數據處理

2 結果與分析

2.1 大鼠便秘模型建立

表1 造模期間大鼠各項指標比較Table 1 Comparison of the indexes of healthy group and constipation group

實驗期間大鼠均正常生長。由表1可知，便秘模型組大鼠的飲水量、采食量、體質量增量、糞便粒數和糞便含水率均顯著低于正常對照組（P＜0.05）。結果表明通過給予大鼠灌胃鹽酸洛哌丁胺，成功建立了大鼠便秘模型。

2.2 雅安藏茶、低聚木糖及其復配物對便秘大鼠常規指標的影響

表2 受試樣品對便秘大鼠體質量增量、24 h糞便粒數和糞便含水率的影響 (x ±s, , n = 8)Table 2 Effects of the tested samples on body weight gain, 24 h fecal pellet number, and water content in fecal of constipation model rats (x ±s, , n = 8)

由表2可知，各受試樣品灌胃7 d后，與模型對照組相比，各受試樣品組大鼠的體質量增量均有不同程度的增加，其中以復配高劑量組的體質量增量最為顯著（P＜0.01），且與陽性對照組及正常對照組間無顯著差異（P＞0.05），表明雅安藏茶和低聚木糖復配物對大鼠的生長發育無不良影響，且能促進其生長發育。除復配低劑量組外，其他各組大鼠24 h糞便粒數均極顯著高于模型對照組（P＜0.01），雅安藏茶和低聚木糖復配物的效果呈劑量依賴關系，且復配物效果優于藏茶浸液組、低聚木糖組及陽性對照組，并能使其糞便粒數恢復至接近正常對照組；雅安藏茶和低聚木糖復配物對便秘大鼠糞便含水率的影響呈劑量依賴關系，與模型對照組相比，復配物高劑量組大鼠的糞便含水率有極顯著提高（P＜0.01），接近正常對照組。以上結果表明，雅安藏茶、低聚木糖及二者的復配物均能促進便秘大鼠的生長發育，明顯提高便秘大鼠的糞便粒數及含水率，具有潤腸通便的作用，且達到或優于陽性藥物的治療效果。

2.3 雅安藏茶、低聚木糖及二者的復配物對便秘大鼠小腸炭末推進率的影響

圖1 受試樣品對于便秘大鼠小腸炭末推進率的影響Fig.1 Effects of the tested samples on the carbon-pushing rate in small intestine of constipation model rats

實驗通過給予相同批次、體質量相似的健康大鼠灌胃藥物鹽酸洛哌丁胺，建立大鼠小腸蠕動抑制模型，通過灌胃活性炭末標記，觀察受試樣品對于便秘大鼠小腸蠕動的影響，實驗在給予大鼠灌胃受試樣品7 d后，進行大鼠小腸炭末推進實驗。如圖1所示，雅安藏茶、低聚木糖及二者的復配物均能不同程度地提高大鼠小腸炭末推進率，且復配物的推進效果與其劑量呈正相關，其中以復配高劑量組效果最明顯，與模型對照組相比差異極顯著（P＜0.01），且優于陽性對照組，接近正常對照組；另外，雅安藏茶粉末對促進便秘大鼠腸道蠕動效果優于同劑量的茶湯（雅安藏茶浸液組）。以上結果表明，一定劑量的雅安藏茶與低聚木糖復配以及藏茶粉末均可促使便秘大鼠腸道蠕動，并能改善、恢復便秘大鼠腸道蠕動功能。

2.4 雅安藏茶、低聚木糖及二者的復配物對便秘大鼠腸道菌群的影響

表3 受試樣品對便秘大鼠腸道菌群的影響 (x ±s, , n = 8)Table 3 Effects of the tested samples on intestinal flora of constipation model rats (x ±s, , n = 8) lg（CFU/g）

由表3可知，腸道有益菌雙歧桿菌和乳酸桿菌的數量在灌胃雅安藏茶和低聚木糖各組大鼠糞便中均有不同程度的增多，尤其以雅安藏茶浸液組、低聚木糖組及二者復配中劑量組、雅安藏茶粉末組增加顯著，與模型對照組相比差異極顯著（P＜0.01），且高于正常對照組，表明適當劑量的雅安藏茶與低聚木糖復配能顯著增殖腸道有益菌群。另外，藏茶粉末組對雙歧桿菌和乳酸桿菌的增殖效果優于同劑量的雅安藏茶浸液組，推測其原因一方面可能是雅安藏茶粉末中含有較多的粗纖維，有利于促進腸道的蠕動，為有益菌群的生長繁殖創造空間；另一方面可能是雅安藏茶粉末中的有效成分多于延安藏茶茶湯。雅安藏茶、低聚木糖在使糞便內有益菌群增多的同時，對有害菌也有較好的抑制作用。與模型對照組相比，各受試樣品組糞便中的腸球菌、腸桿菌均表現為下降的趨勢，表明雅安藏茶和低聚木糖均能在不同程度上抑制腸道有害菌群的生長繁殖，其中以復配高劑量組的抑菌效果最明顯，與模型對照組比差異極顯著（P＜0.01），與陽性對照組相當。上述結果表明，適當劑量的雅安藏茶、低聚木糖及二者的復配物可抑制便秘大鼠腸道中有害菌群的增殖而促進有益菌群的生長，具有調理腸道微環境的作用。

3 討 論

在前期本實驗室的人體口服研究中發現，在雅安藏茶中加入一定量（最佳劑量0.7 g/杯）的低聚木糖，二者具有協同通便效果[10]。所以在本實驗中采用國家茶葉審評標準的黑茶用茶量即雅安藏茶每次5 g/杯做為中劑量。為了研究雅安藏茶與低聚木糖及二者的復配物對便秘的影響，本實驗使用雅安義興藏茶公司提供的典型黑茶——雅安藏茶為原料進行動物實驗，實驗分為低、中、高3 個復配劑量組。低、中劑量分別相當于每天飲用0.75～1.5 杯茶，高劑量則相當于7.5 杯，少于每天10～15 杯的安全飲茶量[16]。

本實驗通過灌胃鹽酸洛哌丁胺建立大鼠便秘模型，檢測雅安藏茶、低聚木糖及二者的復配物與其他各種樣品對大鼠 體質量增量、糞便性狀、小腸推進運動和腸道菌群等便秘指標的影響[17-18]，探索雅安藏茶與低聚木糖復配治療便秘的作用與效果。結果表明，雅安藏茶、低聚木糖及二者的復配物均具有促進大鼠生長發育、增加大鼠糞便粒數和含水率、推進大鼠腸道運動、促進腸道內有益菌群生長繁殖、抑制腸桿菌和腸球菌等有害菌群的生長的作用。整體來看，隨著復配物劑量的增加效果更明顯，復配高劑量的效果達到或優于陽性藥物番瀉葉，并能使便秘大鼠的排便指標恢復至接近正常對照組，且雅安藏茶與低聚木糖具有協同通便的效果。復配物達到以上功效的原因可能在于雅安藏茶所含有的豐富營養物質和膳食纖維可以通過減少膽汁酸再吸收量、改變食物消化速率和消化分泌物的分泌量、促使腸胃蠕動加快、促進腸道排空、減少腸壁對廢物和毒素的重新吸收、排泄宿便[19]；而低聚木糖能促使雅安藏茶內的營養元素在腸道內更好地被吸收利用，二者達到了一種協同促進吸收的作用，從而能夠更好地改善腸道內環境，達到潤腸通便的效果。由于雅安藏茶和低聚木糖都是天然產物，對人體無毒副作用，且具有良好的保健功效，二者的復配物對于改善大鼠腸道內潤腸通便作用的研究可為進一步開發雅安藏茶的保健功能提供依據，同時也表明雅安藏茶在調理腸道便秘的保健方面有很好的發展前景；此外雅安藏茶粉末組與模型對照組及雅安藏茶浸液組對比，可顯著或極顯著地促進大鼠腸道內有益菌群增殖，但其具體原理有待進一步研究。

本實驗通過對比分析，證明雅安藏茶、低聚木糖及二者的復配物具有良好的潤腸通便作用，其具體作用主要是通過軟化便秘模型大鼠糞便、促進小腸的蠕動、調節小腸微生態環境等實現的，其通便效果與復配物劑量有關，以復配高劑量組效果最好，低聚木糖與雅安藏茶具有協同通便的效果，因此二者的復配高劑量組可做為一種有效的潤腸通便、防治便秘的保健飲品。

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Individual and Combined Laxative Effects of Ya’an Tibetan Tea and Xylooligosaccharide in Constipation Model Rats

LI Jie1, CHEN Xuejiao1, GUO Chengyi2, ZHANG Wei1, YAN Xiumei1, GUO Xiang1, XU Jingyi1,3,*
(1. College of Horticulture, Sichuan Agricultural University, Ya’an 625014, China; 2. Sichuan Ya’an Yixing Tibetan Tea Co. Ltd., Ya’an 625014, China; 3. Key Laboratory of Tea Science and Engineering of Sichuan, Ya’an 625014, China)

To evaluate the laxative effect of Ya’an Tibetan tea and/or xylooligosaccharide, the rat constipation model was established. From 50 male Wistar rats, 5 rats with the same age and similar body weights were randomly selected as the normal control group, and the remaining rats were treated with loperamide hydrochloride to establish the rat constipation model. The rats with constipation were randomly divided into 8 groups, including constipation model group, Ya’an Tibetan tea infusion group, xylooligosaccharide group, Ya’an Tibetan tea plus xylooligosaccharide high, medium and low-dose groups, positive control group and Ya’an Tibetan tea powder group. After 7 d administration, feed intake, water intake, body weight gain, fecal pellet number and water content within 24 hours, gastrointestinal transition rate and living bacteria in feces were measured in rats from each group. Results showed that fecal pellet number, body weight and water content were increased, and the number of intestinal enterococci and enterobacteriaceae was reduced, intestinal bifi dobacteria and lactobacillia were increased and intestinal transition length were extended in the mice treated with Ya’an Tibetan tea and/ or xylooligosaccharide as compared to those from the control group. Ya’an Tibetan tea and xylooligosaccharide had a synergistic laxative effect in a dose-dependent manner, and the best laxative effect, similar or even superior to that of the positive control senna, was observed at the high dose, while restoring the bowel function of constipation rats to nearly the normal level. Ya’an Tibetan tea and xylooligosaccharide mixture have defecating function, and may maintain the balance of the intestinal fl ora.

Tibetan tea; xylooligosaccharides; rat; constipation; laxative

TS272

A

1002-6630（2015）01-0220-05

10.7506/spkx1002-6630-201501042

2014-03-02

四川省教育廳青年科學研究項目（12ZA125）

李解（1991—），男，碩士研究生，主要從事茶葉保健功效研究。E-mail：410667097@qq.com

*通信作者：許靖逸（1980—），女，副教授，博士，主要從事茶葉生物化學和保健功效研究。E-mail：xujytea@126.com