宮頸癌組織中HMGB-1、PCNA的表達變化及臨床意義

吳英娟

（天津市第四中心醫院，天津 300140）

宮頸癌是婦科常見腫瘤之一，病理過程與腫瘤的增殖、侵襲性相關，針對腫瘤的增殖和侵襲性進行的基因治療非常有意義［1］，但目前有效的治療基因尚不清楚。增殖細胞核抗原（PCNA）是細胞中的一種核蛋白，與細胞的增殖狀態密切相關，可作為反映腫瘤細胞增殖程度與判斷預后的指標［2］。高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）屬于高遷移率族蛋白家族，是一種非組蛋白染色體蛋白，主要在胚胎發育早期表達，而在高度分化的組織中幾乎不表達。HMGB-1被證實與多種腫瘤的惡性程度、侵襲性和預后相關［3］。本研究觀察了宮頸癌組織中HMGB-1、PCNA的表達變化，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2010年5月 ～2014年6月天津市第四中心醫院收治的宮頸癌患者70例，年齡22～74（42.6±13.2）歲;所有患者均經病理證實，且術前均未進行放化療及其他針對腫瘤的治療。病理類型:局限型34例，浸潤型36例;分化程度:低分化37例，高中分化33例;浸潤深度:T1+T2 14例，T3+T4 56例;無淋巴結轉移23例，淋巴結轉移47例;按FIGO分類標準［4］，TNM分期Ⅰ+Ⅱ期28例，Ⅲ+Ⅳ期42例。手術留取70例份宮頸癌組織（宮頸癌組）、70例份宮頸癌癌旁組織（癌旁組），另取正常宮頸組織20例份（正常組）。

1.2 組織HMGB-1、PCNA檢測 采用免疫組化法。收集石蠟包埋的組織標本，切片（厚4～5 μm），通過10 mmol/L檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）高壓加熱法對宮頸癌組織以及正常宮頸組織切片進行抗原修復，以消除內源性過氧化物酶的活性。經10%山羊血清封閉1 h，滴加一抗（兔抗人PCNA單克隆抗體與兔抗人 HMGB-1單克隆抗體，稀釋濃度均為1∶20），置入4℃孵箱過夜，與辣根酶標記的二抗反應（北京中杉橋生物公司），DAB顯色，蘇木精復染胞核，脫水，封片，置于倒置顯微鏡下觀察并拍照。PBS代替一抗作為陰性對照，已知抗體陽性標本陽性對照。結果判定標準:HMGB-1陽性染色信號呈棕色細小顆粒，均位于細胞質。PCNA蛋白分布于細胞核內，呈棕黃色乃至棕褐色顆粒。每一張切片選取連續的10個高倍視野（400×），每個視野計數200個細胞，分別統計其中的所有陽性細胞，計算陽性細胞百分比。

1.3 統計學方法 采用SPSS19.0統計軟件。計數資料比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Pearson相關分析法。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組HMGB-1、PCNA陽性率比較 宮頸癌組、癌旁組、正常組HMGB-1陽性率分別為95.7%（67/70）、22.9%（16/70）、5.0%（1/20），兩兩比較，P均＜0.05;PCNA 陽性率分別為 90.0%（63/70）、65.0%（45/70）、45.0%（9/20），兩兩比較，P均 ＜0.05。

2.2 HMGB-1、PCNA表達與宮頸癌臨床病理參數的關系 結果見表1。由表1可知，HMGB-1表達與宮頸癌分化程度、淋巴結轉移、TNM分期有關，PCNA表達與宮頸癌腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移、TNM分期有關（P均＜0.05）。

表1 HMGB-1、PCNA表達與宮頸癌臨床病理參數的關系

2.3 宮頸癌組織中PCNA、HMGB-1表達的相關性宮頸癌組織中PCNA與HMGB-1表達呈正相關（r=6.82，P＜0.05）。

3 討論

宮頸癌嚴重威脅婦女健康，是僅次于乳腺癌的常見惡性腫瘤，其具有惡性程度高、病死率高的特點。近幾年雖然有報道宮頸癌發病率和病死率均有顯著降低的情況，但是出現了年輕化趨勢，35歲以下婦女患有宮頸癌的比率顯著上升，因而宮頸癌的早期診斷以及早期治療對于這些患者來說非常重要［5］。探索與宮頸癌發生發展的相關分子生物因素及預測腫瘤轉移與浸潤的潛在風險是當今這個領域的研究熱點。目前認為，惡性腫瘤的典型特征為腫瘤侵襲性及轉移，一些細胞調節因子及生物活性介質在其中發揮至關重要的作用。大量臨床試驗表明，高表達侵襲性生物因子的患者預后較差。因此，尋找一個宮頸癌新的基因治療作用靶點顯得尤為重要。

PCNA是一種S期細胞核內大量表達的核蛋白之一，在 DNA的合成調控中發揮至關重要的作用［6］。PCNA水平在DNA合成周期的改變與細胞增殖過程一致，是一種衡量腫瘤惡性程度與增殖能力的可靠指標。有研究［7，8］證實，PCNA 參與中樞神經系統腫瘤、子宮內膜癌、乳腺癌、肝癌等多種惡性腫瘤的發生發展。而細胞無限增殖被認為是腫瘤發生機制之一，腫瘤細胞的增殖活性與腫瘤的浸潤、轉移和預后密切相關［9］。因此，檢測腫瘤組織中PCNA水平有助于預后判斷。有研究［10，11］表明，正常胃黏膜組織中PCNA不表達，而胃癌組織中PCNA高表達，分化程度越低，水平越高。已有學者利用免疫組化法檢測PCNA在腦膠質瘤、肺癌、宮頸癌、乳腺癌等組織中的表達及其與臨床病理分級的關系，并對患者預后進行判斷;但宮頸癌組織中PCNA的表達與臨床分期、病理分級以及淋巴結轉移等臨床病理參數之間的關系尚不清楚。本研究顯示，宮頸癌組PCNA陽性率高于癌旁組及正常組，且PCNA表達與宮頸癌腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移、TNM分期有關，這表明PCNA隨著腫瘤病理級別的增高，陽性率明顯升高，其表達隨腫瘤分級呈遞增趨勢。上述結果與王暉等［12］和辛海等［13］的結論一致。

HMGB-1是30年前發現的一種細胞因子，主要存在于真核細胞內，在結構上高度保守的單鏈多肽，約有215個氨基酸殘基，其在DNA重組、復制、修復和基因轉錄的過程中起重要作用［14］。關于HMGB-1在腫瘤中的作用報道逐漸增多，隨著深入研究，其在缺血再灌注損傷、自身免疫性疾病、休克中的不同作用也被探索。有研究［15］表明，HMGB-1參與了腫瘤的增殖、生長、浸潤與轉移，但關于它的研究尚處于探索階段，有待進一步研究。HMGB-1還與胰腺癌、結腸癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌等腫瘤的臨床分期和不同預后的結局有相關性［16，17］。近年大量研究［18～21］證實，HMGB-1 與胃癌、結直腸癌、胰腺癌的侵襲和淋巴、血液轉移密切相關。HMGB-1在多種腫瘤和未成熟細胞中表達，趨化作用可被其誘導產生，參與腫瘤細胞轉移。但是關于HMGB-1與宮頸癌臨床病理參數的關系以及具體的作用體制目前尚不明確。本研究顯示，宮頸癌組HMGB-1陽性率高于癌旁組及正常組，且與宮頸癌腫瘤分化程度、淋巴結轉移、TNM分期有關。目前，對于HMGB-1促進腫瘤發展的機制尚不清楚，我們認為可能與HMGB-1通過 Ras、MAPK途徑，促使 MAPKs磷酸化，進而激活核轉錄因子 κB（NF-κB），而 NF-κB 是一種重要的核轉錄因子，存在于真核細胞中，其與基因上啟動子區的固定核苷酸序列結合啟動基因轉錄，從而完成細胞增殖與分化、腫瘤形成與轉移等一系列重要生物學功能［22］。

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