五種抗腫瘤藥物對原發性乳腺癌原代培養細胞化療效果的影響因素分析

1 資料與方法

1.1 臨床資料天津醫科大學腫瘤醫院收治的女性原發性乳腺癌患者536例，均經石蠟切片病理學確診，均無其他惡性腫瘤病史;年齡23～81歲，平均52歲;Ⅰ期164例，Ⅱ期282例，Ⅲ期90例。

1.2 藥物敏感性檢測采用膠滴腫瘤藥敏檢測(CD-DST)技術。手術過程中取患者乳腺癌組織，在無菌條件下剪碎，經膠原酶消化，獲取單細胞懸液。離心后接種于Ⅰ型膠原凝膠的細胞培養瓶中，培養出原代細胞后，棄去未貼壁的死細胞，獲取單細胞懸液。冰浴條件下將CD-DST試劑盒中的A、B、C液按8∶1∶1制成膠原凝膠液，與細胞沉淀混合打勻;按30 μL/滴、3滴/孔種植到6孔板中，在37℃條件下孵育1 h使其凝膠化后，加入培養液培養。培養24 h后，分別加入需檢測的化療藥物DOC(10 μg/mL)、THP(0.5 μg/mL)、EPI(0.5 μg/mL)、CDDP(15 μg/mL)、NVB(4 μg/mL)，設立空白對照組。培養24 h后，洗去化療藥物，加入培養液，繼續培養7 d。中性紅染色固定干燥后，采用Scionimage軟件對圖像進行分析，結果用藥物處理組與空白對照組的腫瘤細胞克隆量光密度比值表示。≤50%為腫瘤細胞對化療藥物敏感，＞50%為不敏感即耐藥。化療藥物有效率 =對化療藥物敏感例數/總例數×100%。

1.3 統計學方法采用SPSS17.0統計軟件。計數資料組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

在原發性乳腺癌原代培養細胞中，DOC的單藥化療有效率為 46.5%(249/536)、EPI為 42.9%(230/536)、THP 為 42.7%(229/536)、CDDP 為42.5%(228/536)、NVB 為34.0%(182/536)。DOC在年齡＜60歲、ER陰性、p53陽性、非Luminal型乳腺癌細胞中單藥有效率高(P均＜0.05);EPI在ER陰性、Her-2陽性、非Luminal型、非Luminal A型乳腺癌細胞中單藥有效率高(P均＜0.05);THP在組織學Ⅲ級、Her-2陽性乳腺癌細胞中單藥有效率高(P均＜0.05);CDDP在ER陽性、Luminal型乳腺癌細胞中單藥有效率高(P均＜0.05);NVB在PR陽性、Luminal B型和非Her-2過表達型乳腺癌細胞中單藥有效率高(P均＜0.05);詳見表1。

表1 單藥有效率與乳腺癌臨床病理參數的關系

3 討論

采用CD-DST技術培養腫瘤細胞所需癌組織量少，且癌組織離體時間短，生物學性狀尚未發生大的變化，能較真實地反映整個腫瘤細胞群體的特性及不同供體的個體差異，具有較好的臨床相關性，標本可評價率為 84.3%［3］。

本研究通過CD-DST發現，原發性乳腺癌原代培養細胞對5種常用化療藥物的敏感性不同;而且，通過對乳腺癌患者臨床病理特征進一步分層發現，同一種化療單藥在不同分層中的敏感性也存在差異。其中，DOC在ER陰性、p53陽性和非Luminal型乳腺癌細胞中較敏感，與Rouzier等［4］和Holmes等［5］提出DOC在ER陰性、p53陽性的乳腺癌細胞中敏感性較高的結論一致。但是，Durbecq等［6］認為，乳腺癌對DOC的敏感性與p53表達無關。因此，以上結論還需更多的臨床數據驗證。此外，本研究中DOC對年齡≥60歲乳腺癌患者的化療有效率較低，與老年患者乳腺癌組織學分級低、ER高表達、p53 低表達、化療敏感性低的特點相符［5，7，8］。THP在組織學Ⅲ級和Her-2陽性乳腺癌細胞中的敏感性較高;EPI在ER陰性、Her-2陽性和非Luminal型乳腺癌細胞中的敏感性較高;與 Carey等［9］和Pritchard等［10］報道的蒽環類藥物在Her-2過表達型乳腺癌中的敏感性較高的結果一致。Petrelli等［11］報道，CDDP用于乳腺癌新輔助化療中，其病理完全緩解率(pCR)可達41.9%;三陰型乳腺癌患者達到pCR的例數約是非三陰型患者的2倍。本研究結果顯示，CDDP在ER陽性和Luminal型乳腺癌細胞中化療敏感性較高，在三陰型和非三陰型乳腺癌細胞中其化療敏感性差異無統計學意義。目前，三陰型乳腺癌能否在含有CDDP的新輔助化療中獲益尚不明確。伴有BRCA突變的三陰型乳腺癌對CDDP最敏感，pCR 可達 83%～100%［12］。然而，BRCAness型乳腺癌在三陰型乳腺癌中更常見，約占2/3，BRCAness型乳腺癌具有散發性乳腺癌和BRCA突變型乳腺癌的混合特征，與BRCA突變型相比，在含CDDP 的新輔助化療中其 pCR 明顯下降［13，14］。本研究觀察到，CDDP單藥有效率在三陰型乳腺癌和非三陰型乳腺癌中的差異無統計學意義，但不能說明CDDP在三陰型乳腺癌中不敏感。由于本研究中未對三陰型乳腺癌進行基因方面的檢測，所以上述推斷尚需進一步驗證。而同樣屬于作用于微管的生物堿類化療藥，NVB與DOC的敏感因素完全不同，也為臨床上兩者聯合使用不會產生交叉耐藥［15］提供一定的依據。

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