胃癌組織中SPARC、MMP-9的表達(dá)及意義

李楊，吳繼鋒，趙文娣，張紅，秦蓉，王道斌

(1安徽醫(yī)科大學(xué)附屬安慶市立醫(yī)院，安徽安慶246002;2安徽醫(yī)科大學(xué))

研究發(fā)現(xiàn)，富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)可參與組織重建、形態(tài)生長、細(xì)胞遷移和增殖，從而調(diào)節(jié)機(jī)體的生理和病理過程［1］;其在某些腫瘤中異常表達(dá)并可誘導(dǎo)某些基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)的表達(dá)［2］。本研究探討胃癌組織中SPARC、MMP-9在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集1999年3月～2005年5月安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院診治的胃癌患者108例，均經(jīng)手術(shù)病理檢查證實(shí)診斷，男77例、女31例，年齡29～77歲、中位年齡58歲。其中乳頭狀腺癌14例，管狀腺癌33例，低分化腺癌29例，印戒細(xì)胞癌19例，黏液腺癌13例;TNM分期Ⅰ期9例，Ⅱ期19例，Ⅲ期68例，Ⅳ期12例;分化程度為高分化18例，中分化29例，低分化61例。術(shù)前均未接受化療及放療。取其手術(shù)切除的胃癌組織(觀察組)，同時(shí)取89例距腫瘤組織＞5 cm的胃黏膜組織(對照組)。

1.2 SPARC、MMP-9表達(dá)檢測 采用免疫組化SP法。組織標(biāo)本均經(jīng)4%甲醛固定，石蠟包埋，切片;常規(guī)脫蠟、水化后，枸櫞酸緩沖液水浴抗原修復(fù);滴加鼠抗人 SPARC即用型單克隆抗體(濃度為1∶1 200，美國Zymed公司)或兔抗人MMP-9單克隆抗體(即用型，北京中杉生物技術(shù)有限公司)，常規(guī)免疫組化方法染色。SPARC以人正常皮膚組織為陽性對照，MMP-9以人乳腺癌組織為陽性對照，均以PBS代替一抗作為陰性對照。結(jié)果由兩名醫(yī)師獨(dú)立閱片并評定結(jié)果。間質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)和(或)細(xì)胞核出現(xiàn)黃色或黃褐色顆粒為SPARC陽性細(xì)胞;癌細(xì)胞胞質(zhì)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為MMP-9陽性細(xì)胞;無著色或陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性，陽性細(xì)胞數(shù)≥10%為陽性［3］。分析SPARC、MMP-9表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系及胃癌組織SPARC與MMP-9表達(dá)的關(guān)系。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用四格表χ2檢驗(yàn)、行×列表χ2檢驗(yàn)或Wilcoxon秩和檢驗(yàn);相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)法。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組SPARC、MMP-9表達(dá)比較 SPARC主要表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞，MMP-9主要表達(dá)于癌細(xì)胞。觀察組、對照組 SPARC陽性表達(dá)率分別為 88.0%、14.1%(P ＜0.01)，MMP-9 陽性表達(dá)率分別為69.4%、19.1%(P ＜0.01)。

2.2 SPARC、MMP-9表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 胃癌組織SPARC表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)(P均＜0.05)，MMP-9與組織學(xué)類型、分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)(P均＜0.05)，二者與性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均無關(guān)(P均＞0.05)。見表1。

2.3 胃癌組織中SPARC與MMP-9表達(dá)的關(guān)系胃癌組織中MMP-9與SPARC表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.561，P ＜0.01)。

表1 SPARC、MMP-9表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系［例(%)］

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)，在不同類型腫瘤中SPARC表達(dá)的細(xì)胞有所不同［4，5］。本研究顯示，SPARC 主要表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞，少數(shù)表達(dá)于胃癌細(xì)胞，推測可能是間質(zhì)細(xì)胞合成的SPARC被腫瘤細(xì)胞內(nèi)化［6］。SPARC與惡性腫瘤生物學(xué)行為密切相關(guān)的可能機(jī)制:①SPARC直接抑制一些基質(zhì)蛋白的合成，改變間質(zhì)的成分和結(jié)構(gòu);②間接上調(diào)基質(zhì)降解酶類的合成，從而使癌細(xì)胞易于突破淋巴管和血管的基底膜而向脈管浸潤;③誘導(dǎo)細(xì)胞變圓，發(fā)揮抗黏附作用，從而增加腫瘤細(xì)胞的侵襲能力［7，8］。SPARC 的水解產(chǎn)物——鈣離子結(jié)合肽能刺激血管生成和細(xì)胞生長，外源性SPARC還可以降低血管生成抑制劑的濃度，促進(jìn)血管生成［9］。本研究結(jié)果顯示，胃癌間質(zhì)細(xì)胞SPARC的陽性表達(dá)率顯著高于正常胃黏膜組織，與相關(guān)文獻(xiàn)一致［10，11］，提示 SPARC 可能參與了胃癌的發(fā)生;同時(shí)，SPARC表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)，提示其與胃癌的進(jìn)展有關(guān)。研究證實(shí)，MMP-9參與多種腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移，可能機(jī)制為:①去除侵襲的機(jī)械性屏障;②影響細(xì)胞間的粘連;③水解蛋白質(zhì)釋放某些生物活性物質(zhì);④影響多種生長因子的活性［12］。本研究發(fā)現(xiàn)，MMP-9表達(dá)與胃癌的組織學(xué)類型、分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)，提示MMP-9與胃癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，與相關(guān)文獻(xiàn)結(jié)論一致［13］。

腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移涉及復(fù)雜的細(xì)胞之間以及細(xì)胞與間質(zhì)之間的反應(yīng)。目前認(rèn)為間質(zhì)成分并不是被動(dòng)的，而是主動(dòng)地參與腫瘤的生物學(xué)行為。SPARC作為細(xì)胞外基質(zhì)成分之一，發(fā)揮抗黏附作用，使腫瘤細(xì)胞間的黏附特性消失、相互分離，更易于浸潤周圍組織和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。SPARC能夠介導(dǎo)外周血單核細(xì)胞表達(dá)MMP-1和MMP-9，介導(dǎo)成纖維細(xì)胞表達(dá) MMP-1、MMP-3、MMP-9。車軼群等［14］報(bào)道，在乳腺癌細(xì)胞中SPARC通過上調(diào)MT1-MMP進(jìn)而活化MMP-2。但在SPARC敲除小鼠腹腔內(nèi)注入卵巢癌細(xì)胞后，與野生型小鼠相比可觀察到MMP-2和MMP-9上調(diào)，人基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)及 TIMP-2下調(diào)［15］。本研究也發(fā)現(xiàn)胃癌組織SPARC與MMP-9表達(dá)呈正相關(guān)。因此，我們認(rèn)為胃癌組織間質(zhì)細(xì)胞分泌的SPARC可能通過上述機(jī)制上調(diào)腫瘤細(xì)胞MMP-9表達(dá)，使基底膜及細(xì)胞外基質(zhì)降解而發(fā)生浸潤、轉(zhuǎn)移。因此，進(jìn)一步研究SPARC及MMP-9的相互作用及調(diào)節(jié)機(jī)制，可為闡明胃癌實(shí)質(zhì)與間質(zhì)之間的相互作用提供有力依據(jù)，進(jìn)而為抑制胃癌的浸潤和轉(zhuǎn)移提供有效的途徑。

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