桂參通脈膠囊質量標準研究※

梁君昭 竇建衛 袁倩倩 岳寶森 王 蓓 黃 芊

(陜西省西安市中醫醫院科教科，陜西 西安 710001)

1 西安交通大學醫學部藥學院天然藥物研究中心，陜西 西安710061

2 陜西省西安市中醫醫院制劑科，陜西 西安 710001

桂參通脈膠囊由桂枝、黨參、黃芪、茯苓、葛根、郁金等藥物組成，具有補氣益心、活血通脈、化痰祛濁的功效，臨床上常用于胸痹心氣虧虛、痰瘀交阻所致胸悶氣短、心悸乏力、夜眠不安及冠心病心肌缺血、心律失常、心功能不全等。為良好的控制桂參通脈膠囊的質量，本研究對處方中葛根、郁金、茯苓的薄層鑒別方法進行研究，并建立了桂枝中桂皮醛的含量測定方法，結果如下。

1 試驗材料

1．1 儀器 高效液相色譜儀(HPLC)(包括LC-20AT恒流泵，SPD-20A紫外檢測器，LCsolution色譜工作站)，日本島津公司;AB135-S 0．01 mg電子天平，梅特勒—托利多。

1．2 藥品及試劑 桂參通脈膠囊，陜西省西安市中醫醫院醫療機構制劑，批號130101、130302、130503;桂皮醛對照品(批號110710-200212)、葛根對照藥材(批號121175-200503)、郁金對照藥材(批號120949-200504)、茯苓對照藥材(批號121117-200504)，均購自中國藥品生物制品檢定所。甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 薄層色譜鑒別

2．1．1 葛根薄層色譜鑒別［1］取桂參通脈膠囊內容物3 g，加甲醇15 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0．5 mL使溶解，作為供試品溶液。另取葛根對照藥材0．8 g、缺葛根藥材陰性樣品3 g，同法制成對照藥材溶液及陰性樣品溶液。吸取供試品溶液、對照藥材溶液及陰性樣品溶液各10 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以三氯甲烷—甲醇—水(7∶2．5∶0．25)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。結果顯示，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾。見封3，圖1。

2．1．2 郁金薄層色譜鑒別 取桂參通脈膠囊內容物3 g，加無水乙醇25 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取郁金對照藥材2 g、缺郁金藥材陰性樣品3 g，同法制成對照藥材溶液及陰性樣品溶液。吸取供試品溶液、對照藥材溶液及陰性樣品溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷—乙酸乙酯(17∶3)為展開劑，預飽和30 min，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰，置日光下檢視。結果顯示，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同的主斑點和熒光斑點，陰性對照無干擾。見封3，圖2。

2．1．3 茯苓薄層色譜鑒別［2］取桂參通脈膠囊內容物3 g，加乙醚50 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取茯苓對照藥材1 g、缺茯苓藥材陰性樣品3 g，同法制成對照藥材溶液、陰性樣品溶液。吸取供試品溶液、對照藥材溶液及陰性樣品溶液各2 μL，分別點于同一硅膠 G薄層板上，以甲苯—乙酸乙酯—甲酸(20∶5∶0．5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸—乙醇(4∶1)混合溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰，于日光下檢視。結果顯示，供試品色譜中，在與對照藥材相應的位置上顯相同的主斑點，陰性對照無干擾。見封3，圖3。

2．2 桂皮醛含量測定

2．2．1 色譜條件及系統適用性試驗 色譜柱為Phecda-C18柱，以乙腈—水(32∶68)為流動相，檢測波長為290 nm，柱溫40℃，流速1 mL/min。按桂皮醛計算，理論板數應不低于3 000。在此色譜條件下，桂皮醛與雜質峰可達分離。

2．2．2 溶液制備

2．2．2．1 對照品溶液制備 精密稱取桂皮醛對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每mL含10 μg的溶液，即得。

2．2．2．2 供試品溶液制備 取桂參通脈膠囊內容物約0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質量，超聲處理(功率250 W，頻率40 Hz)30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，精密吸取續濾液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2．2．2．3 陰性對照品溶液制備 取缺桂枝模擬制劑，按2．2．2．2項下制備方法制成陰性對照品溶液。

2．2．3 測定方法 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入 HPLC儀，測定，以峰面積按標外法計算桂皮醛含量。

2．2．4 干擾性試驗 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各10 μL，注入HPLC儀。結果表明，陰性對照品溶液的 HPLC圖譜中，未呈現與桂皮醛對照品保留時間相同的色譜峰，表明陰性對照無干擾。見圖4、5、6。

圖4 對照品溶液HPLC圖

圖5 供試品溶液HPLC圖

圖6 陰性對照品溶液HPLC圖

2．2．5 線性關系考察 精密吸取對照品溶液，分別進樣 2．0、5．0、10．0、15．0 和 20．0 μL，測定峰面積。以峰面積(Y)對進樣量(X)進行線性回歸，得桂皮醛回歸方程為 Y=5 829．3X+2 496．1，r=0．999 8。結果顯示，桂皮醛在0．020 5 ～ 0．205 0 μg范圍內線性關系良好。見圖7。

圖7 桂皮醛線性關系考察結果

2．2．6 穩定性試驗 精密吸取供試品溶液(批號 130101)10 μL，分別于0、1、2、4、6 和8 h 進樣，測定桂皮醛峰面積，計算相對標準偏差(RSD)，考察樣品8 h內穩定性。結果顯示，桂皮醛RSD=0．46%(n=6)。說明供試品溶液在8 h內穩定性良好。

2．2．7 精密度試驗

2．2．7．1 中間精密度試驗 取桂參通脈膠囊(批號130101)適量，由不同分析人員按 2．2．2．2項下方法分別制備供試品溶液。各精密吸取10 μL進樣2次，測定桂皮醛峰面積，計算RSD。結果顯示，由不同分析人員制備的同一批號樣品中，桂皮醛含量基本一致，RSD=0．44%，表明該方法中間精密度良好。

2．2．7．2 重復性試驗 取桂參通脈膠囊(批號130101)內容物 0．4、0．5 和0．6 g，各取3 份，精密稱定，按照2．2．2．2項下方法制備供試品溶液。各精密吸取10 μL進樣，測定，計算RSD。結果顯示，桂皮醛的平均含量為 4．52 mg/g，RSD=0．88%(n=9)，表明該方法重復性良好。結果見表1。

表1 桂參通脈膠囊重復性試驗結果 n=9

2．2．8 加樣回收率試驗 取桂參通脈膠囊(批號130101)樣品適量，約0．25 g，共取6份，精密稱定，分別精密加入桂皮醛濃度為1．112 mg/mL的對照品溶液1 mL，按照2．2．2．2 項下方法制備供試品溶液，各精密吸取10 μL進樣，測定桂皮醛峰面積，計算回收率。結果顯示，桂皮醛平均回收率為 98．6%，RSD=0．68%(n=6)。結果見表 2。

表2 桂皮醛加樣回收率試驗結果 n=6

2．2．9 含量測定 取3批不同批次的桂參通脈膠囊樣品，采用2．2．1項色譜條件測定。結果顯示，3批樣品中桂皮醛的平均含量為4．50 mg/g顆粒。

3 討論

3．1 波長選擇 取桂皮醛供試品溶液、對照品溶液及陰性對照品溶液，于紫外分光光度下進行波長掃描，波長范圍200～350 nm。結果顯示，對照品溶液及供試品溶液在波長290 nm處吸收最大，且陰性對照品溶液在此波長下無吸收，故將檢測波長定為290 nm。

3．2 供試品提取條件考察 為了更好的將供試品中桂皮醛提取出，本試驗分別對提取溶劑、提取時間、提取功率進行考察，結果發現用甲醇超聲處理(功率250 W，頻率40 Hz)30 min時，提取率最高。

桂參通脈膠囊中的葛根、郁金及茯苓薄層色譜鑒別結果顯示，各薄層斑點不受樣品中其他藥材的干擾。表明該方法專屬性強，能夠很好地鑒別該樣品中的3味藥材。該處方中桂枝具有發汗解肌、散寒止痛、溫通經脈、平沖降氣等功效［3］，是處方中的君藥。本試驗通過建立桂枝中桂皮醛含量測定方法，可有效控制桂參通脈膠囊的質量。

［1］ 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典:2010年版［S］．北京:中國醫藥科技出版社，2010:861．

［2］ 張義生，梁惟俊，范彥博，等．調脂康口服液的薄層色譜鑒別［J］．中國醫院藥學雜志，2012，32(7):556-558．

［3］ 劉萍，張麗萍．桂枝化學成分及心血管藥理作用研究［J］．遼寧中醫雜志，2012，39(10):1926-1927．