新疆維吾爾族系統性紅斑狼瘡與HLA-DQA1等位基因相關性研究

李文政 屈園園 李婷婷 康曉靜

新疆維吾爾族系統性紅斑狼瘡與HLA-DQA1等位基因相關性研究

李文政 屈園園 李婷婷 康曉靜

目的 探討新疆維吾爾族系統性紅斑狼瘡（SLE）與HLA-DQA1的相關性。方法 用聚合酶鏈反應-序列特異性引物技術，對56例SLE維吾爾族患者和54例維吾爾族健康對照者的HLA-DQA1基因進行研究。結果 SLE組DQA1*0302頻率顯著高于對照組（χ2=10.032，P=0.004），而SLE組DQA1*0101頻率顯著低于對照組（χ2=5.676，P=0.017）。結論 HLA-DQA1*0302可能是新疆維吾爾族SLE的易感基因，HLADQA1*0101可能是新疆維吾爾族SLE的保護基因。

紅斑狼瘡，系統性；HLA抗原；基因頻率；維吾爾族；環境

系統性紅斑狼瘡（SLE）的發病與多種人類白細胞抗原（HLA）等位基因相關，由于HLA具有高度多態性，不同種族、民族的HLA基因頻率分布存在明顯差異。為了解新疆維吾爾族SLE患者與HLA-DQA1等位基因的相關性，我們應用聚合酶鏈反應-序列特異性引物（PCR-SSP）技術，對新疆維吾爾族SLE患者進行HLA-DQA1等位基因分型研究。

一、對象

維吾爾族SLE患者共56例，其中男5例，女51例，年齡9～50歲。來自新疆各地，就診于本院皮膚科，均符合1997年美國風濕病協會修訂的 SLE診斷標準［1］。54例無血緣關系的維吾爾族人為健康對照組，其中男7例，女47例，年齡7～56歲。兩組年齡、性別比較，差異無統計學意義，具有可比性。

二、方法

1.血樣采集和處理：采取外周靜脈血3 ml，保存于EDTA抗凝管中，置于-80℃冰柜備用。采用上海生工生物工程技術服務有限公司生產的基因組DNA快速提取試劑盒，提取研究對象的基因組DNA。

2.序列特異性引物設計及合成：HLADQA1等位基因分型引物根據1995年公布的HLA-II類等位基因核苷酸序列［2］和Olerup等［3］文獻設計，由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。共設計9個5′端引物和7個3′端引物。組成12對不同的引物對，能鑒定10種有表達產物的HLADQA1等位基因。各引物對擴增的等位基因見表1。

表1 各引物對擴增的等位基因特異性及大小

3.PCR擴增反應體系：總體系體積為20 μ1，其中DNA模板2 μ1，雙蒸水4 μ1，內參照引物上、下游各1 μ1，目標引物上、下游各1 μ1，Master mix 10 μ1。

4.PCR擴增條件及擴增產物的檢測：94℃預變性10 min進入PCR循環，95℃30 s，59℃1 min，72℃1 min，30個循環后繼續延伸7 min，降溫至4℃。PCR擴增產物在2%瓊脂糖凝膠（含0.5 mg/L溴化乙錠）中電泳，經紫外透射在泳道中見明顯DNA條帶為陽性。每個樣本同時進行12個獨立的PCR反應。每一PCR反應體系中均包括對內參照引物C3：5′-GCATCTTGCTCTGTGCAGAT-3′，C5：5′-TGCCAAGTGGAGC ACCCAA-3′。結果判斷必須在有內對照引物擴增帶出現的前提下進行，根據特異性引物是否得到相應的PCR擴增帶而確定個體的DQA1型別。

5.統計分析：采用SPSS13.0統計軟件，HLA-DQA1基因頻率采用直接計算法，基因頻率組之間比較用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

三、結果

SLE患者HLA-DQA1*0101等位基因頻率較健康對照組顯著降低（χ2=5.676，P＜0.05），SLE患者HLA-DQA1* 0302等位基因頻率較正常對照組顯著增高（χ2=10.032，P＜0.01）。見表2。

表2 新疆維吾爾族SLE患者與健康對照組等位基因分析表

四、討論

SLE作為一種自身免疫性疾病，與HLA的相關性研究從20世紀70年代開始一直未間斷過。由于HLA抗原分布因人種、民族、地理環境等因素可出現較大的差別，其與SLE相關的抗原型與基因型亦存在較大差異。有研究顯示，美國白人SLE與DQA1*0501相關，英國人則與DQA1*0201相關，而黑人主要與DQA1*0401和DQA1*0501相關［4］。陳躍華等［5］通過檢索文獻，應用Meta分析，結果顯示，HLA-DQA1*0102可能是中國漢族人群SLE的易感基因。劉棟華等［6］報道，HLA-DQA1*0101可能是廣西壯族SLE的易感基因。蘇家光等［7］報道HLA-DQA1*0102可能是廣西壯族SLE患者的易感基因。我們通過應用PCR-SSP技術獲得了新疆維吾爾族SLE患者和正常人群的基因頻率，結果發現，新疆維吾爾族SLE患者HLA-DQA1*0302等位基因頻率較健康對照組顯著增高（χ2=10.032，P=0.004），提示HLA-DQA1*0302可能是新疆維吾爾族SLE的易感基因。同時我們發現，新疆維吾爾族SLE患者HLA-DQA1*0101等位基因頻率較正常對照組顯著降低（χ2=5.676，P=0.017），提示HLA-DQA1*0101可能是新疆維吾爾族SLE的保護基因。

本研究結果為探討維吾爾族人的免疫遺傳背景、疾病關聯及與其他群體比較提供有價值的參考資料。鑒于本研究病例數尚少，HLA-DQA1*0302是否為新疆維吾爾族SLE的易感基因，HLA-DQA1*0101是否為新疆維吾爾族SLE的保護基因，尚待進一步研究。

［1］Hochberg MC.Updating the American College of Rheumatology revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus［J］.Arthritis Rheum,1997,40（9）:1725.

［2］Marsh SG,Bodmer JG.HLA class II region nucleotide sequences, 1995［J］.Tissue Antigens,1995,46（3（Pt 2）:258-280.

［3］Olerup O,Aldener A,Fogdell A.HLA-DQB1 and-DQA1 typing by PCR amplification with sequence-specific primers（PCR-SSP）in 2 hours［J］.Tissue Antigens,1993,41（3）:119-134.

［4］De Juan D,Martín-Villa JM,Gómez-Reino JJ,et al.Differential contribution ofC4 and HLA-DQ genesto systemic lupus erythematosus susceptibility［J］.Hum Genet,1993,91（6）:579-584.

［5］陳躍華,陳明,范昌斌.中國漢族人群系統性紅斑狼瘡HLADQ基因多態性的Meta分析［J］.安徽醫學,2006,27（3）:175-177.

［6］劉棟華,梁伶,蘇家光,等.廣西壯族系統性紅斑狼瘡與HLADQA1基因相關性研究［J］.中國皮膚性病學雜志,2004,18（8）: 449-450,481.

［7］蘇家光,梁伶,鄭文軍,等.廣西壯族系統性紅斑狼瘡與HLADQA1等位基因相關性研究［J］.中華皮膚科雜志,2006,39（4）: 220.

Association of HLA-DQA1 alleles with systemic lupus erythematosus in populations of Uygur nationality in Xinjiang Uygur Autonomous Region

Li Wenzheng,Qu Yuanyuan,Li Tingting,Kang Xiaojing.Department of Dermatology and Venereology,People′s Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region,Urumqi 830000,China
< class="emphasis_italic">Corresponding author:Li Wenzheng,Email:pfklqr@163.com

Li Wenzheng,Email:pfklqr@163.com

Objective To assess the association between HLA-DQA1 alleles and systemic lupus erythematosus（SLE）in populations of Uygur nationality in Xinjiang Uygur Autonomous Region.MethodsPolymerase chain reactionsequence-specific primers（PCR-SSP）were used to analyze the HLA-DQA1 gene in 56 patients with SLE and 54 unrelated healthy controls of Uygur nationality in Xinjiang Uygur Autonomous Region.ResultsCompared with the healthy controls,the SLE patients showed significantly increased frequency of HLA-DQA1*0302（χ2=10.032,P=0.004）,but decreased frequency ofHLA-DQA1*0101（χ2=5.676,P=0.017）.ConclusionHLA-DQA1*0302 may be a susceptibility gene,while HLA-DQA1*0101 may be a protective factor for SLE in populations of Uygur nationality in Xinjiang Uygur Autonomous Region.

Lupus erythematosus,systemic;HLA antigens;Gene frequency;Uygur nationality;Environment

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2015.10.017

新疆維吾爾自治區衛生廳青年科技人才專項基金（2007Y28）

830000烏魯木齊，新疆維吾爾自治區人民醫院皮膚性病科

李文政，Email：pfklqr@163.com

2014-12-11）

（本文編輯：吳曉初）