速效牙痛寧酊中芫花酯甲的限量測定

杜仙娥 付聯(lián)群

（湖北省荊門市第二人民醫(yī)院，湖北 荊門 448000）

速效牙痛寧酊中芫花酯甲的限量測定

杜仙娥 付聯(lián)群

（湖北省荊門市第二人民醫(yī)院，湖北 荊門 448000）

目的 研究速效牙痛寧酊中芫花酯甲的限量測定方法。方法 采用Agilent HC-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈：0.01%醋酸溶液為流動相，采用梯度洗脫，流速1.0 mL/min，柱溫35 ℃，檢測波長238 nm，芫花酯甲在7.50～150.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系（r=0.9999），平均加樣回收率為98.9%，RSD為1.09%。結(jié)果 經(jīng)HPLC測定其芫花酯甲的含量為5.02 μg/mL對10批制劑進(jìn)行檢測其含量均＜6.0 μg/mL。 結(jié)論 本方法靈敏度高、準(zhǔn)確、重復(fù)性好、專屬性強(qiáng)，可用于測定速效牙痛寧酊中芫花酯甲的限量。

芫花酯甲；速效牙痛寧酊；限量測定

速效牙痛寧酊為原衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第17冊（WS3-B-3315-98）收載。本方由芫花根、地骨皮兩味草藥組成。具有活血化瘀，理血止痛。用于風(fēng)蟲牙痛，齲齒性急、慢性牙髓炎，牙本質(zhì)過敏，楔狀缺損［1］。原標(biāo)準(zhǔn)中只有理化鑒別和檢查項，缺乏對制劑中藥材的定性定量控制，無法對制劑原料藥材進(jìn)行品質(zhì)管控，制劑工藝的科學(xué)性和穩(wěn)定性無法提供科學(xué)依據(jù)，更是無法控制成品的內(nèi)在質(zhì)量，臨床用藥療效及安全得不到保障。本制劑在使用過程中未見不良反應(yīng)。芫花根為瑞香科植物芫花Daphne genkwa Sieb.et Zucc.的干燥根，用于治療水腫等，外用可用于治療風(fēng)火牙痛。但芫花根具有一定毒性，在本制劑中應(yīng)嚴(yán)格控制其毒性成分——芫花酯甲的含量。有報道在臨床應(yīng)用芫花根的時候可以去除體積較大的木心，直接應(yīng)用根皮，或用水浸漬后再使用［2］。為了提高本制劑用藥的安全性，有必要對痕量毒性成分芫花酯甲進(jìn)行限量檢查，本實(shí)驗(yàn)建立了速效牙痛寧酊中芫花酯甲含量的快速測定方法。

表2　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

1　儀器與試藥

Dionex-U3000液相色譜儀（Dionex公司，Dionex Chemeleon色譜工作站）；Mettler Toledo MS104S型電子天平（d=0.01 mg，瑞士Mettler Toledo）公司；芫花酯甲對照品（中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所提供，紫外、紅外、1H- NMR、13C- NMR鑒定結(jié)構(gòu)，HPLC檢測純度均＞98%，符合含量測定的要求）；速效牙痛寧酊及缺芫花根的陰性對照樣品（自制，規(guī)格：50毫升/瓶）乙腈（天津大茂，色譜純）；水為雙蒸水；其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1對照品溶液的制備：取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥至恒重的芫花酯甲對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含15.8 μg的溶液，即得。

2.2供試品的制備：精密量取速效牙痛寧酊10 mL搖勻，微孔濾膜濾過（孔徑0.22 μm），取續(xù)濾液，即得。同法制得不含芫花根的陰性對照樣品。

2.3系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)與色譜條件：采用以乙腈：0.01%醋酸溶液為流動相，采用梯度洗脫［3-5］，色譜柱為：Agilent HC-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流速1.0 mL/min，柱溫35 ℃，檢測波長238 nm，進(jìn)樣量為：10 μL，在此色譜條件下，芫花酯甲色譜峰理論板數(shù)不小于4000，分離度＞1.5。色譜圖見表1和圖1。

2.4線性關(guān)系、檢測限及定量限考察：精密吸取對照品溶液0.5、1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 mL分別置10 mL量瓶中，加流動相稀釋并定容至刻度，搖勻，得到濃度為0.79、1.58、3.16、7.90、12.64、15.80 μg/mL的芫花酯甲的對照品溶液。分別精密吸取10 μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定色譜峰面積，以濃度（X）對峰面積（Y）進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為：Y=2.1156X+0.5483，r=0.9999；結(jié)果表明芫花酯甲在0.79～15.80 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。根據(jù)信噪比S/N=3確定芫花酯甲檢測限為0.08 μg/mL，根據(jù)信噪比S/N=10確定芫花酯甲定量限為0.27μg/mL。

2.5精密度試驗(yàn)

表3　樣品測定結(jié)果（n=4）

表1　梯度洗脫程序

圖1　色譜圖

2.5.1日內(nèi)精密度：分別精密吸取芫花酯甲低、中、高濃度對照品溶液（0.79、3.16、15.80 μg/mL）10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，RSD分別為1.62%、1.24%、1.58%（n=5），日內(nèi)精密度試驗(yàn)良好。

2.5.2日間精密度：分別精密吸取低、中、高濃度（濃度同日內(nèi)精密度）對照品溶液各10 μL，每日進(jìn)樣3次，連續(xù)進(jìn)樣3 d，記錄峰面積，RSD分別為1.89%、2.02%、1.76%（n=5），日間精密度試驗(yàn)結(jié)果符合規(guī)定。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)：取已制備好的速效牙痛寧酊供試品溶液，室溫下分別在0、3、6、12、24 h進(jìn)樣測定，記錄色譜峰面積，計算其RSD為1.86%，表明處理后的速效牙痛寧酊供試品溶液室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批速效牙痛寧酊樣品（批號20130708）6份，精密稱定，按上述方法制備供試品溶液，依法測定，結(jié)果芫花酯甲的平均含量為5.02 μg/mL，RSD為1.29%。

2.8加樣回收率試驗(yàn)：稱取重復(fù)性實(shí)驗(yàn)已測定含量的速效牙痛寧酊樣品（批號20130708）9份，每份5.0 mL，置10 mL量瓶中，分別加入芫花酯甲對照品溶液（濃度15.80 μg/mL）1.0、1.5、2.0 mL（3種不同水平，各3份），加甲醇至刻度，搖勻，按上述方法同法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μL。按外標(biāo)兩點(diǎn)法計算芫花酯甲含量，結(jié)果見表2。

2.9限量測定：按上述色譜條件對5批樣品進(jìn)行含量測定，結(jié)果見表3。

3　討 論

芫花始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》具有瀉水逐飲、解毒殺蟲的功效。因毒性較強(qiáng)，古代一直以其炮制品入藥?；瘜W(xué)成分研究表明，芫花根主要含有黃酮、香豆素和萜類化合物?，F(xiàn)代藥理研究表明，芫花根中的二萜原酸酯類化合物——芫花酯甲為其瀉下逐水和不良反應(yīng)的主要組分，該成分具有強(qiáng)烈的刺激性，對皮膚、黏膜系統(tǒng)有較大的毒害作用［6］。因此通過對芫花根及其制劑中芫花酯甲的含量測定可以有效的控制其質(zhì)量和保證臨床用藥的安全性。芫花及芫花根經(jīng)炮制后芫花酯甲含量下降很多，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，醋煮品中芫花酯甲含量下降為最多，為其降低毒性的最佳炮制方法。

目前，市場上含芫花及芫花根的制劑中均為規(guī)定芫花酯甲的含量限度。給用藥安全留下了很大的隱患，建議國家藥典委員會及相關(guān)藥監(jiān)部門制定相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)［7］。本文速效牙痛寧酊中芫花酯甲的檢測限為5.02 μg/mL，主要用法為外用適量，涂擦患牙處，或用藥棉蘸取藥液1～2滴塞入齲齒窩內(nèi)。避免了內(nèi)服造成的用藥風(fēng)險。鑒于目前均無芫花酯甲的含量限度規(guī)定，且本制劑一直沿用至今尚無不良反應(yīng)報道，因此本文暫定速效牙痛寧酊中芫花酯甲的檢測限為6.0 μg/mL。結(jié)果表明，本方法準(zhǔn)確、簡單、重現(xiàn)性好、操作簡便。

［1］衛(wèi)生部藥典委員會.WS3-B-3315-98中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)［S］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1998.

［2］應(yīng)百川，王成瑞，周炳南，等.芫花根有效成分的研究［J］.化學(xué)學(xué)報，1975，35（1）：103-107.

［3］韓偉，章軍，吳立軍，等.芫花根質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2009，16（8）：45-46.

［4］黃蘭嵐，李嬈嬈，原思通，等.不同產(chǎn)地芫花藥材中芫花酯甲含量比較［J］.中成藥，2008，30（10）：附10-12.

［5］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：148.

［6］馬天波，劉思貞，徐國永，等.芫花條化學(xué)成分的研究［J］.中草藥，1994，25（1）：7.

［7］林武俊，陳小玉，劉可福.跳骨片中馬兜鈴酸的限量測定［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2014，10（10）；37-38.

282.710.5

B

1671-8194（2015）27-0050-03