前列地爾注射液對急性腦梗死患者血清一氧化氮 丙二醛 超氧化物歧化酶與過氧化氫酶變化的影響

顏瑋茹 廖春梅

廣西桂林市人民醫院綜合內科 桂林 541002

腦梗死缺血和再灌注后使神經細胞的炎癥級聯反應加重，但因神經元自身的因素和血流停滯或再灌注的時間位點不同，故在其進程中會有少數幾個機制在某一階段發揮主導作用。近年研究發現缺血性腦血管疾病的白質病變與脂質過氧化損傷密切相關［1］。本文從分子水平研究急性腦梗死患者使用凱時注射液后血清一氧化氮、丙二醛、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶的變化，有助于發現腦梗死后腦神經組織的保護方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2005－01—2014－06我院120例急性腦梗死患者為研究對象，隨機分為實驗組60例，男30例，女30例，平均年齡（60.32±8.87）歲；對照組60例，男29例，女31例，平均年齡（60.01±9.00）歲；選取同期健康體檢者60 例為健康組，男32例，女28例，平均年齡（59.91±9.52）歲；用于檢測血清一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）水平。各組年齡和性別差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 入選標準 所有病例均按照第4屆腦血管病會議修訂的診斷標準，并達到以下標準：（1）首次發生腦梗死的患者；（2）腦梗死發生時間≤24h；（3）經頭部CT 或MRI證實；（4）簽署知情同意書。

1.3 排除標準 （1）腦梗死溶栓的患者；（2）短暫性腦缺血發作患者；（3）合并嚴重心、肝、腎及血液系統疾病的患者；（4）嚴重難治性高血壓，收縮壓＞200 mmHg（1 mmHg＝0.133kPa），舒張壓＞110mmHg；（5）CT 示腦出血或血小板＜60×109／L；（6）在發病時或近期經臨床或實驗室證明患者伴有炎癥性或感染性疾病，并正應用抗炎藥物治療。

1.4 治療方案 實驗組用前列地爾注射液（商品名：凱時，由北京泰德制藥有限公司出產，2mL：10μg／支，批準文號：國藥準字H10980024 號）20μg／d加 入 生 理 鹽 水250 mL 靜 滴，1次／d，連續應用10d。對照組用丹參注射液（10mL／支，由正大青春寶藥業有限公司出產，批準文號：國藥準字Z3302001號）20mL／d加入生理鹽水250mL靜滴，1次／d，連續應用10 d。2組患者均予以常規治療，如阿司匹林100mg／d抗血小板聚集，營養神經、腦保護，控制血壓及康復治療等。

1.5 觀察指標

1.5.1 實驗室檢查：2組于用藥前（發病后12～24h）及治療后的第3、7天分別檢測血清NO、MDA、SOD、CAT 水平。所有研究對象均在晨醒5min內抽肘靜脈血5mL，在4℃條件下，3 000r／min 離心15 min，收集上層血清3 mL，放置于－40 ℃冰箱低溫保存，標本收集完成后由專人一次性檢測。血清NO 采用硝酸還原酶比色法；血清SOD 測定采用黃嘌呤氧化酶法；MDA 測定采用硫代巴比妥酸法；CAT 測定采用可見光分度法測定，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.5.2 腦梗死灶體積：2組于發病當日及發病后第10天分別行頭顱CT 檢查測算腦梗死灶體積（腦梗死體積測定：根據多田計算公式：π／6×短軸×長軸×層面厚度）。

1.6 統計學處理 采用SPSS 13.0統計軟件進行統計學分析，計量資料以均數±標準差表示，多個樣本均數比較用單因素方差分析，組間兩兩比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組治療前NO、MDA、SOD、CAT 指標比較 見表1。2組患者治療前NO、MDA 水平均明顯高于健康組，差異有統計學意義（P＜0.01）；2 組患者治療前SOD、CAT 水平均明顯低于健康組，差異有統計學意義（P＜0.01）；但2組患者NO、MDA、SOD、CAT 水平差異無統計學意義（P＞0.05）。

表1 3組治療前NO、MDA、SOD、CAT 指標比較

表1 3組治療前NO、MDA、SOD、CAT 指標比較

注：與健康組比較，▲P＜0.01；與對照組比較，★P＞0.05

組別 n （μm N ol O／L） （nm M ol D／A mL） （k SUO／D L） （k CUA／TL）健康組60 70.6±18.1 5.0±1.0 107.0±16.4 62.33±7.28對照組 60 191.3±12.7▲ 14.5±1.7▲ 47.8±14.6▲ 30.93±5.54▲實驗組 60 189.6±13.5▲★ 14.1±1.2▲★ 47.2±12.5▲★ 30.02±4.98▲★

2.2 2組治療前后NO、MDA、SOD、CAT 指標比較 見表2。對照組NO、MDA 治療后3d、7d與治療前均無明顯變化，差異無統計學意義（P＞0.05）；實驗組治療后3d、7d均低于治療前，差異有統計學意義（P＜0.05）；實驗組治療后7 d均低于治療后3d，差異有統計學意義（P＜0.05）。對照組SOD、CAT 治療后3d與治療前無明顯變化，差異無統計學意義（P＞0.05）；而治療后7d均高于治療前，差異有統計學意義（P＜0.05）；實驗組SOD、CAT 治療后3d和7d與治療前和對照組比較均明顯升高，差異有統計學的意義（P＜0.05）；實驗組治療后7d和治療后3d對比呈升高趨勢，差異有統計學的意義（P＜0.05）。

表2 2組治療前后NO、MDA、SOD、CAT指標比較

表2 2組治療前后NO、MDA、SOD、CAT指標比較

注：與對照組比較，▲P＜0.05；與治療前比較，★P＜0.05；與治療后3d比較，●P＜0.05

組別 時間 （μmNolO／L）（nmMolD／A mL ）（kSUO／DL） （kCUA／TL）治療前191.3±12.7 14.5±1.7 47.8±14.6 30.93±5.54治療后3d 189.2±11.3 13.3±2.1 51.42±10.24 33.67±5.26對照組 治療后7d 186.6±10.8 14.1±2.9 76.13±9.96★45.36±4.35★治療前 189.6±13.5 14.1±1.2 47.2±12.5 30.02±4.98實驗組 治療后3d 156.7±10.7▲★ 10.3±1.9▲ 87.2±8.3▲★51.36±5.83▲★治療后7d 106.8±9.6▲★●6.7±1.5▲★●111.2±7.1▲★●60.37±6.61▲★●

2.3 2組治療前后腦梗死體積變化比較 見表3。2組用藥前后腦梗死體積比較無顯著性差異（P＞0.05），但實驗組腦梗死體積縮小程度較對照組明顯（P＜0.05）。

表3 2組治療前后腦梗死體積變化比較

表3 2組治療前后腦梗死體積變化比較

注：與對照組比較，▲P＜0.05

組別 n 治（c療m3前）治（c療m3后）治療（c前m3后）差對照組60 2.58±2.26 2.39±2.15 0.19±0.22實驗組 60 3.19±3.56 2.83±2.16 0.42±0.15▲

2.4 不良反應 實驗組1例出現注射部位疼痛、發紅，經對癥處理后好轉，無1例發生嚴重不良反應。

3 討論

急性腦梗死造成腦組織缺血和再灌注損傷后，產生大量自由基，引起脂質、核酸和蛋白質過氧化反應，細胞膜最終被破壞。腦缺血損傷的主要致病因素是氧自由基尤其是超氧陰離子，故控制氧自由基對延緩腦梗死病情發展及改善預后有重要意義。凱時可能是由有機陰離子運輸多肽介導通過血腦屏障（BBB）［2］，具有靶向性，使顱內痙攣血管靶向擴張，并增加側支循環，改善梗死區半暗帶血流量，恢復部分受損神經細胞功能；抑制血小板的聚集，刺激血管內皮細胞產生t－PA，并可減少自由基的生成，阻止自由基引發的脂質過氧化反應。本研究中2組腦梗死患者與正常健康人相比NO和MDA 濃度明顯升高，這表明缺血缺氧已啟動自由基損傷過程，與Aygul［3］、張國棟等［4］報道一致。在腦梗死中NO 的作用具有雙重性。在急性局灶性腦缺血時，早期時由內皮型一氧化氮合酶（eNOS）合成的NO 有神經細胞保護作用，而在中后期，由誘生型一氧化氮合酶（iNOS）合成的NO 有神經毒性作用，主要介入遲發性神經元損傷。本研究從患者就診時間推測，此時相的NO 生成可能由iNOS催化合成，凱時治療后患者血漿中NO 含量顯著降低，說明凱時可能通過抑制中后期iNOS的活性調節NO 含量，減輕其神經細胞毒性作用，是其治療急性腦梗死的藥理機制之一。MDA 是氧自由基與生物膜不飽和脂肪酸發生脂質過氧化反應的代謝產物，是反映自由基濃度和脂質過氧化程度的重要指標［5］，常與反映機體清除自由基能力的超氧化物岐化酶（SOD）配伍檢測［6－7］。故研究腦組織缺血再灌注損傷時，檢測血清中MDA水平有重要臨床意義。NO 通過與超氧陰離子O2發生反應，過氧化亞硝酸（ONOOH）生成，從而誘發脂質過氧化。本研究NO 的變化趨勢與MDA 相同，證實了NO、脂質過氧化與MDA 間存在因果關系。研究中的患者均未能行早期溶栓治療，血漿NO、MDA 在實驗組明顯下降，且脂質過氧化產物減少，腦梗死體積變化也較對照組明顯改善；分析與凱時清除NO、MDA 及其他自由基，減輕缺血半暗帶區域的自由基損傷，提高抗氧化能力，從而減小梗死體積有關；與治療3d時相比，治療7d時NO 和MDA 進一步降低，表明凱時抑制一氧化氮合酶激活作用和MDA 的產生與治療時間成正比，后續研究將進一步觀察凱時在更長療程的作用。

研究發現，通過減少自由基的產生或增強清除自由基的能力可以起到保護腦神經組織的作用［8］。SOD 是一種金屬蛋白酶，可以歧化O2為H2O2，后者再由過氧化氫酶作用變為H2O［9］，在生物體內能清除氧自由基，保護生物體免受自由基的攻擊。SOD 活力的高低間接反映了機體清除氧自由基的能力。CAT 是細胞內活性氧清除系統的重要組成成分，能將H2O 分解成無毒的水及分子氧，并保護SOD 不被自由基滅活，對維持細胞活性氧代謝起著重要作用［10］。當BBB完整性遭到破壞時，CAT 能夠進入中樞神經系統，從而使中樞神經系統免受活性氧簇（ROS）誘導損傷，降低腦神經組織氧化損傷。本研究中2組腦梗死患者與正常健康人相比SOD 和CAT 濃度明顯降低；實驗組與對照組相比，隨治療的時間延長SOD、CAT 明顯升高，同時明顯降低MDA 和NO 水平。提示腦梗死患者增強了脂質過氧化反應，加重氧自由基損傷神經細胞；凱時促進SOD 和CAT 的釋放，減少H2O2含量，同時降低NO、MDA 的產生，從而脂質過氧化反應被抑制，由氧自由基誘導的神經細胞損傷被減輕。

綜上所述，腦梗死與血清NO、MDA、SOD、CAT 水平密切相關，故NO、MDA、SOD、CAT 可能涉及腦梗死的發生、發展，進一步研究尚需開展。凱時對急性腦梗死患者的保護作用是通過降低患者血清中NO 和MDA 含量，并增強CAT 和SOD活性，而在整個治療過程中未發現明顯不良反應。

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