4種梅毒血清學檢測方法的臨床應用及評價

王佳 王媛

【摘要】 目的 探究4種梅毒血清學檢測方法的臨床應用效果。 方法 2013年12月-2014年12月我院所有送檢的1000例標本用TP - ELISA法篩查，其中47例陽性標本同時進行 TPPA 、RPR，TP-AD的檢測。 結(jié)果 1000例標本首先用TP - ELISA法進行檢測，檢出陽性標本47例，檢出率為4.7%。 以TPPA檢測的結(jié)果與RPR法和TP-AD進行比較，TP-AD與TPPA比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），TPPA法與RPR法比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。 結(jié)論 建議4種方法的檢測順序為，ELISA試驗進行初篩，陽性標本用TP-AD比對，根據(jù)需要再進一步做TPPA與RPR進行確診和病程監(jiān)測。

【關(guān)鍵詞】梅毒血清學；檢測方法；臨床應用；評價

【中圖分類號】R759.1 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2015）03-0596-02

梅毒是由蒼白螺旋體引起的一種性傳播疾病，具有高度的傳染性和致病性。所以選擇簡單、快速、準確的檢測方法對該病的早期診斷及疾病控制有著重要意義[1]。本研究對臨床常用的梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP - ELISA）、 TPPA 、RPR和梅毒螺旋體抗體檢測-乳膠法（TP -AD）4種方法進行比較，現(xiàn)將研究結(jié)果總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源：標本均來自于2013年12月-2014年12月我院1000例門診與住院患者，包括了行體檢的健康孕、產(chǎn)婦的人群。

1.2 儀器：DNM960Z-G酶標儀，DEM-3自動洗板機。

1.3 試劑：TP - ELISA試劑盒由廈門英科新創(chuàng)科技有限公司生產(chǎn)，TPPA試劑盒由日本富士瑞必歐株式會社生產(chǎn)，RPR試劑盒由上海榮盛生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，TP -AD試劑盒由杭州艾博生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)。

1.4 檢驗方法：所有送檢的1000例標本用TP - ELISA法篩查，其中47例陽性標本同時進行 TPPA 、RPR、TP-AD的檢測。（1）TP - ELISA：為雙抗原夾心一步法用DNM960Z -G酶標儀檢測， 標本A 值≥cut off值為陽性。（2）TPPA：取待測血清 25ul加入標本稀釋液100ul，混勻備用，使用特定的微孔板，先在選定孔中每孔加入25ul稀釋液，加入標本混合液行倍比稀釋（1：2 、1：4、1：8、1：16 、1：32稀釋），另設(shè)一孔作為對照孔僅加入50ul稀釋液，再在每孔包括對照中加入TPPA試劑 25ul，充分混勻后于室溫15℃-15℃封閉靜置2h后觀察結(jié)果。每批標本操作時應同時取陰陽性質(zhì)控按同樣方法同時檢測以保證結(jié)果可靠。（3）RPR：在卡片規(guī)定的圓圈內(nèi)加入50ul待測血清，用專用針頭和滴管加抗原懸液1滴，轉(zhuǎn)動卡片8min。出現(xiàn)黑色凝集為陽性?？砂葱枰詷颖鞠♂屢夯驘o菌生理鹽水作樣本1：2 、1：4、1：8、1：16 、1：32稀釋后再行檢測以作半定量報告。（4）TP -AD：將試劑置于平坦的臺面上，垂直滴加2滴標本置于加樣區(qū)，再加1滴緩沖液，同時計時，等待紅色帶出現(xiàn)，10-30min內(nèi)判斷。具體操作方法嚴格按照各個試劑盒的要求進行，標準的判斷也依據(jù)試劑盒提供的標準進行判斷。

1.5 統(tǒng)計學方法：以TPPA的結(jié)果與 RPR和TP-AD的結(jié)果進行比較，采用卡方檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。乳膠法P>0.05為差異無統(tǒng)計學意義，RPR法 P<0.01為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果 1000例標本首先用TP - ELISA法進行檢測，檢出陽性標本47例，檢出率為4.7%。 檢出的47例陽性標本同時做TPPA和 RPR 、TP-AD的檢測，結(jié)果TPPA陽性46例，符合率97.87% ，RPR檢出陽性23例，符合率48.93%。TP-AD出陽性45例，符合率95.74%。以TPPA檢測的結(jié)果與RPR法和TP-AD進行比較，經(jīng)過統(tǒng)計學處理，TP-AD與TPPA比較差異無統(tǒng)計學意義（χ2=2.168，P>0.05），TPPA法與RPR法比較差異有統(tǒng)計學意義（χ2=87.679，P<0.01）。詳見表1。

表1 陽性標本的幾種方法檢測結(jié)果比較

3 討論

在本研究中，1000例標本采用用TP - ELISA法進行檢測，檢出陽性標本47例，檢出率為4.7%，低于徐曉琴等[2]報道的6.07%，推測結(jié)果的差異性在于與浙江等沿海地區(qū)相比，四川瀘州地區(qū)處于內(nèi)陸地區(qū)，其經(jīng)濟大大落后于浙江，且標本中部分是孕、產(chǎn)婦及健康人群的體檢標本，因此發(fā)生率偏低。

本研究采用的檢測方法中，TPPA具有高靈敏度、高特異性、高準確度的特點，但由于操作較繁雜，試劑較昂貴，結(jié)果判斷不易自動化，因而受限于醫(yī)院大規(guī)模的篩查檢測，適用于作為確診試驗。TP-AD用于定性檢測人全血、血清和血漿樣本中的梅毒螺旋體抗體，是特異性抗體的檢測。該法采用高特異性抗原抗體反應原理及乳膠標記免疫層析分析技術(shù)， 操作簡單、方便，檢測結(jié)果出現(xiàn)快速、準確。RPR在梅毒螺旋體感染的不同時期檢出率差別較大，在梅毒感染的最初4周內(nèi)，由于機體產(chǎn)生的反應素量不足，一般為陰性，不易被RPR法檢出。因此，在本研究中，TP-AD與TPPA比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），TPPA法與RPR法比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。

綜上可知，結(jié)合上面的分析，4種方法各有所長[3]。TP - ELISA靈敏度高，特異性好，適用于大批量的篩查工作，TPPA特異性高、準確性好，被公認為確診試驗，RPR干擾因素多及病程對其有影響較大，適用于病程監(jiān)測及療效觀察。TP-AD操作簡單，不需特殊儀器，可作為定性試驗及方法的比對。建議4種方法的檢測順序為：ELISA試驗進行初篩，陽性標本用TP-AD比對，根據(jù)需要再進一步做TPPA與RPR進行確診和病程監(jiān)測。

參考文獻

[1]顧偉鳴，楊陽，吳磊等.梅毒血清學試劑性能評估方案的優(yōu)化及應用[J].檢驗醫(yī)學，2014，（11）：1169-1174.

[2]徐曉琴，傅更鋒，張之等.梅毒血清學陰性者性行為特征和梅毒血清學復核結(jié)果分析[J].中國麻風皮膚病雜志，2013，29（10）：669-670.

[3]武強，王妹芳，張群峰等.梅毒血清學新篩查模式的可行性評價[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2012，22（17）：3770-3771，379病例報告2015年第3期2015年第3期