免疫磁性分離技術(shù)在食源性疾病檢測中的應(yīng)用

程志杰

【摘? 要】免疫磁性分離技術(shù)的基礎(chǔ)為具有特性的病原抗體反應(yīng)，是綜合磁載體技術(shù)和免疫學(xué)的一項新技術(shù)，其特點表現(xiàn)為儀器設(shè)備便宜、強特異性、樣品分離速度快、操作簡單等，在病原體檢測和細胞分離領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，本文主要對免疫磁性分離技術(shù)在食源性疾病檢測中的應(yīng)用給予探討，分析內(nèi)容包括寄生蟲檢測、病毒檢測、細菌檢測等。

【關(guān)鍵詞】食源性疾病檢測;免疫磁性分離;寄生蟲;病毒;細菌

磁性微球?qū)儆诖判怨δ懿牧希浣M成部分為磁性內(nèi)核和高分子外科，磁性微球可以與多種物質(zhì)發(fā)生偶聯(lián)，比如核酸、抗原、抗體等，在反應(yīng)體系中，可以對相應(yīng)的核酸、抗原、抗體進行有效識別，進而實現(xiàn)高效分離與檢測。免疫磁性技術(shù)的載體為抗體包被的磁珠，在反應(yīng)介質(zhì)中抗體與具有特異性的抗原進行充分結(jié)合，進而形成復(fù)合物抗原-抗體，在磁場作用下，此復(fù)合物可以實現(xiàn)定向移動，最終實現(xiàn)抗原分離。

一、在細菌檢測中免疫磁性分離技術(shù)的應(yīng)用分析

腸出血性大腸桿菌屬于大腸埃希氏菌，主要引發(fā)的疾病有腸炎和出血性腹瀉，其中代表菌株為O157H7血清型。世界衛(wèi)生組織已經(jīng)把E.coilO157H7列入28種傳染病病原體之中，成為公共衛(wèi)生監(jiān)控和食品安全監(jiān)控的重點工作。使用傳統(tǒng)方法對E.coilO157H7進行分離時，不僅分離時間長，且存在較多的雜菌干擾，對檢出率造成嚴(yán)重影響，其檢測水平也只是停留在200cfu/g。而在某項研究中，采用斑點免疫層析法首先快速篩選增菌液，此方法具有定性快速和高靈敏度的特點，在使用抗E.coilO157H7抗體，對磁珠進行包被，使其在增菌液中捕獲E.coilO157H7，對樣品中的其他雜菌和殘渣進行充分分離，具有較高的濃縮作用?；诎唿c免疫層析法的快速篩選，大大降低了免疫磁性分離技術(shù)的工作量，且沒有1例表現(xiàn)為假陰性，具有較高的靈敏度，檢出率明顯高于傳統(tǒng)分離法，將分離工作整整縮減了一個工作日。在檢測E.coilO157H7時，兩種方法的聯(lián)合使用，其優(yōu)點表現(xiàn)為高靈敏度、省時、快速等，完全符合與現(xiàn)階段的流行病學(xué)監(jiān)測工作。在某項研究中，研究人員充分結(jié)合免疫脂質(zhì)體熒光法和免疫磁珠，在8小時內(nèi)，順利完成整個分離過程，檢出限度為1cfu/mL，準(zhǔn)確率高達100%。

二、在病毒檢測中免疫磁性分離技術(shù)的應(yīng)用分析

病毒對人類健康具有嚴(yán)重危害性，其中最主要的食源性病毒就是諾如病毒，在不同年齡階段的人群中均會引發(fā)急性腹瀉，且諾如病毒流行較為廣泛，是預(yù)防檢測工作的重點。現(xiàn)階段，在體外增殖中還沒有適用性比較強的動物模型和細胞系，在臨床樣本諾如病毒的檢測中，RT-PCR得到了廣泛應(yīng)用，而在諾如病毒感染中病毒的實際含量非常少，檢測難度比較大，在使用RT-PCR之前，在對食物中諾如病毒進行濃縮和純化時，往往需要多種操作，在此眾多操作中，可能造成病毒的交叉感染和丟失。而在某項研究中，使用諾如病毒重組衣殼蛋白抗體對磁珠進行包被，首先對食物中的諾如病毒進行捕獲和濃縮，在使用RT-PCR給予檢測，在此檢測工作中，免疫磁珠法的優(yōu)點表現(xiàn)為耗時短、設(shè)備簡單、操作簡便，大大降低了RT-PCR中參雜的干擾物，完全適用于現(xiàn)階段的食品樣本檢測。

三、寄生蟲檢測中免疫磁性分離技術(shù)的應(yīng)用分析

隱孢子蟲病所引發(fā)的疾病為腹瀉，此原蟲病具有人畜共患性。對于水體消毒劑，隱孢子蟲所表現(xiàn)的抵抗力比較強，感染的引發(fā)只需要少量的卵囊就可以實現(xiàn)，經(jīng)證實，在引發(fā)人類感染方面，包含的隱孢子蟲有人隱孢子蟲和微小隱孢子蟲，因此，在檢測此類病原體時，檢測方法必須具有較高的靈敏度和特異性。在某樣本中，對低濃度微小隱孢子蟲卵囊進行檢測時，充分結(jié)合了免疫熒光顯微術(shù)和免疫磁性分離術(shù)，使檢測結(jié)果具有較高的敏感性。在某項研究中，采用免疫磁性分離法檢測水中隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲的影響因素進行了較為全面和深入的總結(jié)，他們指出，待測樣品中的顆粒物質(zhì)和溶解性物質(zhì)、卵囊和孢囊的濃度、育齡和活性等特征，以及磁珠添加比例、反應(yīng)時間、反應(yīng)體積等MS過程操作參數(shù)均會對MS回收率產(chǎn)生不同程度的影響。因此，通過適當(dāng)增加前處理操作，對MS各步驟進行參數(shù)優(yōu)化，并配合活性分析手段，能有效提高卵囊和孢囊檢測過程中MS環(huán)節(jié)回收率的精確度、穩(wěn)定性和靈敏度，對客觀評價水質(zhì)安全，控制隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲污染具有十分重要的意義。

結(jié)束語

總之，在食源性疾病的檢測中，免疫磁性分離技術(shù)的應(yīng)用，可以對樣品中的病原微生物進行有效收集和濃縮，在病原微生物富集方面優(yōu)勢顯著，不僅靈敏度高，還為今后醫(yī)學(xué)科研工作的發(fā)展奠定基礎(chǔ)。

參考文獻：

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