血漿miR—155在急性心肌梗死伴高血壓患者中的表達水平及臨床意義

楊占甲

【摘? 要】本文通過探討血漿microRNA-155（miR-155）在急性心肌梗死伴高血壓中的表達變化及臨床意義得到以下結論：血漿miR-155在急性心肌梗死伴高血壓患者血漿中表達升高且表達水平與冠狀動脈狹窄程度相關，提示血漿miR-155可能作為生物標志物用于臨床診斷及治療評價。

【關鍵詞】急性心肌梗死伴高血壓;血漿微小155;實時熒光定量PCR

Abstract：This paper discusses the plasma mirna - 155（miR - 155）in acute myocardial infarction with hypertension expression changes and clinical significance of get the following conclusion：The plasma miR - 155 in patients with acute myocardial infarction with hypertension expression increased in plasma and the expression level and the degree of the coronary artery stenosis，prompt plasma miR - 155 May be used as biomarkers in clinical diagnosis and treatment of evaluation.

Key words：acute myocardial infarction with hypertension Plasma tiny 155 Real-time fluorescent quantitative PCR

miRNA是一類生物進化高度保守、長度為21-26核苷酸的小分子非編碼單鏈RNA，通過對其靶基因的降解或轉錄后抑制調節基因表達，與生物個體發育、細胞分化增殖及腫瘤發生發展等生理病理方面具有重要生物學功能^[1]。

本實驗應用熒光定量PCR技術檢測急性心肌梗死伴高血壓患者血漿miR-155的表達水平，同時通過Gensini評分系統評價冠狀動脈狹窄程度，分析急性心肌梗死伴高血壓患者血漿miR-155與狹窄程度關系，探討血漿miR-155作為急性心肌梗死伴高血壓診斷和預后生物學標記物的可能性。

1材料與方法

1.1標本收集

選取2011年2月至2011年9月鄭州大學第一附屬醫院心內科急性心肌梗死伴高血壓患者30例為測定組，其中男性20例，女性10例，平均年齡60±5.87歲，AMI組及健康者為對照組，其中AMI組男性17例，女性13例，平均年齡59.05±6.94;健康對照組，男性9例，女性7例，平均年齡58.81±5.63。所以入選病人參照2010年ACC/AHA發布的心血管診療指南標準診斷。所有患者均簽署知情同意書，并獲得所在醫院倫理委員會批準。

1.2主要試劑及儀器

TRI REAGENTBD購自美國MRC Gene公司;RT反轉錄試劑盒購自日本TAKARA公司;熒光定量PCR試劑盒購自日本TAKARA公司;引物由廣州銳博生物有限公司合成。普通PCR儀采用美國Bio-Rad公司;NanoDrop2000c紫外分光光度計采用美國賽默飛世爾公司;Lightcycler1.5熒光定量PCR儀采用瑞士羅氏公司。

2.方法

2.1 總RNA提取：TRI REAGENTBD試劑從200ul血清中提取總RNA，實驗步驟嚴格按照實際說明書進行。NanoDrop2000c紫外分光光度計測定RNA的濃度和純度。選取A260/A280比值在1.8-2.1之間的樣品用于實驗。

2.2 逆轉錄（RT）：按照逆轉錄試劑盒說明書配20ul反應體系，反應條件為42 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s，轉錄得到cDNA用于qRT-PCR反應。

2.3 實時熒光定量PCR（real-time quantitative PCR，RT-qPCR）：反應體積為合成cDNA作為模板，按照qRT-PCR試劑盒說明書進行操作，反應條件為95℃30sec，1個循環;95℃5sec，60℃20sec為40個循環。反應結束后計算機自動得出各毛細管Ct值。

2.4 相對表達量計算：血漿miR-155的相對表達量采用2^-ΔΔCt方法計算，使用均數±標準差（±s）表示。

2.5 統計學分析：SPSS 17.0軟件采用Kruskal-Wallis秩和檢驗及AVONA方差分析對實驗結果進行統計處理，以P<0.05有統計學意義。

3.結果

3.1血漿miR-155在ACS組與對照組血漿中的表達：在qRT-PCR結果中，miR-328，miR155與U6均顯示出可靠的Ct值。結果如下：

（1）急性心肌梗死伴高血壓組血漿miR-155表達水平為（16.34±6.26），急性心肌梗死組血漿miR-155表達水平為（2.61±1.53），健康組血漿miR-155表達水平為（1.00±0.00）。三組間采用Kruskal-Wallis秩和檢驗進行分析顯示，血漿miR-155在急性心肌梗死伴高血壓組的表達高于對照組（P <0.05）。

3.2 血漿miR-155表達水平與冠狀動脈狹窄程度的關系

利用Gensini評分系統對冠狀動脈危險程度分為三組，A組表達量為（14.03±1.37），B組表達量為（16.57±0.73），C組表達量為（19.20±1.51），血漿miR-155在高積分組的表達量高于低積分組（P<0.05）。

4 討論

miRNAs是一類長度介于19-25個核苷酸的單鏈非編碼RNA，通過特異性與靶基因mRNA的3非編碼區結合^[2]，抑制靶基因的翻譯或促進靶基因降解，進而調控靶基因的表達，在細胞的增殖、分化、凋亡等方面發揮著重要作用。

急性心肌梗死發病率日益上升，具有發病率和死亡率高的特點。高血壓是導致AMI的危險因素之一，急性心肌梗死患者往往伴隨高血壓。本實驗血漿miR-155在急性心肌梗死伴高血壓患者血漿中表達升高且表達水平與冠狀動脈狹窄程度相關，提示血漿miR-155可能作為生物標志物用于臨床診斷及治療評。

miRNA主要通過與靶基因的非編碼區結合抑制翻譯來調控基因的表達，目前miRNA參與發病機制中的具體靶基因仍不清楚，我們將進一步的探索miR155在AMI伴隨高血壓病理生理調控網絡中的作用機制。

參考文獻：

[1]He L，Hannon GJ.MicroRNAs：small RNAs with a big role in gene regulation.Nat Rev Genet，2004，5（7）：522-531.

[2]Bartel DP.MicroRNAs：genomics，biogenesis，mechanism，and function.Cell，2004，116（2）：281-297.