飼用膽汁酸添加劑的亞慢性毒性試驗

鄭玲敏　陳航　周澤偉　王雨晶　王凱　魯倩倩　張雨梅

摘要：將飼用膽汁酸按0、60、600、3000mg/kg添加于飼料中喂養Wistar大鼠90d，每周稱量大鼠體質量與飼料消耗，并在喂養45、90d時剖檢，分別進行血液細胞學、血液生化指標檢測，計算主要臟器系數并進行組織病理學檢查。結果表明，大鼠飼喂低、中、高劑量膽汁酸后平均飼料消耗、體質量增重、臟器系數、血液細胞學指標、大體解剖及組織病理學檢查結果與對照組無顯著差異。中劑量組血液生化指標除了喂養45d時GLU、TG以及喂養90d時TG稍低于對照組外，其他指標與對照無顯著差異。飼用膽汁酸飼料添加劑在3000mg/kg添加量時，對大鼠喂養90d未觀察到明顯的有害作用。

關鍵詞：大鼠；膽汁酸；飼料添加劑；亞慢性毒性；臨床應用；安全劑量

中圖分類號：S816.73 文獻標志碼：A 文章編號：1002-1302（2015）05-0222-04

膽汁酸是在肝臟中合成的具有同類結構的大分子，是膽汁的主要成分，在促進脂類消化、膽固醇代謝方面有著極為重要的作用。膽汁酸進入小腸后，乳化并水解脂肪為脂肪酸、甘油，并通過肝腸循環被重新吸收。膽汁酸可以促進膽汁分泌。研究發現，膽汁酸還是一類信號分子，可介導多種細胞信號的傳導，包括參與鈣動員、環磷酸腺苷合成、蛋白激酶C易位和活性。膽汁酸的TGR5細胞表面受體廣泛分布于褐色脂肪組織、免疫系統、骨骼肌、神經組織、腸內膜等眾多組織中，參與能量代謝、炎癥反應的信號傳導途經。膽汁酸對膽固醇、具有潛在毒性的外源性物質和代謝產物的排泄和生物轉化具有重要作用。飼料中添加膽汁酸不僅可以活化脂肪酶、促進脂肪乳化、提高脂肪在腸道中的消化吸收率，還可以幫助機體排出有害物質、提高動物免疫功能、促進動物攝食、提高餌料效率、降低飼養成本，從而改善動物生產性能。筆者通過大鼠亞慢性試驗，考察膽汁酸較長時間應用時大鼠是否存在不良反應，旨在為膽汁酸作為飼料添加劑的臨床應用提供依據。

1.材料與方法

1.1材料

4周齡Wistar大鼠（清潔級），雌雄各40只，由揚州大學比較醫學中心提供。動物生產許可證號：SCXK（蘇）2012-0004，使用許可證號：SYXK（蘇）2012-0029。大鼠飼喂經60Co照射的飼料，自由采食、飲水，所飲水為符合城市飲用水標準的自來水，試驗前在試驗環境中適應5d。飼用膽汁酸呈白色粉末狀，膽汁酸總量>95%，批號20130428，由某動物保健品有限公司提供。

1.2受試物劑量及染毒途經

添加飼用膽汁酸于飼料中，經飼料加工廠制成藥料，飼喂90d。添加量分為3000、600、60mg/kg高、中、低3個劑量組；對照組飼喂大鼠常規飼料。大鼠隨機分為4組，每組20只，雌雄各半。

1.3觀察指標

試驗期間觀察大鼠的行為及飲食，每周稱量體質量、飼料消耗。分別在喂養45、90d時進行大體解剖，每組10只大鼠（雌雄各5只），分別取抗凝血進行血液細胞學檢測。取血清樣品進行谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（CHO）、葡萄糖（GLU）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）等血液生化指標的檢測。稱量心、肝、脾、肺、腎、卵巢子宮、睪丸附睪質量，計算臟器系數。對肝、腎、脾、肺、十二指腸、睪丸、子宮等主要臟器進行組織病理學檢查。

1.4數據處理

采用SPSS19.0軟件處理數據。

2.結果與分析

試驗期內未發現飼用膽汁酸試驗組大鼠有異常行為及表現，體質量、飼料消耗、臟器系數、血液學指標等見表1至表8。大鼠飼喂低、中、高劑量膽汁酸后平均飼料消耗、體質量增重、臟器系數、血液細胞學指標、大體解剖及組織病理學檢查結果與對照組無顯著差異。中劑量組血液生化指標除了喂養45d時GLU、TG，喂養90d時TG稍低于對照組外，其他指標與對照無顯著差異。

3.結論與討論

本研究表明，飼用膽汁酸飼料添加劑在3000mg/kg添加量時，對大鼠喂養90d未觀察到明顯的有害作用。如果在60mg/kg推薦水平使用，臨床應用應該是安全的。亞慢性毒性是指試驗動物連續多日接觸較大劑量的外來化合物所出現的中毒效應，試驗目的是觀察不同劑量外源物質長期飼喂動物產生的毒性作用性質及靶器官，并制定安全使用劑量。正常情況下動物血液生理生化指標維持動態平衡，當動物受生物、化學、應激等因素影響時，血液生理生化指標就會發生相應的變化。血液生理生化指標是反映外來物質對機體毒性作用程度的關鍵指標。本研究表明，中劑量組血液生化指標除了喂養45d時GLU、TG，喂養90d時TG稍低于對照組外，其他指標與對照無顯著差異。膽汁酸中劑量組的GLU、TG數值均在Wistar大鼠正常生理指標范圍內。endprint