衡陽紅花油茶炭疽病的初步研究

宋光桃

（湖南環境生物職業技術學院園林學院，湖南衡陽 421005）

衡陽紅花油茶炭疽病的初步研究

宋光桃

（湖南環境生物職業技術學院園林學院，湖南衡陽 421005）

衡陽近年來紅花油茶葉部病害為害較重，為此研究了其病原特征與有效生物防治菌株。通過病原菌分離培養與形態觀察，初步鑒定其為炭疽菌；通過對峙培養法以16株土壤拮抗放線菌對其進行抑菌活性的測定，結果表明所有拮抗放線菌株對該病原菌的抑菌效果都很明顯，抑菌帶寬度都大于15.0 mm，其中菌株CF17拮抗效果最明顯。

紅花油茶；炭疽病菌；拮抗放線菌

紅花油茶為南亞熱帶樹種，其樹形優美，葉色深綠，可在園林中作觀賞花木種植，既可觀花又可觀果，其花大而多，紅艷美觀，花期長。衡陽市南效公園內栽培的觀賞紅花油茶，近年來發生的葉斑病較重，嚴重影響其觀賞價值，為了有效防治這種病害，對其發病原因和有效拮抗放線菌進行了初步研究，以供生產上參考。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1供試菌株

紅花油茶炭疽病菌：從衡陽市南效公園紅花油茶植株病葉上分離。

拮抗放線菌：湖南環境生物職業技術學院植物保護實驗室分離保存［1-2］。具體測試菌株見表1。

表1　供試拮抗放線菌匯總

1.1.2培養基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基（PDA）：用于紅花油茶炭疽病菌的分離、純化及保存。

高氏1號培養基：用于拮抗放線菌菌株活化及菌種保藏。

1.2方法

1.2.1病原菌的分離

采用常規組織分離法分離紅花油茶病葉上的病原菌，將采集的新鮮紅花油茶病葉用自來水洗凈后，取病健組織先用70%酒精浸泡1 min，再用0.1%升汞浸泡1 min進行表面消毒，用無菌水沖洗3-4次后再用無菌干紗布吸取其表面水分，再用無菌刀片切取其病健交界處組織約2-3 mm2接入PDA平板上，在28℃下恒溫培養，得到的培養物經純化后保存備用，并制片在光學顯微鏡下觀察其形態特點。

1.2.2病原菌致病性的測定

將上述分離純化的培養物再接到PDA平板上，在28℃下恒溫培養，待產孢后加1%無菌葡萄糖溶液10m L浸泡15min后用無菌棉簽洗下菌絲體和孢子，并用無菌紗布濾去菌絲體，再用1%無菌葡萄糖溶液將孢子懸浮液含量配成在光學顯微鏡10× 10倍視野下其孢子數為80-100個，把此孢子懸浮液用傷口接種法接種到紅花油茶健康葉上，重復3次，并設對照。待葉上病害癥狀出現后，取發病處的病健交界處組織，再用上述常規組織分離法再次分離病原菌，純化培養所得病原菌后保存備用，并制片在光學顯微鏡下觀察其形態特點。

1.2.3拮抗放線菌對供試病原菌抑菌活性測定

以紅花油茶分離病原菌為指示菌，采用平板對峙培養法測定拮抗放線菌對供試病原菌抑菌活性。先將滅菌的PDA培養基融化，倒成平板冷卻凝固后，在平板中央接放線菌菌餅（直徑為6 mm，已經在高氏1號培養基上活化），周圍35 mm處等距離接3點供試病原物菌餅（直徑為6 mm）。以中央只接病原菌，不接放線菌做對照，25℃培養6 d。每處理重復3次。觀察抗拮放線菌各菌株的抑菌效果。

2　結果與分析

2.1病原菌的形態特征

紅花油茶葉斑病菌在PDA培養基平板上菌落棉絮狀，邊緣完整，初期為灰白色，隨后菌落中央變深，后期為灰色，并產生有少量粉紅色的粘液（分生孢子堆）；把培養物制片在光學顯微鏡下觀察，其分生孢子盤為褐色至黑褐色；分生孢子為無色、單胞、紡錘形，大小為4-7×2-2.5μm。由此形態特征初步鑒定其為炭疽菌（Colletotrichum sp.）。

2.2病原菌的致病性測定

將紅花油茶葉斑病的分離物接種到健康紅花油茶葉片上，一段時間后紅花油茶葉上出現發病癥狀，其癥狀特點與紅花油茶葉上初始感染葉斑病時的癥狀相同，對照處理無癥狀出現。將接種后發病的病葉再次組織分離的培養物制片觀察的病菌形態與初次分離得到的培養物的形態也相同。由此可鑒定此紅花油茶葉斑病為炭疽菌所致，即紅花油茶葉斑病為紅花油茶炭疽病。

2.3拮抗放線菌對供試病原菌抑菌活性測定

以供試病原菌作為指示菌，測定拮抗放線菌對供試病原菌的抑菌活性。結果表明所有拮抗放線菌株對供試病原菌抑菌效果都明顯（表2），抑菌帶寬度都有或超過15 mm，其中F9、F10、CF14、CF17、CF31這5個菌株抑菌帶寬度在19 mm以上，CF17抑菌作用最好。

表2　拮抗放線菌對供試病原菌抑菌活性測定結果

3　結論與討論

油茶是我國亞熱帶地區特有的木本油料樹種，也是世界四大木本油料樹種之一［3-4］。主要分布在我國長江流域以南地區，湖南省是油茶主要集中栽培區，衡陽市為湖南省油茶的主產區［5］，現有油茶林面積占經濟林總面積的90%多，居全省首位［6］。但主栽品種為普通油茶（Camellia oleifera）及其優良家系和無性系［7］。紅茶油茶（C.chekiangoleosa）自然分布于我國華南地區，性喜溫暖多濕，不耐寒冷，衡陽市栽種面積不大，主要種栽于公園，紅茶油茶用于綠化還可栽于庭院內、公路兩側，房屋四周等［8］。由于紅茶油茶與普通油茶在葉、花、果形態上都有差異，其發生的病害也可能不同，同種病害其癥狀特征也有差異，油茶病害種類多［9］，有些早期發生在葉上的病害難以區別，所以對紅花油茶葉上發生的病害進行了病原菌的分離與鑒定，對南效公園內紅茶油茶葉上發生的病害鑒定為炭疽病菌（Colletotrichum sp.）。油茶炭疽病是油茶上的一種重要病害，其防治主要通過選育推廣抗性品種［10］和化學防治［11-12］來控制。化學防治污染較為嚴重，生物防治技術被認為是當前生產上一條有效的防治途徑，農抗120、多氧霉素、中生菌素等生物農藥來自于放線菌的次生代謝物［13］。本人前期研究篩選了一些抗普通油茶炭疽病的拮抗放線菌菌株，本試驗測定了部分拮抗放線菌菌株對紅花油茶炭疽病菌的抑菌活性，結果表明這些拮抗放線菌菌株對紅花油茶炭疽病菌都有明顯的抑菌作用，抑菌帶寬度都大于15.0 mm，其中菌株CF17拮抗效果最明顯。但對普通油茶炭疽病菌的抑菌效果相比較要略差一些，這可能是由于拮抗放線菌活力恢復不夠或由于炭疽病菌株的遺傳差異［14］所致，這方面還需進一步研究。

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Preliminary Study on Anthracnose of Camellia Chekiangoleosa in Hengyang

SONG Guang-tao
（College of Gardening，Hunan Environment-Biologic Polytechnic，Hengyang Hunan 421005，China）

In recent years，the leaf spot disease of Camellia chekiangoleosa occurred seriously in Hengyang.Its pathogenic characteristics and the effective biocontrol strains were studied in this paper.By isolation and culture and morphological characteristics of pathogens，determination of the pathogenicity，we preliminary identified that the leaf spot disease of C.chekiangoleosa was caused by Colletotrichum sp.；Using Colletotrichum sp.as indicator and by plate confrontation method，we determined the fungistatic activity of 16 strains of antagonistic actinomycetes of soil.The results showed that all antagonistic strains had obvious fungistatic effect on the pathogen，and inhibition zone width were more than 15 mm.and the effect of strain CF17 was the most obvious.

camellia chekiangoleosa；colletotrichum sp.；antagonistic actinomycetes

S763.13

A

1673-0313（2015）06-0134-03

2015-10-06

湖南省林業廳科研資助項目（XLK201340）

宋光桃（1965-），女，湖南衡南人，副教授，博士，主要從事森林保護及微生物的教學與科研工作。