蛇床子素固體脂質納米粒制劑的制備

陳嬌婷，王妙飛，黃浩，羅國安，2

(1.贛南醫學院藥學院，贛州 341000;2.清華大學分析中心，北京 100084)

固體脂質納米粒(solid 1ipid nanoparticles，SLN)是新型亞微給藥系統，是一種以室溫下為固態的天然或合成的脂質或類脂如卵磷脂、三酰甘油等為基質，將藥物包裹于類脂核中制成粒徑50～1 000 nm固體脂質粒子給藥體系。它解決了一般脂質體在體內外不穩定的缺點，又避免了作為藥物載體物理不穩定性，以及聚合物粒子在制備過程潛在的毒性物質和產生的細胞毒性。同時，還具有對靶器官有特異趨向性、成本低和利于大規模生產的優點。因此，利用蛇床子素開發固體脂質納米粒新型給藥系統有較高的社會和經濟價值，具有較好的發展前景。

筆者在本實驗中以生理相容的單硬脂酸甘油酯為油相，以大豆卵磷脂、泊洛沙姆188為表面活性劑，用熔融-勻化法制成穩定的固體脂質納米粒分散體，研究了蛇床子素固體脂質納米粒(Ost-SLN)的制備工藝和處方優化。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Sartorius ALC4100電子天平(廣州市上博電子科技有限公司，感量:0.1 mg);85-2型數顯恒溫磁力攪拌器(鞏義市科瑞儀器有限公司);NIROSOAVI高壓乳勻機(美國儀器集團);高效液相色譜儀(日本島津);高分辨透射電鏡(81W/AIS2100，西化儀器有限公司)。

1.2 試藥 蛇床子素(南京替斯艾么中藥研究所，批號:110822-200406，含量:≥98%);硬脂酸(上海凌峰化學試劑有限公司，批號:054K5303，化學純，含量:98%);大豆卵磷脂(上海愛康精細化工有限公司，批號:2075523，含量≥92%);泊洛沙姆(南京威爾化工有限公司，批號:WPWA544C，含量≥99%);聚山梨酯80(上海三浦化工有限公司，批號:090426，化學純，含量≥95%);無水乙醇(上海化學試劑有限公司，批號:20110528，分析純，含量≥95%);其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 蛇床子素固體脂質納米粒的制備 采用熔融-勻化法制備，稱取處方量單硬脂酸甘油酯，在(75±2)℃加熱熔融后，蛇床子素用適量無水乙醇溶解，兩者均勻混合作為油相。取處方量大豆卵磷脂、泊洛沙姆188、水在超聲中溶解，并加熱至(75±2)℃成為水相。在攪拌下將水相緩慢滴加到油相中，制成O/W型初乳。用高壓乳均機在100 MPa壓強下，于(75±2)℃下反復乳勻5次后，迅速冷卻形成蛇床子素固體脂質納米粒混懸液。

2.2 蛇床子素的HPLC法測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱:C18柱 Diamonsil TM C18(200 mm × 4.6 mm，5 μm);檢測波長:322 nm;流動相:甲醇-水(75∶25);柱溫:室溫;流速1 mL·min－1;理論板數按蛇床子素計算應不低于2 000，主峰與相鄰雜質峰的分離度應符合要求。

2.2.2 對照品溶液的制備 取蛇床子素對照品10.0 mg精密稱定，置于100 mL棕色量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配成 100 μg·mL－1對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密量取蛇床子素固體脂質納米粒混懸液1 mL，置于10 mL量瓶中，用甲醇定容，超聲，靜置，經孔徑0.45 μm 微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.2.4 陰性對照溶液的制備 按照處方比例制備空白SLN，按照供試品溶液制備方法，制成陰性對照溶液。進樣后與供試品溶液的色譜圖作比較。蛇床子素峰面積的保留時間約7 min，陰性對照溶液在相應位置無吸收峰出現，即載體材料和輔料不影響藥物的測定。

2.2.5 標準曲線的制備 精密吸取蛇床子素對照品溶液 1.0，2.0，3.0，5.0，7.0，9.0 mL 于 100 mL 量瓶，用甲醇定容，配制成不同濃度的系列標準液，取20 μL進樣，記錄峰面積。以峰面積(Y)對濃度(X)作回歸，得到線性方程為:Y=68 988X －11 763，r=0.999 7。線性范圍:1.0 ～9.0 μg·mL－1，蛇床子素量與峰面積呈良好的線性關系。

2.2.6 回收率與精密度實驗 回收率實驗:按照繪制標準曲線的方制備低、中、高濃度蛇床子素甲醇溶液，HPLC法進樣20 μL測定3次，由標準曲線回歸方程計算其測定值，測定值與真實值比值為回收率。測得蛇床子素平均回收率100.12%。精密度實驗:按照繪制標準曲線方法制備低、中、高濃度蛇床子素甲醇溶液，1 d內進樣3次及連續3 d重復測定，得日內 RSD為1.67%，日間RSD為1.38%。

2.2.7 蛇床子素固體脂質納米粒包封率的測定 采用超速離心法，精密量取蛇床子素固體脂質納米粒混懸液1 mL，置離心管，于 10 000 r·min－1(r=10 cm)離心30 min。取上清液用甲醇定容于10 mL量瓶，經孔徑0.45 μm 微孔濾膜濾過，備用。采用“2.1”項色譜條件測定游離藥物濃度。

精密量取蛇床子素固體脂質納米粒混懸液1 mL，置10 mL量瓶，用甲醇定容，超聲處理，靜置，經孔徑0.45 μm微孔濾膜濾過，備用。采用“2.1”項色譜條件測定蛇床子素固體脂質納米粒中總藥量，并根據公式計算包封率。包封率(%)=[(總藥量 －游離藥物量)/總藥量]×100%。測得其包封率為59.78%。

2.3 正交試驗及結果分析 在單因素實驗的基礎上，采用L9(34)正交實驗考察A:藥物與單硬脂酸甘油酯質量比(藥脂比)、B:大豆卵磷脂與單硬脂酸甘油酯的質量比(類脂比)、C:泊洛沙姆質量分數的綜合作用對Ost-SLN包封率的影響。因素與水平見表1，正交實驗結果見表2，方差分析結果見表3。

表1 因素與水平Tab.1 Factors and levels

表2 正交實驗結果表Tab.2 Result of orthogonal test

正交實驗結果:由表2，3的極差分析和方差分析結果可知，在3個因素中，對Ost-SLN包封率的影響重要性依次為B＞A＞C，選擇A3B2C1組合，即藥脂比為1∶6;類脂比為1∶20;泊洛沙姆質量分數為0.5%的工藝制備Ost-SLN。

表3 方差分析Tab.3 Analysis of variance

2.4 Ost-SLN的形態學觀察及粒徑分布 形態學觀察:按照最佳方案制備的Ost-SLN，在H-700型透射電子顯微鏡(日本日立公司)照片中顯示:Ost-SLN大部分都呈規則、完整的圓形或卵圓形，粒子分散狀態良好，無粘連(圖1)。

圖1 蛇床子素固體脂質納米粒形態(×50 000)Fig.1 Morphology of Ost-loaded SLN(×50 000)

粒徑分布:將Ost-SLN樣品用水稀釋至適當濃度，用Zeta Sizer 300 HS激光散射粒度分析儀(英國馬爾文公司)測定其粒徑，粒徑分布范圍為100～200 nm，分布比較均勻。粒徑分布圖見圖2。

3 討論

筆者在本實驗中采用熔融-勻化法制備Ost-SLN樣品，將載藥類脂熔融物分散于熱的乳化劑水溶液中形成初乳，初乳經高壓乳均機勻質形成納米乳，室溫下冷卻固化形成SLN。該法得到的SLN粒徑小且分布窄，但高溫會增加藥物和載體的降解速度。

圖2 蛇床子素固體脂質納米粒徑分布圖Fig.2 Particle size distribution of Ost-loaded SLN

研究證明，乳化劑的種類、濃度均可以顯著影響SLN的質量[3]。經典乳化劑有各種磷脂類如卵磷脂、poloxamer系列以及膽酸鹽類(如膽酸鈉、甘膽酸鈉、牛磺膽酸鈉、去氧牛磺膽酸鈉);短鏈醇類如丁醇、丁酸等。HEIATA等[4]以不同比例的三月桂酸甘油酯和磷脂為載體材料，制備齊多夫定的親脂性前體藥物齊多夫定棕櫚酸酯的SLN。實驗發現磷脂的種類對所制備的SLN的性質影響很大，采用二棕櫚酰磷脂酰膽堿(dipalmitoylphosphatidylcholine，DPPC)時，可制備中性的SLN，而采用不同摩爾比的DPPC:二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(dimyristoylphosphatidylglycero1，DMPG)，則制得帶負電荷的SLN。前者粒徑為(203±31)nm，后者為(294±32)nm。

本研究采用藥脂比為1∶6，類脂比為1∶20;泊洛沙姆質量分數為0.5%的工藝制備Ost-SLN，制成穩定的乳化膜，以穩定固體脂質納米粒的兩相界面，且安全性高。

[1]林愛花，李勇.蛇床子素藥理作用及相關研究進展[J].醫學信息，2010，12:3868.

[2]LI X X，HARA I，MATSUMIYA T.Effects of osthole on postmenopausal osteoporosisusingOvariectomized rats;comparison to the effects of estradio1[J].Biol Pharm Bull，2002，25(2):738 －742.

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[4]HEIATA H，RASHAD T，RICHARD R S，et al.Solid lipid nanoparticles as drug carriers Incorporation and retention of the lipophilic produrg 3 ＇-azido-3 ＇-dcoxythymidinc palmitatc[J].Int J Pharm，1997，146(1):123 －131.