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參芪鯽魚藥膳湯對大鼠早期動脈粥樣硬化血脂及肝臟的影響

2015-08-22 08:42:34唐妮高靜吳晨曦葉艷吳霜朱蓉茍朝琴
中國療養醫學 2015年11期
關鍵詞:血脂模型

唐妮 高靜 吳晨曦 葉艷 吳霜 朱蓉 茍朝琴

參芪鯽魚藥膳湯對大鼠早期動脈粥樣硬化血脂及肝臟的影響

唐妮 高靜 吳晨曦 葉艷 吳霜 朱蓉 茍朝琴

目的 探討參芪鯽魚藥膳湯對大鼠早期動脈粥樣硬化(AS)血脂及肝臟的影響。方法 采用高脂飼料+腹腔注射VitD3建立AS動物模型。將72只大鼠隨機分為空白組、模型組、陽性對照組、參芪鯽魚藥膳湯組(簡稱藥膳方組)、丹參黃芪湯拆方組、鯽魚湯拆方組共6組,每組12只;在造模同時給予干預:藥膳方組灌喂丹參黃芪鯽魚湯,丹參黃芪湯拆方組灌喂丹參黃芪湯,鯽魚湯拆方組灌喂鯽魚湯,陽性對照組灌喂阿托伐他汀鈣溶液,空白組與模型組灌喂生理鹽水,1次/d,劑量均為1 mL/(100 g·d),共干預12周。期間每日觀察大鼠一般情況并測體質量;于第12周末采血后處死大鼠,測定血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)濃度,并計算動脈粥樣硬化指數(AI);HE染色光鏡下觀察胸主動脈變化,取肝臟稱重,計算肝系數,取部分肝臟HE染色光鏡下觀察病理組織變化。結果 共8只大鼠未完成實驗,其中藥膳方組和鯽魚湯拆方組各死亡大鼠1只,模型組、陽性對照組和丹參黃芪湯拆方組各死亡2只。成功建立了大鼠早期AS模型:與空白組相比,模型組大鼠血清TC、TG、LDL-C濃度、AI值及肝質量與肝系數升高,血清HDL-C濃度降低,差異具有統計學意義(P<0.05)。模型組大鼠胸主動脈中膜彈性纖維排列紊亂、疏松,內皮細胞部分缺失,內膜下大量泡沫細胞聚集,可見炎細胞浸潤等;肝臟出現大泡樣脂肪變性,炎細胞浸潤,肝竇擴張充血,出現局部性壞死及少許纖維組織增生,均提示形成早期AS。藥膳方組體質量均高于模型組及丹參黃芪湯拆方組,差異有統計學意義(P<0.05);與模型組相比,藥膳方組血清TC、TG、LDL-C濃度及AI降低、肝質量和肝系數均降低,HDL-C升高,差異有統計學意義(P<0.05),主動脈病變及肝臟病變明顯減輕;與丹參黃芪湯拆方組相比,藥膳方組肝系數較低(P<0.05),肝臟病變略輕于丹參黃芪拆方組。結論 參芪鯽魚藥膳湯可調節大鼠早期AS血脂代謝異常,并減輕AS大鼠肝臟損害,可預防早期AS的發生發展。

參芪鯽魚湯藥膳;動脈粥樣硬化;血脂;肝臟;動物實驗

動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是一種功能、形態損害共存的常見全身動脈系統的慢性炎癥性病變,以大量脂質沉積到血管壁為主要特點。AS病因復雜,其中血脂代謝異常是促成AS形成和發展的重要因素[1]。作為心血管疾病的病理基礎,AS所誘發的心血管疾病是發達國家及發展中國家常見死因之一[2],故預防AS是目前醫學界研究重點。2013年國際動脈粥樣硬化協會發布《全球血脂異常診治建議》,強調通過長期飲食干預調節血脂異常以預防AS[3]。中醫藥膳作為飲食干預的一種,在預防早期AS中以其辨證施食、顧護脾胃、祛邪扶正及口味宜人而獨具優勢[4]。文獻回顧發現藥膳預防AS主要以益氣活血化瘀為切入點。本研究在前期臨床經驗的基礎上,通過建立大鼠早期AS模型,以探討具有健脾益氣、活血化瘀的參芪鯽魚藥膳湯對大鼠早期AS血脂的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 Wistar雄性大鼠,清潔級,72只,

體質量(200±20)g,許可證號:SCXK(川)2008-14。于清潔級大鼠實驗飼養室,溫度20~24℃,日溫差±1℃,濕度50%~70%,12 h明暗交替,日常飲食為混合顆粒飼料(四川達碩生物有限公司提供),每日08:00—08:30喂食,自由采食、飲水。

1.1.2 食材、藥品 丹參、黃芪購于成都中醫藥大學附屬醫院,符合《中藥鑒定學》要求;鯽魚由大型超市提供,有食品合格證書;VitD3注射液(規格:1 mL∶7.5 mg,30萬IU,上海通用藥業股份有限公司,批號:國藥準字H31021404);膽固醇(分析純,批號:140507),膽酸鈉(生物級,批號:140615),丙基硫氧嘧啶(原料藥,批號:PTU-99-091001)均由武漢勝天宇生物有限公司提供。

1.1.3 儀器 轉輪式切片機(徠卡-2016,德國);TSJ-Ⅱ型全自動封閉式組織脫水機(常州市中威電子儀器有限公司);BMJ-Ⅲ型包埋機(常州郊區中威電子儀器廠);PHY-Ⅲ型病理組織漂烘儀(常州市中威電子儀器有限公司);數碼三目攝像顯微鏡(BA400Digital,麥克奧迪實業集團有限公司)等;圖像分析軟件Motic Images Advanced。

1.2 方法

1.2.1 分組方法 大鼠適應性飼養一周以后,采用隨機數字表法將72只大鼠隨機分配到6組,即空白組、模型組、陽性對照組、藥膳方組、丹參黃芪湯拆方組和鯽魚湯拆方組,每組12只。

1.2.2 造模方法 空白組飼喂養普通飼料。其余5組在腹腔注射VitD3的基礎上(在給予高脂飼料前腹腔注射VitD360萬IU/kg,造模后3、6、9周分別注射VitD310萬IU/kg)飼以高脂飼料(3%膽固醇、0.5%膽酸鈉、0.2%丙基硫氧嘧啶、20%白糖、10%豬油、66.3%的基礎飼料),共12周。

1.2.3 食材與藥品制備方法 ①參芪鯽魚藥膳湯,按丹參∶黃芪∶鯽魚=3∶1∶50進行配伍,鯽魚去凈鰓和內臟,切片備用。丹參、黃芪按比例用紗布包裹浸泡30 min,放入砂鍋中,加適量水,水沸后加魚,煮沸后文火煮1 h。②鯽魚湯,鯽魚配重同藥膳方鯽魚質量,去鰓和內臟,加入適量水,水沸后按照上述藥膳方方法熬制。③丹參黃芪湯,丹參、黃芪按3∶1的比例用紗布包裹浸泡30 min,放入砂鍋中,加適量水,水沸后文火煮1 h。以上三種溶液均過濾去渣后,制成含生藥濃度為0.475 g/mL的湯劑,冷藏備用。

1.2.4 干預方法 每組干預均采用灌喂法,劑量均為1 mL/(100 g·d)(即每100 g大鼠體質量每日灌喂量為1 mL溶液),1次/d,灌喂前溶液復溫到37℃。空白組和模型組均灌喂生理鹽水;陽性對照組灌喂阿托伐他汀鈣溶液(劑量參照藥典預防劑量換算);藥膳方組灌喂參芪鯽魚藥膳湯;丹參黃芪湯拆方組灌喂丹參黃芪湯;鯽魚湯拆方組灌喂鯽魚湯。共12周。

1.2.5 觀察指標

1.2.5.1 一般情況 每日觀察大鼠一般情況包括形態、飲食、排泄、活動及精神狀況等。

1.2.5.2 血脂測定 于實驗第12周末大鼠股靜脈取血,靜置1 h后,分離血清,用酶聯免疫吸附實驗(ELLISA)測定大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C,并計 算 動 脈 硬 化 指 數 (atherogenic index,AI),AI=(TC- HDL-C)÷HDL-C。

1.2.5.3 病理檢查 ①主動脈病理觀察。于實驗第12周末股靜脈取血后將大鼠處死,取完整胸主動脈,除凈軟組織后石蠟包埋切片,HE染色后在光鏡下觀察主動脈、內膜、彈性纖維、泡沫細胞及脂質沉積等情況。②肝臟病理觀察。于實驗第12周末股靜脈取血后將大鼠處死,分離肝臟并稱重,計算肝系數(肝系數=肝臟質量÷體質量×100%),取部分肝臟HE染色后觀察肝臟細胞水腫變性、脂肪變性、壞死及匯管區炎細胞浸潤情況。

1.2.6 統計方法 采用SPSS 19.0軟件包分析,描述性統計采用(±s)表示。多組資料組間比較滿足正態分布采用單因素方差分析:方差齊者用LSD檢驗,方差不齊者用Dunnett's T3檢驗。

2 結果

2.1 大鼠一般情況比較 空白組大鼠一般情況正常。其余5組均出現肌肉和皮下脂肪的蓄積逐漸減少、后期出現毛發不光澤、疏松易脫落,進食量飲水量逐漸減少,活動減少,精神萎靡不佳,其中藥膳方組一般情況方面優于模型組和丹參黃芪拆方組。每組的體質量變化(表1)。通過單因素方差分析,差異具有統計學意義(P<0.05)。結果顯示,除空白組外,其余5組體質量均有所下降。進一步兩兩比較顯示,第8周后藥膳方組體質量均高于模型組及丹參黃芪湯拆方組。共8只大鼠未完成實驗,其中藥膳方組和鯽魚湯拆方組各死亡大鼠1只,模型組、陽性對照組和丹參黃芪湯拆方組各死亡2只。

2.2 各組大鼠血脂及AI比較(表2) 通過單因素方差分析,差異具有統計學意義(P<0.05),進一步兩兩比較顯示:模型組大鼠血清TC、TG、LDL-C濃度及AI值高于空白組,血清HDL-C濃度低于空白組(P<0.05)。藥膳方組血清TC、TG、LDL-C濃度及AI值低于模型組 (P<0.05),HDL-C高于模型組(P<0.05)。

表1 每組大鼠體質量比較(±s)

表1 每組大鼠體質量比較(±s)

注:與空白組比較,△P<0.05;與模型組比較,*P<0.05;與陽性對照組比較,◆P<0.05

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表2 各組大鼠血脂(mmol/L)及AI的比較(±s)

表2 各組大鼠血脂(mmol/L)及AI的比較(±s)

注:與空白組比較,△P<0.05;與模型組比較,*P<0.05;與陽性對照組比較,◆P<0.05

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2.3 病理檢查

2.3.1 主動脈病理形態變化 空白組主動脈彈性纖維分布均勻走行清晰無增生,內膜完整光滑,無脂質沉積;模型組與空白組相比病變明顯,表現為主動脈結構不清晰,中膜彈性纖維排列紊亂、疏松,內皮細胞部分缺失,內膜下大量泡沫細胞聚集,周邊可見少許炎細胞浸潤,證明早期AS造模成功。藥膳方組病變較輕,主動脈結構較清晰,彈性纖維排列較疏松,內皮細胞較完整,幾乎無泡沫細胞,其病理改變明顯輕于模型組,輕于鯽魚湯拆方組,與丹參黃芪拆方組相比差異較小。

2.3.2 肝臟病理變化

2.3.2.1 肝質量及肝系數變化 模型組肝質量和肝系數較空白組明顯升高,差異有統計學意義(P<0.05)。藥膳方組肝質量和肝系數均較模型組低(P<0.05),進一步拆方顯示,藥膳方組肝系數均低于丹參黃芪拆方組及鯽魚湯拆方組(表3)。

表3 各組大鼠肝重及肝系數比較(±s)

表3 各組大鼠肝重及肝系數比較(±s)

注:與空白組比較,△P<0.05;與模型組比較,*P<0.05;與陽性對照組比較,◆P<0.05

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2.3.2.2 肝臟病理形態變化 空白組大鼠肉眼觀肝臟呈暗紅色,顏色均勻質感光滑,鏡下肝小葉結構正常,肝索成放射狀,細胞排列整齊,無泡沫細胞和脂肪細胞形成,無炎性細胞浸潤;模型組呈黃褐色,顏色不均質感油膩,表面似顆粒狀,鏡下肝細胞明顯腫脹,細胞核擠向一邊,出現大泡樣脂肪變性,炎細胞浸潤肝竇擴張充血,出現局部性壞死及少許纖維組織增生,說明造模成功。藥膳方組肉眼觀較正常,鏡下結構病變較輕,肝細胞排列較整齊,少量脂肪細胞形成;丹參黃芪拆方組肉眼肝臟顏色不均勻,鏡下肝細胞泡沫樣變性,形成少量脂肪細胞;鯽魚湯拆方組肉眼肝臟呈黃褐色,表面顆粒狀質感油膩,鏡下肝臟散在脂肪細胞,肝細胞排列疏松,明顯腫脹。從病理改變可看出,藥膳方組病變明顯輕于模型組和鯽魚湯拆方組,略輕于丹參黃芪拆方組(圖1)。

圖1 光學顯微鏡下肝臟(HE染色×400)

3 討論

3.1 參芪鯽魚藥膳湯預防大鼠早期AS的理論基礎 AS是慢性進展性疾病,其病程長、癥狀嚴重、病死率高,因此對AS應重在預防。現代醫學認為AS的發病機制十分復雜,研究者提出了許多發病假說如氧化應激、慢性炎癥、脂蛋白滯留-應答學說等。其中脂蛋白滯留-應答學說已得到公認,該學說認為體內血脂水平特別是LDL升高后,脂蛋白滯留在動脈管壁易損區,AS過程即開始啟動,經過繼發的炎癥反應,呈現加速發展趨勢。臨床研究發現通過改變血脂異常變化即可達到抑制AS的效果。因此防治AS可通過降脂取得良好成效[5]。中醫認為AS屬本虛標實之癥,本虛主要以脾虛為主,標實為痰濁、血瘀,其中脂質代謝異常(TC、TG、LDL升高,HDL下降)可作為AS“痰濁”的物質基礎,故以活血化痰為主防治AS可達到降脂效果。中醫藥膳作為中醫的一個分支通過辨證施食、扶正固本、口味宜人且毒副作用少,在預防AS方面有獨特優勢。AS作為慢性病,其發生發展與長期不良飲食的方式密切相關,而藥膳可調節患者飲食結構,成為藥膳預防AS的切入點。近年來傳統藥膳與現代技術的結合也使藥膳制作逐漸標準化,易于患者接受。本課題組在前期臨床發現,參芪鯽魚藥膳湯被廣泛應用于AS的臨床防治過程中,可緩解患者的臨床癥狀、降低血脂。本研究中藥膳湯采用經典的補中益氣藥膳黃芪鯽魚湯結合活血化瘀的丹參配制而成。丹參味微苦、性微寒、歸心、肝經,具有活血化瘀之效,現代藥理學研究發現,丹參的主要活性物質丹參素可通過下調炎癥因子的表達、抑制氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)誘導血管平滑肌細胞(VSMC)增殖等途徑以達到抗炎、抗氧化作用[6],從而防止AS的發生發展;黃芪味甘、性微溫、歸肺、脾、肝、腎經,具有補中益氣之效,藥理學研究發現其主要成分黃芪多糖可通過調節血脂、抗氧化應激、抗炎從而緩解AS進程[7];而兩藥配伍使用具有益氣活血之功效。在參閱文獻及咨詢養生專家的基礎上采用黃芪和丹參為1∶3的最佳比例[8];鯽魚為血肉有情之品,味甘,性平,具有通血脈、益氣健脾之功效。《鎮南本草》中記載“鯽魚,和五臟,通血脈……”,同時鯽魚中含優質蛋白和較高不飽和脂肪酸,可增加抵抗力、增加體質及預防AS。以上三者配合,共奏健脾益氣、活血化痰之效。

3.2 成功建立早期AS模型 本研究選用飼養方便,抵抗力強,食性與人相近的Wistar大鼠,參照中醫證候動物模型實驗方法,采用高脂飼料+腹腔注射VitD3建立早期AS模型[9]。結果顯示,12周后,模型組與空白組比較體質量降低,血清TC、TG、LDL-C濃度、AI值及肝質量和肝系數高于空白組,血清HDL-C濃度低于空白組;主動脈切片呈主動脈結構不清晰,中膜彈性纖維排列紊亂、疏松,內皮細胞部分缺失,內膜下大量泡沫細胞聚集,周邊可見少許炎細胞浸潤;肝質量和肝系數較空白組明顯升高(P<0.05),肝細胞明顯腫脹,細胞核擠向一邊,出現大泡樣脂肪變性,炎細胞浸潤肝竇擴張充血,出現局部性壞死及少許纖維組織增生。提示形成早期AS模型。

3.3 參芪鯽魚藥膳湯對預防大鼠早期AS的作用

3.3.1 藥膳湯可改善早期AS大鼠的營養狀態從大鼠一般情況來看,除空白組外,其余5組體質量均有所下降,差異有統計學意義。體質量下降與造模使用高脂飼料添加物導致大鼠厭食,或腹腔注射VitD3引起胃腸內臟損害有關[10]。藥膳方組體質量從第8周開始高于模型組、陽性對照組及丹參黃芪湯拆方組,說明長期服用藥膳可扶正固本,調節臟腑陰陽,增強早期AS大鼠營養狀態,充分體現藥膳在防治AS方面的優勢[11]。實驗中共死亡5只大鼠,與灌喂技術、厭食導致機體功能下降或長期灌喂藥物不耐受有關。

3.3.2 藥膳湯可調節大鼠早期AS血脂代謝異常血脂代謝異常是動脈粥硬化獨立危險因素,研究表明TC、TG及LDL-C升高與AS發病呈正相關,而高密度脂蛋白是一種抗AS的因素。它能將外圍組織包括動脈壁中的膽固醇運到肝臟,阻止外圍細胞對膽固醇的攝取,抑制LDL-C刺激平滑肌增殖,對抗LDL-C對血管內皮細胞和血管平滑肌細胞的損傷。因此防止HDL-C下降和促進其升高也就可能成為尋找抗AS的可能途徑之一[12]。本實驗中藥膳方組血清TC、TG、LDL-C濃度低于模型組,HDL-C高于模型組,表明參芪鯽魚藥膳湯對血脂代謝異常有一定的調節作用。本研究根據血脂結果計算AI的變化。AI是國際醫學界制定衡量動脈硬化程度的良好指標,反映動脈硬化程度。AI值與心血管疾病發生率成正比。本研究中模型組AI顯著高于空白組,通過藥膳湯干預AI值降低,提示藥膳湯可具有抗動脈硬化的作用,降低心血管疾病發生率。故本藥膳湯可通過調節大鼠早期AS血脂代謝異常,以預防大鼠早期AS。

3.3.3 藥膳湯可減輕大鼠早期AS肝臟損害 研究表明雖然中藥毒副作用小,但長時間服用同樣會造成肝損傷、腎毒性等內臟器官的損害[13]。近年逐漸引起醫學者的關注,滕光菊等[14]對418例藥物性肝損傷患者資料進行回顧性分析得出,引起損傷藥物各類中,中藥位居首位;劉亭等[15]報道了一例治療高脂血癥的中成藥荷丹片造成嚴重肝損害。大鼠肝系數為肝質量與體質量的比值百分比,肝系數增大表示肝臟充血、水腫、脂樣變或增生肥大等損害。實驗表明,與模型組比較,藥膳湯組肝系數下降且病理結果明顯減輕,表明藥膳湯減輕大鼠肝臟病變,緩解造模引起的肝損害。拆方結果提示,與丹參黃芪拆方組相比,藥膳方組肝系數較低,肝臟病理略輕。提示較長時間服用中藥可能對肝臟有損害。相比之下,藥膳作為輔助療法,通過飲食調整臟腑氣血陰陽,增強體質,在防治慢病方面副作用少。結果顯示,藥膳方組主動脈及肝臟病變較輕,表明長期服用參芪鯽魚藥膳湯可抑制AS大鼠主動脈病變并保護肝臟功能。

綜上所述,參芪鯽魚藥膳湯可改善大鼠一般狀況,增加體質量,調節大鼠早期AS血脂代謝異常,并可抑制AS大鼠肝臟損害,以預防早期AS的發生發展,展現了益氣活血類藥膳扶正固本、活血化瘀的優勢。

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Objective To explore the effect of Shenqi Jiyu decoction on early atherosclerosis(AS)blood lipid and liver in rats.Methods High-fat diet and VitaminD3were used to establish a rat model with atherosclerosis(AS).Seventy-two male rats were randomly divided into 6 groups:blank group,model group,positive control group,Shenqi Jiyu decoction(SJD)group,Danshen Huangqi disassembled prescription group and Jiyu disassembled prescription group,with 12 rats in each group.Intervention was given while modeling:the SJD group were fed with Shenqi Jiyu decoction,the Danshen Huangqi disassembled prescription group were fed with Danshen Huangqi decoction,the Jiyu disassembled prescription group were fed with Jiyu decoction,the positive control group were fed with atorvastatin calcium solution,the blank group and the model group were fed with normal saline,for once per day with daily dose of 1 mL/(100 g·d)The intervention lasted 12 weeks.During the time,the general condition of the rats was observed and the weight was measured every day.The rats were killed after blood collection at the end of the 12th week,and the serum total cholesterol(TC),triglycerides(TG),high-density lipoprotein cholesterol(HDL-C),and low-density lipoprotein cholesterol(LDL-C)were determined,and the atherogenic index(AI)was calculated.The structural changes of thoracic aorta were observed under HE staining light microscope.Livers were isolated and then weighted,and the liver coefficients were calculated.The liver portions were drawn to observe the pathological tissue changes under HE staining light microscope.Results Eight rats died during the study,among which there was one in the SJD group and one in the Jiyu disassembled prescription group,there were two respectively in the model group,in the positive control group,and in the Danshen Huangqi disassembled prescription group.The early atherosclerosis model of rats was successfully established.Compared with the blank group,the TC,TG,LDL-C,AI,liver weight and liver coefficient of the model group increased,but the HDL-C decreased,and the differences were of statistical significance(P<0.05).Elastic fiber of the thoracic aorta among the rats in the model group was arranged in disorder and loose,partial deletion of the endothelial cells,a large number of foam cells accumulated in the intima,and inflammatory cell infiltration could be seen.Hepatic tissues had bulla fatty degeneration,inflammation cells infiltration,hepatic sinusoid expansion and hyperemia,local necrosis and a little hyperplasia of fibrous tissues.The above suggested the model of early atherosclerosis was formed.The body mass of the SJD group was higher than the model group and the Danshen Huangqi disassembled prescription group with differences of statistical significance(P<0.05).Compared with the model group,the TC,TG,LDL-C,AI,liver weight and liver coefficient of the SJD group decreased,while the HDL-C of the SJD group increased with differences of statistical significance(P<0.05),and the aortic and hepatic lesions were obviously obviously relieved.Compared with the Danshen Huangqi disassembled prescription group,the liver coefficient of the SJD group was lower(P<0.05)and the hepatic lesions were lighter.Conclusion Shenqi Jiyu decoction can regulate the blood lipid metabolic abnormality of early atherosclerosis in rats and reduce the liver damage of the rats with atherosclerosis,so as to prevent the occurrence and development of early atherosclerosis.

Shenqi Jiyu decoction;Atherosclerosis;Blood lipid;Liver;Animal experiment

2015-07-22)

1005-619X(2015)011-1134-05

10.13517/j.cnki.ccm.2015.11.006

611137 成都中醫藥大學護理學院

高靜

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