新型微生態(tài)飼料添加劑的致畸試驗(yàn)

郝福星　周澤偉　鄭玲敏　張雨梅

摘要：微生態(tài)制劑是飼料及養(yǎng)殖業(yè)中應(yīng)用比較廣泛的一類添加劑，通過大鼠傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)，評(píng)價(jià)某生物有限公司研制的新型微生態(tài)飼料添加劑的致畸作用。在Wistar大鼠受孕7～15 d期間，分別對(duì)其給予500、100、20 mg/kg劑量的微生態(tài)飼料添加劑進(jìn)行灌胃，以生理鹽水作為陰性對(duì)照；用畸胎率、活胎仔平均畸形率、母體畸胎率等指標(biāo)評(píng)價(jià)其致畸作用。結(jié)果表明，受試物各劑量組的孕鼠行為正常，無(wú)中毒或死亡情況；受試物各劑量組的吸收胎率、死胎率、畸胎率、活胎仔平均畸形率、母體畸胎率均不高于對(duì)照組，且無(wú)顯著差異。綜合試驗(yàn)結(jié)果可知，該飼料添加劑傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)呈陰性，無(wú)明顯的致畸作用。

關(guān)鍵詞：微生態(tài)制劑；飼料添加劑；糞腸球菌；致畸試驗(yàn)；大鼠

中圖分類號(hào)： S816.73 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2015）07-0218-02

微生物飼料添加劑也稱微生態(tài)制劑，是當(dāng)前飼料及養(yǎng)殖業(yè)中應(yīng)用比較廣泛的一類添加劑，常作為藥物添加劑的有效替代品使用。動(dòng)物微生態(tài)制劑是由正常菌群微生物制成的一類環(huán)保生物制品，它可通過調(diào)節(jié)機(jī)體微生態(tài)平衡來預(yù)防疾病、提高飼料轉(zhuǎn)化率、促進(jìn)動(dòng)物健康、保護(hù)生態(tài)環(huán)境，是無(wú)毒、無(wú)污染的飼料添加劑產(chǎn)品[1]，在畜牧業(yè)、水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中有廣泛應(yīng)用前景[2-3]。糞腸球菌別稱糞鏈球菌，是乳酸菌中的一種，該菌是一種兼性厭氧菌，是能產(chǎn)多種酶、維生素（主要是B族維生素）的有益菌，在動(dòng)物體內(nèi)可產(chǎn)生大量乳酸、分解酶、多種促生長(zhǎng)因子[4]。作為畜禽飼料添加劑，糞腸球菌可用于防治畜禽因腸道菌群失調(diào)引起的下痢，具有調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)、減少病原菌侵襲、抑制有害菌生長(zhǎng)的作用，并且能夠提高飼料轉(zhuǎn)化率、降低生產(chǎn)成本[5-6]。本研究通過大鼠的傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)，考察蛋白質(zhì)修飾糞腸球菌微生態(tài)新制劑作為飼料添加劑使用是否存在致畸作用，以期為該產(chǎn)品的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)試劑

試驗(yàn)試劑為蛋白質(zhì)修飾糞腸球菌粉劑，活菌數(shù) 5×109 CFU/g，由江蘇省某生物有限公司研制。配制不同濃度的水溶液，以10 mL/kg的體積灌胃。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

8周齡Wistar大鼠（清潔級(jí)），約100只，購(gòu)自揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心。動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（蘇）2012-0004，使用許可證號(hào)：SYXK（蘇）2012-0029。分籠飼養(yǎng)，自由采食飲水，室溫（22±3） ℃，自然光照，相對(duì)濕度55%～75%。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 孕鼠及劑量設(shè)置 雌鼠、雄鼠按1∶1同籠，次日早晨以檢查到陰道栓的為受孕鼠，記為受孕開始。在受孕7 ～15 d，每天經(jīng)口給予微生態(tài)制劑。試驗(yàn)分3個(gè)受試物劑量組和陰性對(duì)照組，每組10只大鼠。添加劑劑量分別設(shè)為500、100、20 mg/kg，灌胃給藥；陰性對(duì)照組用生理鹽水代替。給藥期間隔天稱1次質(zhì)量，并根據(jù)體質(zhì)量調(diào)整添加劑劑量。

1.3.2 畸形檢查 于孕20 d稱質(zhì)量后處死孕鼠，剖開腹腔，取出子宮。分別檢查并記錄左、右側(cè)的黃體數(shù)、窩質(zhì)量（子宮連胎鼠）、子宮質(zhì)量，計(jì)數(shù)活產(chǎn)幼仔數(shù)、死胎、吸收胎數(shù)。根據(jù)農(nóng)業(yè)部1247號(hào)公告中《獸藥大鼠傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)指導(dǎo)原則》中的相應(yīng)方法進(jìn)行胎鼠外觀畸形、內(nèi)臟畸形、骨骼畸形的檢查，記錄畸胎總數(shù)和畸形總數(shù)[3]，計(jì)算死胎率、吸收胎率、畸胎率、活胎仔平均畸形率、母體畸胎率。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

用SPSS 12.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）”表示；顯著性分析采用t檢驗(yàn)或χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)孕鼠體質(zhì)量的影響

給藥期間孕鼠的一般狀況良好，飲食正常，未出現(xiàn)異常癥狀。試驗(yàn)期間各劑量組孕鼠體質(zhì)量與陰性對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異，受孕20 d孕鼠體質(zhì)量見表1。

2.2 對(duì)大鼠生殖機(jī)能的影響

受孕20 d后統(tǒng)計(jì)微生態(tài)制劑處理及正常對(duì)照組孕鼠的黃體數(shù)、著床數(shù)、活胎數(shù)、吸收胎數(shù)、死胎數(shù)。由表2可見，各處理組吸收胎率、死胎率均低于對(duì)照組；黃體數(shù)、著床數(shù)、總仔數(shù)、活胎數(shù)、吸收胎數(shù)、死胎數(shù)與對(duì)照組比較差異不明顯。

2.3 對(duì)胎鼠發(fā)育的影響

受孕20 d對(duì)各試驗(yàn)組孕鼠進(jìn)行剖檢，由表3可見，各處理組平均窩仔數(shù)、尾長(zhǎng)與對(duì)照組無(wú)顯著差異；受試物處理組胎鼠體質(zhì)量、體長(zhǎng)顯著低于陰性對(duì)照組（P<0.05）；100、500 mg/kg 劑量胎盤質(zhì)量顯著低于陰性對(duì)照組（P<0.05）。

2.4 對(duì)胎鼠畸形的影響

畸形檢查中發(fā)現(xiàn)500 mg/kg劑量處理組有1只胎鼠一側(cè)眼球缺失，20 mg/kg劑量處理組、陰性對(duì)照組各有1只一側(cè)腎臟缺失，未發(fā)現(xiàn)骨骼畸形；各劑量組在常見各畸形指標(biāo)上，與正常對(duì)照組無(wú)明顯差異，詳見表4。

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，本新型微生態(tài)飼料添加劑對(duì)Wistar大鼠無(wú)明顯的致畸作用。本試驗(yàn)中受試物對(duì)大鼠的生殖機(jī)能指標(biāo)如懷孕率、黃體數(shù)、著床數(shù)、窩仔數(shù)、吸收胎率、死胎率等無(wú)明顯影響，對(duì)胎鼠也無(wú)明顯的致畸作用。但受試物處理組胎鼠的體質(zhì)量及體長(zhǎng)均低于對(duì)照組，是受試物的胚胎毒性還是由于飼料攝入不足導(dǎo)致母體營(yíng)養(yǎng)水平不夠引起的，還須進(jìn)一步的試驗(yàn)研究。受試物組懷孕母鼠體質(zhì)量均稍低于對(duì)照組數(shù)據(jù)，可能與受試物添加后飼料適口性不夠好引起攝入減少有關(guān)。如果進(jìn)行繁殖試驗(yàn)，特別是多代的繁殖試驗(yàn)，可以進(jìn)一步評(píng)估對(duì)胎兒生長(zhǎng)的影響。

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