Trizol法提取普通小球藻總基因組DNA

段文斌　金剛　代建國(guó)　張麗君　欒崇林　于化泓

摘要：Trizol法主要應(yīng)用于動(dòng)植物RNA提取，由于其在提取RNA的過程中將DNA有效分離到有機(jī)相中，并且在有機(jī)相中DNA未被降解，因此本研究采用Trizol法提取具有細(xì)胞壁的普通小球藻的基因組DNA，發(fā)現(xiàn)提取得到的DNA純度和產(chǎn)率高，且DNA完整性好。經(jīng)檢測(cè)：D260 nm/D280 nm=1.86，平均得率為977 μg/g鮮質(zhì)量；瓊脂糖電泳檢測(cè)其條帶清晰，未發(fā)生降解。該方法具有簡(jiǎn)單快速獲得高純度和高產(chǎn)率的小球藻基因組DNA的優(yōu)點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：Trizol法；普通小球藻；DNA提取

中圖分類號(hào)：S917 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2015）07-0033-02

Trizol法最早由Chomczynski等提出，用于提取細(xì)胞或組織中的總RNA[1]。經(jīng)過Trizol處理過的樣品，其總RNA、DNA及蛋白質(zhì)分別分布在上層水相、中間層、下層有機(jī)相。Trizol試劑中含有的苯酚、異硫氰酸胍等物質(zhì)，將細(xì)胞迅速破碎，并抑制釋放出來的核酸酶，同時(shí)能夠保持RNA、DNA的完整性，因此對(duì)RAN、DNA的同時(shí)提取純化十分有用[2]，大大節(jié)約試驗(yàn)時(shí)間，提高試驗(yàn)效率。小球藻（Chlorella vulgaris）作為一種單細(xì)胞綠藻，具有極強(qiáng)的光合自養(yǎng)能力；含有豐富的脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素、核酸、食物纖維、葉綠素等，都是人體健康不可或缺的營(yíng)養(yǎng)物。小球藻還生產(chǎn)多種生物活性物質(zhì)[3]。由于其脂類可以達(dá)到細(xì)胞干質(zhì)量的10%～30%而被用于生產(chǎn)生物柴油[4-5]；通過轉(zhuǎn)基因小球藻可以被用來生產(chǎn)病毒抗體[6]；也發(fā)現(xiàn)小球藻具有抗菌活性[7]；小球藻可以治理重金屬、有機(jī)物以及氮磷污染[8]。因此，科研工作者開始對(duì)小球藻進(jìn)行深入研究。本研究嘗試使用Trizol法[9]提取小球藻基因組DNA，以期獲得簡(jiǎn)單快速獲取高純度高產(chǎn)率基因組DNA的方法。……