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Trizol法提取普通小球藻總基因組DNA

2015-08-20 21:06:14段文斌金剛代建國(guó)張麗君欒崇林
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年7期

段文斌 金剛 代建國(guó) 張麗君 欒崇林 于化泓

摘要:Trizol法主要應(yīng)用于動(dòng)植物RNA提取,由于其在提取RNA的過程中將DNA有效分離到有機(jī)相中,并且在有機(jī)相中DNA未被降解,因此本研究采用Trizol法提取具有細(xì)胞壁的普通小球藻的基因組DNA,發(fā)現(xiàn)提取得到的DNA純度和產(chǎn)率高,且DNA完整性好。經(jīng)檢測(cè):D260 nm/D280 nm=1.86,平均得率為977 μg/g鮮質(zhì)量;瓊脂糖電泳檢測(cè)其條帶清晰,未發(fā)生降解。該方法具有簡(jiǎn)單快速獲得高純度和高產(chǎn)率的小球藻基因組DNA的優(yōu)點(diǎn)。

關(guān)鍵詞:Trizol法;普通小球藻;DNA提取

中圖分類號(hào):S917 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A 文章編號(hào):1002-1302(2015)07-0033-02

Trizol法最早由Chomczynski等提出,用于提取細(xì)胞或組織中的總RNA[1]。經(jīng)過Trizol處理過的樣品,其總RNA、DNA及蛋白質(zhì)分別分布在上層水相、中間層、下層有機(jī)相。Trizol試劑中含有的苯酚、異硫氰酸胍等物質(zhì),將細(xì)胞迅速破碎,并抑制釋放出來的核酸酶,同時(shí)能夠保持RNA、DNA的完整性,因此對(duì)RAN、DNA的同時(shí)提取純化十分有用[2],大大節(jié)約試驗(yàn)時(shí)間,提高試驗(yàn)效率。小球藻(Chlorella vulgaris)作為一種單細(xì)胞綠藻,具有極強(qiáng)的光合自養(yǎng)能力;含有豐富的脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素、核酸、食物纖維、葉綠素等,都是人體健康不可或缺的營(yíng)養(yǎng)物。小球藻還生產(chǎn)多種生物活性物質(zhì)[3]。由于其脂類可以達(dá)到細(xì)胞干質(zhì)量的10%~30%而被用于生產(chǎn)生物柴油[4-5];通過轉(zhuǎn)基因小球藻可以被用來生產(chǎn)病毒抗體[6];也發(fā)現(xiàn)小球藻具有抗菌活性[7];小球藻可以治理重金屬、有機(jī)物以及氮磷污染[8]。因此,科研工作者開始對(duì)小球藻進(jìn)行深入研究。本研究嘗試使用Trizol法[9]提取小球藻基因組DNA,以期獲得簡(jiǎn)單快速獲取高純度高產(chǎn)率基因組DNA的方法。……

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