干拌料方式添加液態酵益的菌群活性變化

姜曉君

摘要 研究全價料中添加液態酵益在存放期內菌群活性的動態變化，將活菌制劑液態酵益7.5 mL加入3 kg飼料中，再加入6 g紅糖進行無氧發酵，分別取發酵后第0、2、4、6、8、10、14、21、28天的樣品進行檢測微生物數量變化情況。結果表明：酵益此類微生態制劑加入飼料中發酵，代表性微生物啤酒酵母、枯草芽孢桿菌和植物乳酸桿菌的數量均在前6 d之內達到最大值，也就是在飼料發酵后的4～8 d飼喂動物，這樣有益性最大，而在保存30 d后，有益菌的數量下降到較低水平，不適宜繼續保存。

關鍵詞 微生態制劑；液態酵益；啤酒酵母；植物乳酸桿菌；枯草芽孢桿菌

中圖分類號 S816.7 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2015）12-0255-01

微生態制劑是利用動物體內正常微生物成員及其代謝產物或生長促進物質經特殊加工工藝制成的制劑，能夠補充動物腸道內減少或缺乏的正常微生物，具有無毒副作用、無耐藥性、無殘留、成本低、效果顯著等特點。微生態制劑可以增強機體免疫力，提高飼料轉化率和畜禽生產性能，降低畜禽產品中膽固醇含量，減少養殖環境及糞便中有害物質的含量，經濟效益和社會效益顯著[1-3]。

試驗液態微生態制劑選用芽孢桿菌（枯草芽孢桿菌和酪酸菌）、乳酸球菌（屎腸球菌）和酵母菌（釀酒酵母和異常畢赤酵母）。其中，枯草芽孢桿菌具有多種酶活性，能降解許多復雜的碳水化合物，利于促進動物消化吸收、改善飼料轉化率，并且芽孢桿菌與雙歧桿菌有共生作用，能促進雙歧桿菌的生長；釀酒酵母和異常畢赤酵母不僅蛋白含量較高，而且能抑制大腸桿菌，破壞其致病機制，能吸附有害物質和病原菌（如金黃色葡萄球菌），促進有益菌生長；屎腸球菌粘附能力很強，能定植于腸道中并發揮一定的益生作用。每種菌混合后協同配合，在動物體內起到營養和調節微生態作用[1-4]。

1 材料與方法

1.1 飼料發酵

用液體微生態制劑對飼料進行接種發酵，尤其是厭氧發酵是充分發揮微生態制劑促生長、抗病增產、增收和消除惡臭等作用的主要技術之一。原料配比：3 kg全價飼料+6 g紅糖+7.5 mL微生態制劑（酵益）。厭氧發酵：將接種后的飼料加入罐、缸和密閉性較好的塑料袋中，充分壓實后密封發酵（注意密封能否嚴格是厭氧發酵成功的關鍵），發酵溫度為15～35 ℃。

1.2 培養基配方

啤酒酵母培養基：酵母膏10 g、葡萄糖20 g、蛋白胨20 g、瓊脂20 g、蒸餾水1L；枯草芽孢桿菌培養基：肉膏3 g、氯化鈉5 g、蛋白胨10 g、瓊脂20 g、蒸餾水1 L；植物乳酸桿菌培養基：蛋白胨10 g、酵母膏5 g、葡萄糖5 g、乙酸鈉5 g、吐溫-80 1 g、KH2PO4 2 g、MgSO4·7H2O 0.2 g、MnSO4·7H2O 0.05 g、CaCO3 20 g、瓊脂20 g、蒸餾水1 L。

將3種菌所需的培養基原料配好，加入水后加熱溶解，然后放在高壓滅菌鍋里121 ℃高壓滅菌15 min備用。

1.3 試驗方法

將活菌制劑酵美樂7.5 mL加入3 kg飼料中進行無氧發酵，分別取發酵后第0、2、4、6、8、10、14、21、28天的樣品，從中稱取10 g（精確到0.01 g），加入帶玻璃珠的盛有100 mL無菌水的三角瓶中，在旋轉式搖床上200 r/min充分震蕩30 min，靜止片刻待用。

用無菌吸管吸取1 mL上述菌懸液加入盛有9 mL無菌水的試管中，混成1∶10的菌懸液。這樣依次稀釋，分別得到1∶100、1∶1 000稀釋度（每個稀釋度必須更換無菌吸管），每個樣品均稀釋約102倍。

用無菌吸管分別吸取1 mL稀釋102倍菌懸液加入培養皿內，分別與啤酒酵母、枯草芽孢桿菌和植物乳酸桿菌的培養基混勻，每一稀釋度重復2次，同時用無菌水作為空白對照，枯草芽孢桿菌（蠟樣芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌）培養基倒置于37～40 ℃培養箱中培養24 h，植物乳酸桿菌培養基倒置于37～40 ℃培養箱中培養2～5 d，啤酒酵母培養基倒置于28～30 ℃培養箱中培養1～2 d。培養完畢后記錄所得數據。

1.4 統計分析

將每次得到的數據進行統計，計算公式如下：

發酵后飼料含菌量=菌落平均數×菌懸液體積×稀釋倍數

2 結果與分析

由圖1可知，每種代表菌在加入飼料后數量迅速增加，而枯草芽孢桿菌則比另2種菌相對增加得遲緩些，在第6天時才達到最大值。在拌入飼料的第4～6天內，3種菌數量比較可觀，但在第8天后數量就開始遞減。其中，啤酒酵母菌在第8～10 天時下降的幅度比其他2種菌要劇烈，另2種菌則下降的比較平緩。在干拌料上來看，當酵益加入飼料后，最好能在第4～6天時飼喂動物，在保存30 d以后菌種數量已經下降的相對較低。由此可以看出，酵益加入飼料后的保存期限最好在30 d內，否則飼料內加入的酵益則起不到預期的效果。

3 結論與討論

（1）本試驗利用菌種之間的協作共生，初步確定了多菌種混合液態微生態制劑的發酵溫度為室內常溫（約25 ℃）。這種工藝所選用生產原料價格低廉，生產工藝簡化，能回收利用包括菌體及其代謝產物和底物在內的所有發酵物，既保留活性成分又沒有廢液污染[1-3]。

（2）多菌種混合液態微生態制劑蛋白含量和營養成分較高，可減少畜禽疾病的發生，降低養殖成本，應用前景廣（下轉第257頁）

闊。本試驗證明了多菌種混合液態發酵的可行性，但只是初步確定了生產發酵工藝，在菌體共生協作機理方面還研究得較少，對于實踐缺乏有效的理論指導，并且發酵周期較長，所以需要進一步優化發酵參數[1-3]。

（3）3種菌的的生長趨勢有所不同，啤酒酵母和植物乳酸桿菌均是在第4天時達到最大值，而枯草芽孢桿菌則是在第6天時達到最大值。在最高值上，是啤酒酵母菌的數量最高，植物乳酸桿菌其次，枯草芽孢桿菌則最低。

4 參考文獻

[1] 孫媛.液態復合微生態制劑的研制及在仔豬生產上的應用[D].長春：吉林農業大學，2006.

[2] 初冠群.淺談微生態制劑的研究應用與發展現狀[J].中國畜禽種業，2012（2）：21-22.

[3] 李桂杰，張鈞利.動物微生態制劑的研究進展[J].飼料工業，2000（11）：6-8.

[4] 周淑芹，孫文志.酵母培養物[J].中國飼料，2003（5）：31-32.endprint