索拉非尼納米混懸劑的穩(wěn)定性研究

張英　張洪　彭銳

[摘要] 目的 研究索拉非尼納米混懸劑的物理穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性。 方法 觀察不同溫度和時(shí)間下納米混懸劑的粒徑和多分散指數(shù)（PDI）的變化，并用HPLC對(duì)不同時(shí)間內(nèi)索拉非尼納米混懸劑的濃度進(jìn)行測定并繪制其降解曲線。 結(jié)果 索拉非尼納米混懸劑避光放于4℃下物理穩(wěn)定性良好，粒徑和PDI變化不大；索拉非尼納米混懸劑與溶解狀態(tài)的索拉非尼相比，化學(xué)穩(wěn)定性顯著改善，有效藥物濃度的降解速度明顯降低。 結(jié)論 將索拉非尼制成納米混懸劑穩(wěn)定性顯著改善，可長期保存。

[關(guān)鍵詞] 索拉非尼；納米混懸劑；物理穩(wěn)定性；化學(xué)穩(wěn)定性

[中圖分類號(hào)] R965 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2015）05（c）-0120-04

[Abstract] Objective To investigate the physical stability and chemical stability of Sorafenib Nanosuspension. Methods The change of size and PDI under different temperature and time were observed. The concentration of Sorafenib in different time was determined by using HPLC and its degradation curve was drawed. Results Sorafenib Nanosuspensions had little change in particle size and PDI， had a good physical stability in the dark at 4℃. The degradation rate of Sorafenib Nanosuspension highly decreased compared with the reference methanol solution of Sorafenib， which meant the good chemical stability of Sorafenib Nanosuspension. Conclusion The stability of Sorafenib can be improved significantly when it is prepared to nanosuspension. It can be long-term preserved.

[Key words] Sorafenib； Nanosuspension； Physical stability； Chemical stability

索拉非尼是一種新型二芳基脲類和口服多靶點(diǎn)分子靶向藥物[1]，它的問世開創(chuàng)了進(jìn)展期肝細(xì)胞癌系統(tǒng)治療的里程碑[2-3]。它可以通過抑制血管內(nèi)皮生長因子受體-2、FLT3、Ret、c-Kit受體酪氨酸激酶和血小板衍生生長因子受體而起作用，可阻斷腫瘤細(xì)胞增殖和血管形成[4-6]。索拉非尼在臨床上的應(yīng)用主要為片劑，但是因其藥物分子難溶于水，生物利用度低，副作用較嚴(yán)重，限制了其在臨床上的應(yīng)用。

納米混懸劑是采用少量表面活性劑穩(wěn)定藥物粒子所形成的一種亞微米膠體分散體系，是一種分散度極好的固體藥物粒子水分散體系[7]。常采用高分子聚合物作為載體來增加藥物的溶解度和生物利用度[8-9]。目前已廣泛應(yīng)用于各種給藥途徑（口服、靜注、肺部、經(jīng)皮和眼部給藥等）制劑的制備[10-12]。本實(shí)驗(yàn)采用乳化法將索拉非尼制成納米混懸劑，并對(duì)其穩(wěn)定性進(jìn)行研究。

本實(shí)驗(yàn)采用粒徑及多分散指數(shù)（poly dispersion index，PDI）隨時(shí)間的變化來表征其物理穩(wěn)定性；采用高效液相色譜法測定不同時(shí)間段內(nèi)索拉非尼納米混懸劑和索拉非尼原料藥的濃度，并繪制降解曲線測定其化學(xué)穩(wěn)定性。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

FA25智能型高剪切分散乳化機(jī)（上海弗魯克流體機(jī)械制造有限公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（RE52CS，上海亞榮生化儀器廠），HPLC（Aglilent 1100，美國），UV-1800紫外分光光度計(jì)（日本），JEM-2100（HR）高分辨透射電鏡（日本Jeol公司），Zetasizer ZS90型激光粒度儀（英國Malvern公司），恒溫培養(yǎng)搖床（ISO 13485，上海一恒科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試藥

索拉非尼原料藥（湖北省武漢創(chuàng)成藥業(yè)有限公司，含量：99.0%，批號(hào)：20140306），索拉非尼對(duì)照品（上海翰香生化制品有限公司，含量：99.4%，批號(hào)：PY131206），聚乙烯吡咯烷酮K30（廣東省深圳優(yōu)普惠公司），Eudragit RS 100（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），乙酸銨（分析純，天津市博迪化工有限公司），乙腈（色譜純，美國天地公司），甲醇（色譜純，美國天地公司），水為超純水（實(shí)驗(yàn)室自制），其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)前期已通過單因素試驗(yàn)優(yōu)選出制備索拉非尼納米混懸劑的最佳有機(jī)溶劑為丙酮∶甲醇（3∶1），表面活性劑為聚乙烯吡咯烷酮（PVP）。將索拉非尼按最優(yōu)處方制備成納米混懸劑，精密稱取表1所示的藥物和載體Eudragit RS100，加入適量的丙酮∶甲醇（3∶1）中超聲溶解，形成有機(jī)相，將體系的pH值用稀鹽酸調(diào)節(jié)為4；另取PVP，溶解于水中，形成含1% PVP的水相。攪拌下將有機(jī)相緩慢滴加進(jìn)水相中，繼續(xù)攪拌30 min。40℃下減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑。并在10 000 r/min下高剪切10 min，即得。

制備的9組索拉非尼納米混懸劑都具有較小的平均粒徑和PDI，粒徑在80～120 nm范圍，PDI值均 ﹤ 0.300，集中于0.190～0.250，粒徑分布比較均勻。當(dāng)投藥量為2 mg，有機(jī)相與水相比例為1∶4時(shí)，平均粒徑最小，PDI = 0.231，粒徑分布比較均勻，選為最優(yōu)處方。見表1。

2.1 粒徑分布及Zeta電位測定

Zetasizer ZS90型激光粒度儀測定納米粒子的粒徑、PDI及Zeta電位，將制備的索拉非尼納米混懸液用蒸餾水稀釋10倍，進(jìn)行測定。結(jié)果見圖1，平均粒徑為（89.76±5.36） nm，平均PDI為（0.231±0.072），平均Zeta電位為（36.7±0.5） mV。

2.2 形態(tài)觀察

將制備的索拉非尼納米混懸液稀釋5倍，過膜，滴加到覆蓋碳膜的銅網(wǎng)上，干燥后用2%（W/V）的磷鎢酸染色，用濾紙吸去多余的液體，晾干后在JEM-2100（HR）高分辨透射電鏡下觀察形態(tài)，拍照。結(jié)果見圖2，可以看出，所制備的納米粒為均勻球形，粒徑較小且分布均勻。

2.3 物理穩(wěn)定性的檢測

將制備的索拉非尼納米混懸劑裝入棕色小瓶中，分別避光保存在4℃和室溫環(huán)境下，放置1個(gè)月。測定其放置前后粒徑和PDI的變化。粒徑和PDI變化見圖3。將制備的索拉非尼納米混懸劑放在4℃環(huán)境下，分別于30、60 d測定其粒徑大小和PDI，結(jié)果見圖4。

圖3顯示，索拉非尼納米混懸劑避光放于4℃下比放于室溫下的粒徑和PDI變化更小，更加穩(wěn)定。圖4可見，隨著放置時(shí)間延長，粒徑和PDI兩項(xiàng)指標(biāo)均有所增加，但變化都不是非常明顯；PDI雖然有所增加，但仍然保持在0.5以下，表明體系中少量粒子發(fā)生了聚集。

2.4 化學(xué)穩(wěn)定性的檢測

2.4.1 色譜條件 色譜柱為Inertsil ODS-3柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相乙酸銨緩沖液（20 mmol/L）-乙腈（28∶72），檢測波長266 nm，流速1.0 mL/min，柱溫40℃，進(jìn)樣量 20 μL。

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取索拉非尼對(duì)照品10 mg，置100 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解定容，然后用流動(dòng)相依次稀釋成濃度為1、5、10、15、20、25、30、40、50 μg/mL的一系列標(biāo)準(zhǔn)液，按以上色譜條件測定濃度，依次進(jìn)樣20 μL，記錄色譜峰面積。以峰面積（A）對(duì)質(zhì)量濃度（C）進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線：A = 78.862C-32.897（r = 0.9999），說明索拉非尼濃度在1～50 μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

分別在見光與避光的條件下，用HPLC測定在4℃放置下不同時(shí)間段內(nèi)索拉非尼納米混懸劑及索拉非尼原料藥溶解液的藥物濃度，描繪出其降解曲線，進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果見圖5。索拉非尼納米混懸劑在4℃避光條件下降解速度明顯降低，10 d內(nèi)降解了10%左右，以后趨于平穩(wěn)只是發(fā)生極少降解，可長期保存。在見光條件下，10 d內(nèi)降解30%左右，隨著時(shí)間延長，降解量逐漸增大；溶解狀態(tài)的索拉非尼藥物避光條件下10 d內(nèi)降解70%，見光條件下5 d內(nèi)降解80%，結(jié)果表明在混懸液中以納米粒子形式存在的藥物比溶解狀態(tài)的藥物穩(wěn)定，索拉非尼納米混懸劑的降解速度明顯降低，特別是在避光條件下，說明索拉非尼納米混懸劑顯著改善了此藥物的化學(xué)穩(wěn)定性。

3 討論

納米混懸劑作為一種新的制劑技術(shù)，它具有高飽和溶解度、黏膜吸附性、高溶出速率等特點(diǎn)，可有效提高難溶性藥物的藥效和生物利用度[13-14]。但納米混懸劑穩(wěn)定性較差是其最大的問題，很容易發(fā)生降解、沉降、聚集、變性等各種不穩(wěn)定現(xiàn)象[15-16]，給納米混懸劑的制備帶來了較大挑戰(zhàn)，是其被廣泛應(yīng)用的最大障礙。本實(shí)驗(yàn)對(duì)索拉非尼納米混懸劑的物理穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性進(jìn)行研究。

影響納米混懸劑的因素主要有穩(wěn)定劑類型、分散介質(zhì)和藥物自身介質(zhì)等。本實(shí)驗(yàn)已在前期工作中優(yōu)選出穩(wěn)定劑類型、分散介質(zhì)等，制備的索拉非尼納米混懸劑粒徑較小，分布均勻，穩(wěn)定性良好。在4℃和室溫條件下放置一段時(shí)間后，4℃下粒徑和PDI變化比室溫條件下小，說明索拉非尼納米混懸劑在4℃下比在室溫條件下更穩(wěn)定。這與奧斯特瓦爾德熟化現(xiàn)象有關(guān)，混懸劑溶液在總體上是飽和溶液，小微粒因溶解度大而不斷溶解，大微粒則因過飽和而不斷增長變大，這一過程被稱為奧斯特瓦爾德熟化[17]。van Eerdenbrugh等[18]在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)，奧斯特瓦爾德熟化與溫度密切相關(guān)，室溫條件下，納米混懸劑會(huì)發(fā)生奧斯特瓦爾德熟化，40℃的條件下奧斯特瓦爾德熟化現(xiàn)象增強(qiáng)，而較低的4℃條件下，奧斯特瓦爾德熟化減慢，甚至停止，所以索拉非尼納米混懸劑在4℃比在室溫條件下更穩(wěn)定。將索拉非尼制備成納米混懸劑，在相同條件下，降解速度比溶解狀態(tài)的索拉非尼慢很多，說明索拉非尼納米混懸劑顯著改善了此藥物的化學(xué)穩(wěn)定性。將藥物制成納米混懸劑，通過加入穩(wěn)定劑來抑制納米粒子的成長，穩(wěn)定劑一般通過立體穩(wěn)定、靜電穩(wěn)定和靜電立體穩(wěn)定3種機(jī)制達(dá)到對(duì)藥物分散體系的穩(wěn)定作用，防止粒子間的聚集[19]，所以將藥物制成納米混懸劑比溶解狀態(tài)更加穩(wěn)定。

納米混懸劑雖已被認(rèn)為是一種成熟的制劑技術(shù)，但是穩(wěn)定性問題仍是制約其發(fā)展的重要方面，要想使納米混懸劑向工業(yè)化發(fā)展，穩(wěn)定性首先是其亟待解決的問題，隨著制備方法的不斷改進(jìn)和粒子穩(wěn)定理論的不斷研究與深入，在不久的將來，一定會(huì)制備出穩(wěn)定性好、生物利用度高的納米混懸劑。

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（收稿日期：2014-12-11 本文編輯：李亞聰）