非小細胞肺癌患者術后組織中絲氨酸蛋白激酶抑制劑kazalⅠ型、CD147和E-cadherin的表達及意義

何秀娟 黃慶愿(武警青海總隊醫院內科，青海 西寧 80000)

非小細胞肺癌是與小細胞肺癌有明顯形態和基因表達差別。病變進展中多種基因和蛋白表達失調〔1〕。絲氨酸蛋白激酶抑制劑KazalⅠ型(SPINK1)又稱為腫瘤相關性的胰蛋白酶抑制劑，在惡性進展腫瘤中高表達，被認為與病變進程和預后相關〔2〕。白細胞分化抗原(CD)147作為免疫球蛋白家族的重要成員，可以在細胞表面表達，并發揮促進腫瘤生長的生物學作用〔3，4〕。上皮型黏附蛋白(E-cadherin)是參與細胞間連接和黏附的蛋白，在腫瘤中常表達下降或丟失〔5，6〕。本實驗檢測非小細胞肺癌患者術后組織SPINK1、CD147和E-cadherin的表達，分析其關系及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年1月至2013年12月我院確診并手術治療的非小細胞肺癌患者作為觀察組，留取患者的臨床資料及術后腫瘤組織的蠟塊，共103例，均符合WHO中關于非小細胞肺癌的診斷標準，并經病理科主治醫師再次閱片確診。其中男53例，女50例;年齡57～87歲，平均(67.8±6.9)歲。收集距腫瘤邊緣＞3 cm的正常支氣管黏膜組織76例作為對照組，其中男40例，女36例;年齡58～86歲，平均(66.7±6.1)歲。兩組在一般臨床資料的比較中差別無顯著性。

1.2 SPINK1、CD147和E-cadherin蛋白的檢測方法 試驗用SPINK1、CD147和 E-cadherin試劑均為濃縮液。在正式實驗前，SPINK1、CD147和E-cadherin均按不同比例稀釋后預實驗，選擇最理想的配比濃度正式實驗。SPINK1、CD147和E-cadherin蛋白檢測應用免疫組化二步法，DAB染色。實驗嚴格按說明書操作，并由病理科主管技師完成，嚴格質量控制。

1.3 SPINK1、CD147和 E-cadherin結果的判讀 SPINK1、CD147的陽性部位為細胞質，E-cadherin的陽性部位為細胞膜。選取5個高倍(400倍)視野，計算上皮細胞的總數和陽性細胞總數，計算陽性率。SPINK1、CD147和 E-cadherin均以陽性率≥5%計為陽性，以陽性率＜5%計為陰性。

1.4 統計學方法 應用SAS6.12統計軟件進行χ2檢驗、線性相關分析。

2 結果

2.1 兩組中SPINK1、CD147和E-cadherin的表達比較 與對照組比較，觀察組中SPINK1〔48.54%(50/103)vs 2.63%(2/76)〕、CD147〔68.93%(71/103)vs 13.16%(10/76)〕高表達、E-cadherin〔33.01%(34/103)vs 92.11%(70/76)〕低表達(均P＜0.000 1)。見表1。

2.2 觀察組SPINK1、CD147和E-cadherin在不同臨床特征中的表達差別 觀察組中SPINK1、CD147和E-cadherin的表達與腫瘤的最大徑、是否伴有壞死、胸膜累犯、淋巴結轉移和脈管浸潤相關。見表1。

表1 觀察組SPINK1、CD147和E-cadherin在不同臨床特征中的陽性表達差別〔n(%)〕

2.3 觀察組中SPINK1、CD147和E-cadherin表達的相關性觀察組中 SPINK1和 E-cadherin(r= －0.52，P=0.013 2)、CD147和E-cadherin(r=－0.45，P=0.038 6)的表達呈負相關。

3 討論

非小細胞肺癌是肺癌中最多見的類型，包括鱗癌、腺癌等。其危險因素較多，其中吸煙和職業暴露是重要的危險因素。近年相關研究認為復雜的遺傳學和分子生物學行為表達失調是重要的促進因素〔7〕。SPINK1最初作為一種胰蛋白酶抑制劑在胰腺組織和胰腺相關疾病中檢測到高表達，隨后學者在其他腫瘤中出發現其高表達〔8〕。由于SPINK1蛋白的結構和表皮生長因子有50%的同源性，因此其功能可能與表皮生長因子相似〔9〕。也有學者認為SPINK1可能具有生長因子和蛋白酶抑制的雙重作用特點，促進腫瘤的增殖及侵襲〔10，11〕。CD147作為細胞的黏附蛋白，不僅可以調節單羧酸轉運蛋白的活性，還對免疫應答、生殖等生理過程有一定影響〔12〕。CD147特異性的功能是在腫瘤細胞和間質的嵌合上。當CD147在腫瘤的表達升高時，使脫離原發灶的腫瘤細胞與間質和脈管的黏附作用增強，易于播散〔13，14〕。Wu 等〔15〕認為 CD147 可以通過轉化因子通路途徑促進上皮和間質的轉化，使腫瘤細胞更易于侵入間質，轉移潛能升高。與CD147一樣，E-cadherin也是機體的黏附蛋白，但是E-cadherin主要是分布于正常上皮細胞間，不僅在組織構成、細胞連接有重要作用，還對細胞間信息交換起重要作用〔16〕。腫瘤進展中E-cadherin表達下調，腫瘤細胞之間的黏附力下降、連接松動，為腫瘤細胞脫離原發灶創造了重要條件，此時轉移潛能增加〔17，18〕。

本研究結果提示SPINK1、CD147和E-cadherin異常表達可以促進腫瘤的發生過程。SPINK1和CD147均與E-cadherin的表達具有協同作用。SPINK1在腫瘤中高表達，可能是作為一種致病因子或一種修飾因子，降低了腫瘤發病的閾值或與其他的基因蛋白一起促進了腫瘤的發生〔19〕。也有學者認為是細胞癌變導致SPINK1蛋白部位及強度表達發生變化出現了這一結果〔20，21〕。本實驗結果提示SPINK1促進腫瘤進展時可能對E-cadherin進行一定的調節，使腫瘤上皮細胞間松動，細胞連接不穩固，易于播散。CD147與腫瘤的進展密切相關，研究認為CD147可通過增加透明質烷的分泌量來促進腫瘤細胞的增長，通過誘導血管內皮生長因子的產生來促進間質的血管新生〔22〕，也可能通過調節上皮細胞的連接使腫瘤細胞的生物學構成及功能發生變化〔23〕。本研究結果提示SPINK1、CD147和E-cadherin三種蛋白異常表達可以促進腫瘤的生長、胸膜脈管侵犯及淋巴結轉移。腫瘤性壞死、淋巴結轉移及脈管浸潤常提示腫瘤預后不良，因此SPINK1、CD147和E-cadherin的表達在一定程度可以提示患者的生物學行為和預后，即SPINK1和CD147高表達、E-cadherin低表達非小細胞肺癌患者的預后差。

綜上，非小細胞肺癌術后組織SPINK1和CD147高表達，E-cadherin低表達可以促進腫瘤的發生和進展，SPINK1和CD147在發揮作用過程中可能與對E-cadherin的調節有關。

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