整合素連接激酶、醌氧化還原酶-1和增殖細(xì)胞核抗原在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義

張書俊 (南陽市中心醫(yī)院普外科，河南 南陽 473000)

肝細(xì)胞癌病變進(jìn)展快，轉(zhuǎn)移率高。近來相關(guān)研究認(rèn)為肝細(xì)胞癌生物學(xué)行為與多種基因和蛋白的表達(dá)異常有關(guān)〔1〕。整合素連接激酶(ILK)能夠參與整合素、生長因子、WNT等信號傳導(dǎo)通路，與細(xì)胞的持續(xù)增殖、黏附性喪失、遷移及血管的生成可能有關(guān)〔2〕。NADPH:醌氧化還原酶1(NQO-1)是一種黃素酶，在不同腫瘤的表達(dá)不盡相同〔3，4〕，關(guān)于NQO-1在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與ILK和增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的關(guān)系尚未見報道。本研究關(guān)注肝細(xì)胞癌術(shù)后組織中ILK、NQO-1和PCNA的表達(dá)，探討其關(guān)系及臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2004年1月至2008年10月我院行肝細(xì)胞癌根治手術(shù)患者的術(shù)后蠟塊資料作為觀察組79例。納入均符合WHO中關(guān)于肝細(xì)胞癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。男40例，女39例;年齡50～79歲，平均65.4歲;高分化40例，中分化16例，低分化23例。術(shù)前均未進(jìn)行放、化療。同時選取距離腫瘤邊緣＞3 cm的正常肝組織55例作為對照組，其中男30例，女25例;年齡51～78歲，平均64.3歲。兩組一般資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 ILK、NQO-1和PCNA蛋白表達(dá)的檢測方法 ILK、NQO-1和PCNA蛋白的濃縮液均購自美國Santa Cruz公司。枸櫞酸抗原修復(fù)液、DAB顯色試劑等相關(guān)試劑盒均購自北京中杉金橋公司。ILK、NQO-1和PCNA依不同比例稀釋后進(jìn)行預(yù)實驗，并設(shè)陽性對照和陰性對照。選擇最理想的配比濃度進(jìn)行正式實驗。蛋白的檢測應(yīng)用免疫組化SP法。嚴(yán)格按實驗步驟進(jìn)行操作。嚴(yán)格質(zhì)量控制。

1.3 ILK、NQO-1和PCNA陽性的判讀方法 ILK、NQO-1的陽性表達(dá)均位于細(xì)胞質(zhì)中，PCNA的陽性表達(dá)位于細(xì)胞核中，以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應(yīng)細(xì)胞。計數(shù)5個高倍視野，計數(shù)總和，以陽性率≥25%為陽性，以陽性率＜25%為陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12軟件進(jìn)行t檢驗、χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 ILK、NQO-1和PCNA在兩組中表達(dá)的比較 觀察組ILK、NQO-1和PCNA表達(dá)的陽性率中明顯高于對照組(P＜0.000 1)。見表1。

表1 ILK、NQO-1和PCNA在兩組陽性表達(dá)的比較〔n(%)〕

2.2 ILK、NQO-1和PCNA的表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系 觀察組中ILK、NQO-1和PCNA的表達(dá)與腫瘤的分化程度、TNM分期、腫瘤最大徑及Ki67的表達(dá)相關(guān)。見表2。

表2 ILK、NQO-1和PCNA的表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系〔n(%)〕

2.3 肝細(xì)胞癌中ILK、NQO-1和PCNA表達(dá)的關(guān)系 ILK和PCNA(r=0.54，P=0.009 7)、NQO-1 和 PCNA(r=0.55，P=0.010 9)的表達(dá)均具有正相關(guān)性。

2.4 肝細(xì)胞癌中ILK、NQO-1和PCNA不同表達(dá)與患者生存時間的關(guān)系 觀察組中ILK、NQO-1和PCNA高表達(dá)患者的生存時間明顯短于低表達(dá)患者。見表3。

表3 肝細(xì)胞癌中ILK、NQO-1和PCNA不同表達(dá)與患者生存時間的關(guān)系(±s，個月)

表3 肝細(xì)胞癌中ILK、NQO-1和PCNA不同表達(dá)與患者生存時間的關(guān)系(±s，個月)

分組 n 生存時間 t值 P值ILK - 29 19.36±4.57 8.98 0.009 2+ 50 10.56±4.50 NQO-1 - 36 18.43±4.56 8.87 0.010 9+ 43 9.98±4.68 PCNA - 9 27.31±4.54 13.51 0.001 2+ 70 11.84±5.25

3 討論

肝細(xì)胞癌的進(jìn)展快，增殖指數(shù)高，轉(zhuǎn)移率高。近來人們關(guān)注ILK的表達(dá)與腫瘤的關(guān)系，并認(rèn)為ILK對腫瘤的進(jìn)展有一定促進(jìn)作用。ILK基因定位于染色體11p5.5～11p15.4，是一種相對分子質(zhì)量為59 kD的Ser/Thr蛋白激酶，通過介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，調(diào)控機(jī)體多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，參與細(xì)胞的生長、增殖、分化及凋亡過程〔5，6〕。有研究認(rèn)為ILK可以抑制蛋白激酶B的生物學(xué)活性，調(diào)控細(xì)胞周期及細(xì)胞的凋亡過程，影響腫瘤的生長〔7〕。NQO-1蛋白是一種胞質(zhì)黃素酶，其基因定位于16q22染色體，在正常肝細(xì)胞中低表達(dá)，當(dāng)其表達(dá)升高時，在一定程度上與腫瘤發(fā)生相關(guān)〔8〕。有研究認(rèn)為不同NQO-1基因亞型編碼的酶類呈現(xiàn)不同的活性〔9〕。如由TT純合子誘導(dǎo)的NQO-1活性失調(diào)，可以引起肝細(xì)胞對外源性致腫瘤物質(zhì)的解毒功能下降〔10〕。也有研究則認(rèn)為NQO-1可以作為一個氧化應(yīng)激反應(yīng)調(diào)節(jié)因子，對惡性腫瘤的進(jìn)展起一定的調(diào)節(jié)作用〔11〕。PCNA是一種非組核蛋白，作為一種細(xì)胞增殖的上調(diào)因子，通過與周期性蛋白激酶結(jié)合引起細(xì)胞的增殖過程〔12〕。有學(xué)者認(rèn)為PCNA為DNA聚合酶的輔助因子，直接參與DNA的合成，尤其是DNA增殖及表達(dá)失調(diào)最明顯的腫瘤細(xì)胞〔13〕。有學(xué)者認(rèn)為PCNA表達(dá)較Ki67要理想，可以囊括Ki67陽性表達(dá)的所有細(xì)胞，因此其標(biāo)記增殖更加全面〔14〕。

本實驗結(jié)果提示ILK、NQO-1和PCNA表達(dá)增強(qiáng)對病變進(jìn)展有明顯的促進(jìn)作用，三種蛋白直接和間接作用均能誘導(dǎo)腫瘤惡變。ILK、NQO-1和PCNA對調(diào)節(jié)腫瘤的分化有重要價值，分化是細(xì)胞由幼稚到成熟的過程，也是細(xì)胞惡變的重要過程，調(diào)節(jié)細(xì)胞分化是機(jī)體內(nèi)在的機(jī)制，由于蛋白表達(dá)失調(diào)的明顯影響，使腫瘤細(xì)胞停滯在低分化或未分化狀態(tài)，使腫瘤細(xì)胞的成熟過程受到更多的影響，也使腫瘤的惡性程度增高〔15，16〕。由于腫瘤的體積與腫瘤的生長密切相關(guān)，尤其是生長速度快的惡性腫瘤，而本實驗結(jié)果顯示ILK、NQO-1和PCNA均與腫瘤最大徑和腫瘤的TNM分期相關(guān)，因此三者在一定程度上參與腫瘤的生長過程。由于以上因素均與腫瘤的預(yù)后相關(guān)，因此ILK、NQO-1和PCNA的表達(dá)可能對判斷腫瘤的預(yù)后有一定價值，同時ILK、NQO-1和PCNA不同表達(dá)患者的生存時間比較的結(jié)果直接證實了上述結(jié)論，即ILK、NQO-1和PCNA高表達(dá)患者的預(yù)后差。本實驗結(jié)果直接證實了ILK、NQO-1對增殖的促進(jìn)作用，尤其是PCNA與Ki67表達(dá)更趨一致性，提示ILK、NQO-1在對腫瘤影響過程中，參與了細(xì)胞的增殖過程，尤其是失控性增殖反應(yīng)過程。本文提示ILK和NQO-1高表達(dá)時可以明顯刺激細(xì)胞增殖，此時PCNA表達(dá)升高，腫瘤體積增大。也有觀點認(rèn)為ILK、NQO-1激活后，凋亡信號傳導(dǎo)受到影響，正常細(xì)胞的不斷增殖，而凋亡受到阻滯，細(xì)胞逐漸惡變〔17，18〕。

綜上，肝細(xì)胞癌中ILK、NQO-1和PCNA高表達(dá)，對病變的進(jìn)展有重要影響，術(shù)后聯(lián)合檢測ILK、NQO-1和PCNA的表達(dá)可能對判斷生物學(xué)行為和預(yù)后有一定價值。ILK、NQO-1對PCNA表達(dá)的增殖有直接作用，這可能是兩種蛋白的作用機(jī)制之一。

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