自體骨髓間充質干細胞動脈和靜脈移植治療急性腦梗死的療效對比

王 旭 張志彬 楊 宏 賈芙蓉 張麗艷 榮繼平(解放軍第208醫院神經內二科，吉林 長春 130062)

間充質干細胞(MSCs)有高度的自我復制和多向分化潛能，在一定條件下可分化為神經元樣細胞。大量實驗表明，MSCs移植能明顯改善腦梗死患者的神經功能〔1〕。但具體經何種途徑移植療效更好尚無定論，本文對比動脈和靜脈移植兩種途徑的療效。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2010年1月至2012年10月本科住院治療的腦梗死患者112例。納入標準:①根據臨床表現和頭部CT、磁共振成像(MRI)確診。均符合1995年全國第4屆腦血管病會議制定的診斷標準〔2〕。②首次發病，發病時間20 d～1個月，病情穩定者。③患者知情同意，經醫院倫理委員會批準。排除合并癲癇腫瘤等病例，無明顯肝腎功能不全。男65例，女47例;年齡42～68〔平均(53.8±10.7)〕歲;隨機分為動脈移植組和靜脈移植組，每組56例。兩組患者的年齡、性別構成比例、發病部位、病情輕重等差異均無顯著性意義(P＞0.05)，具有可比性。末次發病至接受骨髓MSCsBMSCs時間為＜1個月，平均24.5 d。

1.2 干細胞提取方法 兩組治療前給予重組人粒細胞集落刺激因子150 μg皮下注射，1次/d，連用3～5 d，待血常規白細胞升高達(20～30)×109/L左右后可抽取自體骨髓200 ml。自體骨髓經干細胞分離試劑盒處理獲取BMSCs。

醫生在嚴格無菌狀態下采用局麻通過骨穿抽取自體骨髓200 ml(枸櫞酸鈉抗凝)。在超凈工作臺內將自體骨髓加至干細胞提取專用試劑盒中，應用寧夏中聯達生物有限公司的骨髓、臍帶血處理試劑盒，經過去除紅細胞，離心、提取、清洗等步驟，獲得細胞懸液。然后采用流式細胞儀監測法，并進行計數。原則上在一定范圍內一次干細胞的數量越多效果越好。但由于來源受限，本組病人一般每次細胞數在(1～2)×108個左右。

1.3 治療方法 靜脈組干細胞提取后直接用輸血器回輸，動脈組采用股動脈插管，數字減影血管照影(DSA)下介入尋找責任血管，將干細胞直接注射到病變血管。

1.4 功能測評 采用國際通用的美國國立衛生醫院神經功能缺損評分(NIHSS)方法，于患者治療前、治療后1個月、3個月進行評定。

1.5 統計學方法 應用SPSS17.0軟件進行分析，計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗。

2 結果

2.1 兩組治療前后NIHSS評分比較 動脈組治療后1、3個月NIHSS評分均低于靜脈組(P＜0.05)。見表1。

2.2 不良反應 兩組均未出現發熱、栓塞等不良反應。

表1 兩組治療前后NIHSS的比較(±s，分)

表1 兩組治療前后NIHSS的比較(±s，分)

與治療前比較:1)P＜0.05;與靜脈組比較:2)P＜0.05

個月動脈組 25.29±1.27 10.24±2.631)2) 5.54±3.821)2)組別 治療前 治療后1個月 治療后3靜脈組 24.61±5.43 11.38±6.221) 7.23±3.411)

3 討論

MSCs是具有多向分化潛能的成體干細胞。MSCs來源于中胚層間充質，主要存在于全身結締組織和器官間質中，以骨髓組織中含量最豐富。MSCs具有可塑性和多向分化潛能。MSCs有以下特征:①有增殖能力。②在整個生命過程中具有自我維持或自我更新的能力。③能通過擴增祖細胞而產生大量的后代。④具有向多細胞系分化的能力。⑤取材方便，細胞來源比較充分。⑥能通過血腦屏障，可經過靜脈或動脈移植。

關于MSCs移植治療腦梗死的機制基本明確，首先是MSCs在一定的條件下，可經過誘導在體內和體外均可分化為神經元樣細胞，并表達一些神經標志性蛋白如神經特異性烯醇化酶、Neurofilament-M〔3〕。Shahar等〔4～6〕移植人的 MSCs 能在大鼠體內存活增殖并遷移至腦梗死缺血病灶處，表達神經元或星形膠質細胞標志物，長期觀察可明顯改善大鼠的神經功能。MSCs在體內有治療作用，關鍵是能分泌細胞因子和其他因子，特別是趨化因子，這些活性物質通過趨化損傷周圍或遠處的受體細胞，來調節細胞增殖分化功能，從而參與組織修復過程〔7〕。因此，兩組干細胞移植治療急性腦梗死在正常治療結束后又均取得穩定療效。本組MSCs來自于自體骨髓，來源較充分，提取方便，容易獲得，不存在倫理道德問題。本組結果表明兩組移植均取得較好療效，且均未出現發熱、栓塞等不良反應，考慮與采用輸血器回輸干細胞有關。動脈移植是采用介入療法，經股動脈穿刺，在DSA影像下，將導管超選入病變血管，將MSCs緩慢注入，時間30 min左右。動脈移植能使局部干細胞濃度達到最高，定位精準，從而達到最大的治療效果。干細胞在病灶局部生根發芽，不經過體循環，因經體循環后可能有一部分細胞會被機體的免疫系統清除，從而保證更大的存活率和增殖率。這也許是動脈移植優于靜脈的原因。

1 孟憲國，朱士文，高 華，等.自體骨髓間充質干細胞移植治療腦梗死6個月隨訪〔J〕.中國組織工程研究與臨床康復，2009;13(32):6374-8.

2 中華神經科學會，中華神經外科學會.各類腦血管疾病診斷要點〔J〕.中華神經科雜志，1996;29(6):379.

3 Woodbury D，Schwarz EJ，Prockop DJ，et al.Adult rat and human bone marrow stromal cells differentiate into neurons〔J〕.J Neurosci Res，2000;61(4):364-70.

4 Shahar T，Pace C，Henry RW.Epoxy platination of biological tissue:vis-Docta EP73 technique〔J〕.J Int Soc Plastination，2007;22:46-9.

5 Mahmood A，Lu D，Chopp M.Marrow stromal cell transplantation after traumatic brain injury promotes celluar proliferation within the brain〔J〕.Neurosurgery，2004;55(5):1185-93.

6 Tolar J，Le Blanc K，Keating A，et al.Concise review:hitting the right spot with mesenchymal stromal cells〔J〕.Stem Cells.2010;28(8):1446-55.

7 Hayase M，Kitada M，Wakao S，et al.Committed neural progenitor cells derived from genetically modified bone marrow stromal cells ameliorate deficits in a rat model of stroke〔J〕.J Cereb Blood Flow Metab，2009;29(8):1409-20.