黃芩的抑菌作用及有效化學(xué)成分的探討

王傳娟 (山東省臨沂市蘭山區(qū)人民醫(yī)院，山東臨沂276000)

0 引言

黃芩也稱山茶根、黃芩茶，為唇形科植物，多年生草本，主根長大，略呈圓錐狀，外皮褐色，用作藥物時具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎等作用.常用于濕溫、暑溫胸悶嘔惡、濕熱痞滿、瀉痢、黃疸、肺熱咳嗽、高熱煩渴、血熱吐衄、癰腫瘡毒、胎動不安等［1］.用作中藥時具有抗菌、抗真菌、抗病毒、抗炎抗變態(tài)反應(yīng)、抗血小板聚集及抗凝、降血脂的作用.本研究以超聲法和水煮法對黃芩抑菌作用及有效化學(xué)成分的提取展開分析.

1 材料和方法

1.1 儀器與試劑 選用上海予華儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-501，成都艾普瑞實驗設(shè)備有限公司生產(chǎn)的APR-GM-ZYT-5超凈工作臺，上海一恒科學(xué)儀器有限公司的DHP-9012電熱恒溫培養(yǎng)箱，深圳市力斯特超聲波設(shè)備有限公司的LST-M1超聲波發(fā)生器，按照20、800 及1100 kHz發(fā)生頻率［2］.

1.2 藥品和試劑 選用寶芝堂購入的黃芩中藥材料，經(jīng)過檢測具有黃芩的所有作用和功效，符合研究條件.選用廣東環(huán)凱生產(chǎn)的MH肉湯、瓊脂批樣機，其他試劑均為分析純.

1.3 菌種 選用中國食品藥品檢驗所提供的實驗用腸炎沙門氏菌ATCC13076.

1.4 提取方法

1.4.1 超聲法 取50 g以上黃芩飲片，置于60℃的容器中進行烘干，取出并粉碎后使用10目篩過濾.用天平精確稱取50 g黃芩粗粉，加入10倍量的水，選用20 kHz頻率的超聲發(fā)生器進行超聲處理，在處理過程中要隨時補充水分，保證其溶液液面在同一高度，超聲處理1h后過濾.以鹽酸調(diào)節(jié)濾液 pH至1～2，并置入80℃熱水中預(yù)熱，將提取出的黃色結(jié)晶物過濾，向沉淀物中加入蒸餾水并攪拌，最后向溶液中加入40%的氫氧化鈉，溶解黃芩素后將溶液pH調(diào)節(jié)至6～7.待溶液pH達到要求后加入等量95%濃度的乙醇，加熱至50℃后再次過濾，用10%鹽酸調(diào)節(jié)濾液pH至2～3，靜置于50℃水浴中30 min，待完全析出結(jié)晶物后，過濾得到結(jié)晶物，并用清水沖洗至中性，置入60℃烘干機中干燥至恒重，以此獲取黃芩結(jié)晶物，最后配置為10 mg/mL的溶液［3］.

1.4.2 水煮法 取50 g以上黃芩，經(jīng)碾壓制成粉末，通過系統(tǒng)提取法，獲得黃芩提取物，稱取50 g黃芩粉末后加入1 kg蒸餾水并加熱，經(jīng)過煎煮、過濾等操作，獲取溶液后加入濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH至中性，最后加入等體積的95%乙醇，加熱至50℃后再次過濾，用10%鹽酸調(diào)節(jié)濾液pH至2～3，靜置于50℃水浴中30 min，待完全析出結(jié)晶物后，過濾得到結(jié)晶物，并用清水沖洗至中性，置入60℃烘干機中干燥至恒重，以此獲取黃芩結(jié)晶物，最后配置為10 mg/mL的溶液.

1.5 評價指標 將3 mL實驗用腸炎沙門氏菌接種于MH肉湯中，并置于37℃環(huán)境下培養(yǎng)，18 h后將菌液稀釋至濁度105FU/mL，然后使用二倍稀釋法進行體外抑菌實驗，每個濃度的實驗均重復(fù)進行3次.

2 結(jié)果

2.1 最低抑菌濃度MIC比較 經(jīng)過實驗操作研究，驗證了黃芩當中的結(jié)晶物所融合的提取液存在抑菌作用，而超聲法提取的黃芩抑菌效果明顯高于水煮法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05，表1).

表1 兩種方法黃芩提取液最低抑菌濃度MIC比較(mg/mL)

2.2 兩組提取結(jié)晶物的抑菌濃度比較 通過兩種不同提取方法所獲得的提取液對腸炎沙門氏菌的抑菌效果也有所不同，在具有抑菌效果的同時，超聲法提取黃芩結(jié)晶物的抑菌效果明顯高于水煮法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05，表2).

表2 兩組提取結(jié)晶物的抑菌濃度比較 (mg/mL)

3 討論

黃芩根含黃芩甙元、黃芩甙、漢黃芩素、漢黃芩甙和黃芩新素，其藥理作用有抗炎抗變態(tài)反應(yīng)、抗微生物、解熱、降壓、利尿等.《綱目》中提到:“治風(fēng)熱濕熱頭疼，奔豚熱痛，火咳，肺痿喉腥，諸失血.”說明，黃芩的抑菌作用是其最有價值的.黃芩甙元能抑制離體氣管及回腸之Sehultz-Dale反應(yīng)，對豚鼠被動性皮膚過敏反應(yīng)、組織胺皮膚反應(yīng)亦表現(xiàn)抑制，在抗變態(tài)反應(yīng)方面，甙元較甙作用強.黃芩有較廣的抗菌譜，在試管內(nèi)對痢疾桿菌、白喉桿菌、綠膿桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌以及腦膜炎球菌等均有抑制作用，煎劑作喉頭噴霧，對腦膜炎帶菌者亦有效.黃芩煎劑100%濃度，平板實驗法對痢疾桿菌、傷害桿菌、副傷寒桿菌、霍亂弧菌等有明顯的抑制作用.采用黃芩煎劑試管法試驗，1∶1280濃度可抑制傷寒桿菌、溶血性鏈球菌，1∶80濃度可抑制宋內(nèi)氏痢疾桿菌.黃芩煎液，試管斜面法試驗，4%濃度抑制狗小牙胞菌及堇色毛癬菌.黃芩煎劑25%～100%濃度，體外試驗可抑制乙型肝炎病毒DNA復(fù)制.因此，其抑菌作用顯而易見.

在臨床或?qū)嶒灥倪^程中，物質(zhì)的相互作用存在一定的制約因素，尤其對于植物自身所包含的多種多樣的制約因素，植物有效成分的提取方法不同，對其自身造成的破壞及影響也是不同的.黃芩當中的有效成分為抑菌成分，近年來如何有效提取出黃芩的有效抑菌成分成為人們關(guān)注的焦點.傳統(tǒng)提取黃芩中黃芩苷的方法為水煮法，通過水煎煮、烘干等方式，但這種方法的提取時間較長且提取效率較低.為了提高黃芩苷的提取率，超聲法是目前比較受關(guān)注的方法［4］.

本研究結(jié)果顯示，超聲法提取黃芩的抑菌效果顯著高于水煮法，且提取結(jié)晶物的抑菌效果明顯高于水煮法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05).表明，超聲法提取黃芩抑菌效果優(yōu)于水煮法，更利于分離黃芩的有效成分.含多種黃酮類化合物，主要為黃芩甙(baicalin)，黃芩素(baicalein)，漢黃芩甙(wogonoside)，漢黃芩素(wogonin)，7-甲氧基黃芩素，7-甲氧基去甲基漢黃芩素，黃芩黃酮Ⅰ，黃芩黃酮Ⅱ.近年來，黃芩的有效成分中，無論是單用還是聯(lián)合使用都表現(xiàn)出極強的抗菌功效，因此對其抗菌作用的研究進入了深入階段，對黃芩藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機制的研究更是為研究新型抗菌藥物開辟了新方向.

綜上所述，黃芩具有良好的抑菌作用，通過超聲法可以有效提取出黃芩中的抑菌成分，值得臨床推廣.

［1］郭京華.淺析黃芩有效化學(xué)成分及抑菌作用［J］.中國實用醫(yī)藥，2012，7(16):195-196.

［2］董 毅.正品黃芩與甘肅黃芩有效化學(xué)成分及抑菌作用的比較研究［J］.中國中醫(yī)藥科技，2010，17(3):226-228.

［3］劉國華，張延敏.黃芩有效化學(xué)成分及抑菌作用分析［J］.中國實用醫(yī)藥，2012，7(6):168-169.

［4］黃愛萍.黃芩有效化學(xué)成分及抑菌作用的研究分析［J］.光明中醫(yī)，2011，26(7):1356-1357.