結核菌特異性抗原ESAT-6及CFP-10在肺結核及肺炎患者中的診斷價值

王　霖

結核菌特異性抗原ESAT-6及CFP-10在肺結核及肺炎患者中的診斷價值

王霖

【摘要】目的 分析結核菌特異性抗原ESAT-6及CFP-10在肺結核及肺炎患者中的診斷價值。方法 將48例肺結核患者作為觀察組，30例肺炎患者作為對照組，分別進行PPD及ELISA實驗，對兩組患者的結核菌特異性抗原在兩種疾病中的診斷價值進行分析。結果 經ELESA實驗檢測，觀察組結核菌陽性率、特異度及靈敏度分別為87．50%、93．75%、89．58%；對照組結核菌陽性率、特異度及靈敏度分別為60．00%、66．67%、70．00%；組間比較差異具有統計學意義（P＜0．05）。經PPD實驗檢測，觀察組結核菌陽性率、特異度及靈敏度分別為45．83%、50．00%、47．92%；對照組結核菌陽性率、特異度及靈敏度分別為46．67%、50．00%、53．33%；組間比較差異無統計學意義（P＞0．05）。結論采用ELISA法對肺結核及肺炎患者ESAT-6及CFP-10抗原進行檢測可鑒別兩者的不同，與PPD法相比，ELISA法在肺結核及肺炎的鑒別中診斷價值更優。

【關鍵詞】結核菌特異性抗原；ESAT-6；CFP-10；肺結核；肺炎

Objective To evaluate the value of Mycobacterium tuberculosis specific antigen ESAT-6 and CFP-10 in the diagnosis of pulmonary tuberculosis and pneumonia patients． Methods 48 cases of patients with pulmonary tuberculosis as the observation group，30 cases of patients with pneumonia as control group，PPD and ELISA experiments were performed and the diagnostic value of two groups of patients with tuberculosis specific antigen in the two kinds of diseases were analyzed． Results By ELISA assay to observe the Mycobacterium tuberculosis positive rate，specificity and sensitivity were 87．50% and 93．75% and 89．58%． Control group TB positive rate，specificity and sensitivity were 60．00%， 66．67%， 70．00%，inter group had significant difference（P＜ 0．05）． The PPD test，observation group TB positive rate，sensitivity and specificity of 45．83%，50．00%， 47．92% respectively，control group TB positive rate，specificity and sensitivity were 46．67%，50．00%，53．33%，and inter group had no significant difference（P＞0．05）．Conclusion ELISA method can be used to detect the ESAT-6 and CFP-10 antigen in patients with pulmonary tuberculosis and pneumonia，and it can be used to distinguish the difference between ELISA and PPD．

【Key words】Mycobacterium tuberculosis specific antigen，ESAT-6，CFP-10，Pulmonary tuberculosis，Pneumonia

肺結核在我國的發病率呈逐年上升的趨勢，是臨床死亡率和感染率最高的傳染性疾病，該病的快速診斷是治療和控制的關鍵?，F階段，臨床主要采用結核菌素試驗及細菌學檢查對該病進行診斷，單因結核菌的生長特點及卡介苗接種的廣泛使用，采用上述方式診斷肺結核具有一定的局限性［1］。ESAT-6及CFP-10是結核菌特異性低分子蛋白，僅存在于致病性的結合桿菌中，可對機體進行刺激，促進機體產生特異性較強的免疫球蛋白。因此，臨床可結合兩種抗原的特性，對肺結核及肺炎進行診斷和鑒別［2-3］。本組研究中，采用PPD及ELISA實驗對肺結核及肺炎患者血清中ESAT-6及CFP-10抗原的含量進行檢測和分析，現報道如下。

1　資料與方法

1.1 一般資料

收集我院2014年2月～2015年7月收治的48例肺結核患者及30例肺炎患者作為研究對象，患者均符合結核病學分會制定的肺結核診斷標準和呼吸病學會制定的肺炎診斷標準，經白細胞計數、結核菌素實驗及影像學檢查確診［4］。入選標準：初治者尚未服用結核藥物；復診的患者使用結核藥物的時間不超過1年。肺結核患者為觀察組，其中男性30例，女性18例；年齡分布為45 ～74歲，平均年齡為（60.4±2.3）歲；病程為3個月～6年，平均為（2.4±0.4）年。肺炎組患者為對照組，其中男性20例，女性10例；年齡分布為47～76歲，平均年齡為（60.5±2.1）歲；病程為2個月～7年，平均為（2.3±0.5）年。兩組患者性別構成、年齡等一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法

兩組患者均在清晨空腹抽取靜脈血作為標本，速度為3 000 轉/min進行離心，時間為3 min，將血清分離后，在零下20℃的環境下保存。先進行ELISA實驗，取100 μl濃度各異的標準品和血清標本放入反應孔中，在溫度為25℃的環境下放置1 h。沖洗3次后，加入酶標記的抗體，在溫度為25℃的環境下放置1 h。再沖洗3次，放入顯色液，20 min后在每個孔中加入劑量為100 μl的終止液體，搖晃均勻后采用酶標儀對各孔溶液的吸光度值進行測定。結果判定方法：將試劑盒中的標準品作為定性值，顏色較深為陽性，顏色較淡為陰性［5］。

結核菌素實驗方法：采用TST法在左側前臂曲側1/3處，使用0.1 ml菌素進行皮內注射，用10 mm長的26號針頭及1 ml注射器，在注射后可立即出現凸起的皮丘，可見清楚的邊界，在上面出現明顯的凹陷地方，實驗后72 h左右可見結果。結果判定方法：用手指觸摸硬結的邊緣，對硬結的平均直徑進行測量和計算，直徑不超過4 mm為陰性，4 mm以上為陽性［6-7］。

1.3 統計學分析

使用統計學軟件包SPSS 20.0實現全部數據的分析和處理，用率表示計數資料，組間比較用χ2檢測，P＜0.05提示兩組差異具有統計學意義。

2　結果

2.1 兩組患者ELISA實驗結果分析

經ELISA實驗，觀察組與對照組結核菌檢測陽性率、特異度和靈敏度的比較差異差異具有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1　兩組患者ELESA實驗結果比較n［%］

2.2 兩組患者PPD實驗結果分析

經PPD實驗檢測，觀察組與對照組結核菌陽性率、特異度及靈敏度的檢測差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2　兩組患者PPD實驗結果比較n［%］

3　討論

結核病是目前死亡率及感染率最高的傳染性疾病之一。結核病診斷的延誤可對患者的健康產生嚴重影響，同時增加了結核病傳播的幾率［8］。肺炎也是臨床常見的感染性疾病，嚴重者可能出現全身炎性變化，并進展為肺結核。目前，臨床多采用結核菌培養、痰涂片鏡檢及影像學等相關實驗對肺結核進行診斷，單因結核分歧桿菌自身的生長特點及卡介苗接種的廣泛使用，使得一些方法對結核病的診斷具有某些限制，無法進行準確判斷。再加上因多種因素的影響，肺結核的臨床表現并不十分典型，部分患者痰中含菌量較少或無痰［9］。另外，結核分歧桿菌的耐藥性不斷上升，HIV陽性患者在合并結核菌感染后，其臨床表現與單純的結核病差異大，傳統診斷結核的方式無法滿足患者臨床診斷的需要，因此，需探索新的、特異性較高的診斷方式對結核病及肺炎進行診斷［10］。

ESAT-6是致病性結核桿菌中特異性較低的分泌性蛋白，可對機體產生刺激，進而誘發特異性免疫球蛋白的生成。該蛋白僅存于致病性結核桿菌中，如非洲、牛型及人型分歧桿菌中，但是卡介苗及其他非致病性分歧桿菌中則不包括這類物質。ESAT-6可對機體產生刺激，從而產生特異性較高的免疫球蛋白，利用其特性，可采用免疫檢測法對患者血清抗原及抗體含量進行檢測。相關研究表明，采用ELISA法對患者血清抗原及抗體的含量進行檢測，可對結核菌感染及接種卡介苗進行區分，進而進行科學、合理的治療［11］。CFP-10是上世紀末鑒定出的低分子質量蛋白，特異性較高，可被γ干擾素識別，該抗原可作為T細胞的診斷抗原。有研究稱，聯合檢測ESAT-6及CFP-10將兩種單一抗原的優勢結合在一起，并可刺激外周血單個核細胞的表位，產生大量IFN-γ，產生更為強大的活化能力，與單一抗原檢測相比，敏感度及特異度更高；經證實，聯合檢測可有效將肺結核疾病的特異性提升至97%，敏感性提升至90%。本組研究中，兩組患者診斷的靈敏度及特異度低于前人研究，可能與樣本數量較少，及試劑選擇、操作方式相關。

本組研究中，分別采用ELISA法及PPD法聯合檢測ESAT-6 及CFP-10，對肺結核及肺炎患者的血清標本進行檢測，并進行統計學分析，對兩種實驗方式的可行性進行評價。進行ELISA檢測時，肺結核患者結核菌陽性率、特異度及靈敏度較高，提示ELISA法可作為鑒別肺結核及肺炎的重要依據。對PPD實驗檢測結果進行統計學分析可得，肺結核患者及肺炎患者結核菌陽性率、特異度及靈敏度比較差異無統計學意義，原因可能在于受到卡介苗的影響。

本實驗為定性實驗，因此采用定性的方法對本組研究結果進行判定，實驗讀取的數據與結核菌特異性抗原呈正比關系，在理論上數值的高低可對感染程度進行反應，數值越高對診斷結果的意義越大，在病例治療期間，可對該數值進行監測，從而診斷結核的治療情況。其中最有價值的部分是對結核菌抗原的研究，可進一步分析結核菌的耐藥性，但是本實驗受到人為和環境因素的影響，實驗的標準樣數值有所不同，因此無數值作為監測標準，有待進一步研究發現［12］。本研究的優勢在于操作簡單，結果判定容易，無需特殊的專業技術；無交叉反應，對BCG接種者及感染肺結核的患者均可適用；在體外進行血清檢驗，不受限制，無危險，無需回診。該方式同時適用于所有結核菌檢驗，可提前篩檢出感染的患者，在極大程度上預防了病菌的擴散，也可廣泛用于一般人的健康檢查中。

綜上所述，采用ELISA法對肺結核及肺炎患者ESAT-6及CFP-10抗原進行檢測可鑒別兩者的不同，與PPD法相比，ELISA法在肺結核及肺炎的鑒別診斷中更優。

參考文獻

［1］ 趙淑杰，胡旭，崔楊，等． 老年肺結核患者呼吸機相關性肺炎的病原菌特點與危險因素分析［J］． 中華醫院感染學雜志，2015，25（13）：3002-3004．

［2］ 趙紅梅，張放． 結核分枝桿菌特異性抗原檢測在臨床診斷中的意義［J］． 中國衛生標準管理，2015，6（1）：36-37．

［3］ 劉艷華，王若，程小星． 結核分枝桿菌早期分泌抗原對人單核細胞活化T細胞核因子5表達的影響［J］． 中華結核和呼吸雜志，2015，38（4）：290-293．

［4］ 李月翠，胡偉躍，周晶，等． CT聯合結核分枝桿菌感染T細胞斑點實驗對涂陰肺結核的診斷價值［J］． 國際流行病傳染病學雜志，2015，42（2）：139-140．

［5］ 張麗帆，劉曉清，高微微，等． 重組結核分枝桿菌11000蛋白特異性T細胞反應診斷活動性結核病的應用價值［J］． 中華醫學雜志，2014，94（15）：1161-1164．

［6］ 曹彥，吳冬梅，王心靜，等． 肺結核患者外周血CD4+、CD8+T細胞Blimp-1表達下降［J］． 臨床肺科雜志，2015，20（5）：777-780．

［7］ 劉紅，黃永杰，王靜，等． 結核感染T細胞斑點試驗在意思結核病患者診斷中的價值研究［J］． 中華結核和呼吸雜志，2014，37 （3）：192-196．

［8］ 陸建紅，陳國軍，杜開齊，等． 結核T細胞酶聯免疫斑點試驗快速診斷肺外結合感染的應用價值［J］． 中國綜合臨床，2014，30 （9）：945-948．

［9］ 范俊，秦世炳，賈紅彥，等． 結核感染T細胞酶聯免疫斑點試驗與結核抗體檢測在骨關節結核輔助診斷中的價值［J］． 中國防癆雜志，2014，36（10）：884-887．

［10］ 原艷明，王仲元，王心靜，等． 結核分歧桿菌抗原特異反應性白細胞介素-22在結核性胸膜炎鑒別診斷中的應用［J］． 現代儀器與醫療，2014，18（3）：1-3．

［11］ 張俊榮，徐佳楠，陳琦偉，等． 結核分歧桿菌重組蛋白CFP-10-ESAT-6-PPE68的表達、純化與多克隆抗體的制備［J］． 熱帶醫學雜志，2014，14（1）：46-51．

［12］ 陳翠翠，葉娟，趙俊偉，等． 復合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv0315在活動性肺結核輔助診斷中的價值［J］． 鄭州大學學報（醫學版），2014，49（2）：211-214．

The Diagnostic Value of Mycobacterium Tuberculosis Specific Antigen ESAT-6 and CFP-10 in Patients With Pulmonary Tuberculosis and Pneumonia

WANG Lin Third People＇s Hospital of Kunming City（Kunming Tuberculosis Prevention and Control Center），Kunming 650301，China

【Abstract】

【中圖分類號】R521

【文獻標識碼】A

【文章編號】1674-9316（2015）32-0172-02

doi：10．3969/j．issn．1674-9316．2015．32．121

作者單位：650301 昆明市第三人民醫院（昆明結核病防治院）